黃柴安胃膠囊的質(zhì)量控制

南 京 中 醫(yī) 藥 大 學本 科 生 畢 業(yè) 論 文藥 學 院 中藥學 專業(yè) 04 年級學 號 901004123 學生姓名 范 長 敬 實習單位 連云港市中醫(yī)院 論文題目 黃柴安胃膠囊的質(zhì)量控制指導老師 李家樓 起止時間 2008.01.22-2008.06.20 二OO八 年 六 月 六 日黃柴安胃膠囊的質(zhì)量控制范長敬（南京中醫(yī)藥大學藥學院04級中藥6班 901004123）【摘要】目的: 建立黃柴安胃膠囊的制定質(zhì)量控制方法并制定標準。方法 ：應用顯微鑒別法對黃柴安胃膠囊中烏賊骨、黃連、元胡進行顯微鑒別；用薄層色譜法對黃柴安胃膠囊中黃芩、黃連、柴胡進行定性鑒別；并用紫外分光光度法對黃柴安胃膠囊中鹽酸小檗堿進行含量測定。結(jié)果：黃柴安胃膠囊中鹽酸小檗堿的平均含量為0.2379mg/g，線性回歸方程為y=5.59c+0.3067 ( r=0.9998 n=5),平均回收率為88.62% ，RSD=3.08%。結(jié)論：本方法可以用于黃柴安胃膠囊的質(zhì)量控制.【關鍵詞】黃柴安胃膠囊，質(zhì)量標準，鹽酸小檗堿，薄層色譜， 紫外分光光度法【Abstract】 Huang Chai An objective of the establishment of the development of gastric capsule quality control methods and to develop standards. Methods ：microscopic identification of the yellow capsule in the stomach Chaian cuttlefish bone, berberine, Yuan Hu to microscopic identification; TLC with the yellow capsule in the stomach Chaian baicalin, berberine, Bupleurum qualitative identification; And by UV spectrophotometry of yellow capsule in the stomach Chaian berberine a determination of Huanglian. Results： Huang Chai An outcome of berberine in the stomach capsule of the average levels of 0.2511 mg / g, linear regression equation for Y = 5.59C+0.3067 ( = 0.9998, n = 5 ), the average recovery rate was 89.43%, RSD = 1.71%. Conclusion ：This method can be used for Wong Chai An stomach capsule quality control. 【Key words】 Huang Chai An stomach capsule，quality control，Huanglian berberine, TLC, UV spectrophotometry.黃柴安胃膠囊是連云港市中醫(yī)院使用多年的協(xié)定處方,處方由黃連、黃芩、柴胡、黨參、香附、陳皮、 白芍、蒲公英、元胡、枳殼、炙甘草等十多味中藥組成，具有疏肝理氣、化濕和胃之功效1。主治胃脘脹痛或痛竄兩肋噯氣、嘈雜泛酸、或脘腹痞悶、有灼熱感、舌質(zhì)淡紅或紅、苔薄或黃膩、脈弦滑，經(jīng)多年臨床應用，取得滿意的療效。為保證制劑的安全有效，本實驗對該制劑的質(zhì)量標準進行了研究。1.黃柴安胃膠囊的制備工藝1.1 處方 黃連600g 黃芩1000g 柴胡1200g 制半夏1000g 黨參2000g 香附1000g 枳殼1000g 陳皮1000g 白芍1500g烏賊骨1500g 蒲公英2000g元胡1000g 炙甘草600g1.2 以上十三味藥，黃連、元胡、1/3烏賊骨干燥后粉碎成細粉，過篩混勻。1.3 另取香附、黃芩、柴胡、蒲公英、制半夏、黨參、白芍、炙甘草、陳皮、3/2烏賊骨加水煎煮3次（每次2，1，1小時），過濾，濾液濃縮至膏面無蒸汽散發(fā)；上述細粉與浸膏拌勻后，干燥，粉碎，由膠囊分狀機裝入膠囊，拋光即得。2黃柴安胃膠囊的質(zhì)量控制 2. 1 材料211 儀器756MC紫外可見分光光度儀（上海精密科學儀器有限公司分析儀器總廠），ZF-型紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）、恒溫水浴箱、電子分析天平(上海精密科學儀器有限公司分析儀器總廠)。212 試藥與試劑 黃芩苷（110715200413供含量測定用）、鹽酸小檗堿（110713200208供含量測定用）均為中國藥品生物制品檢定所提供；薄層層析硅膠G（60型）（中國青島海洋化工集團公司）；羧甲基纖維素鈉（上?；瘜W試劑站）；大孔吸附樹脂D101（國藥集團化學試劑有限公司）；其它試劑均為分析純，黃柴安胃膠囊（連云港市中醫(yī)院制劑室，批號：20070113、20070508、20080320）。22定性鑒別 221 黃柴安胃膠囊粉末的顯微鑒別將粉末制成裝片置顯微鏡下觀察到:不規(guī)則透明薄片，有的具細條紋；另有不規(guī)則碎塊，表面顯網(wǎng)狀或點裝紋理。下皮厚壁細胞綠黃色，細胞多角形、類方形，壁稍彎曲，木化，有的成連珠狀增厚， 紋孔細密。石細胞淡黃色，類圓形或長圓形，直徑約只至60m，壁較厚，紋孔細密。螺紋導管直徑1632m。(見下圖)。1.烏賊骨碎片 2.黃連石細胞 3.黃連導管 4.元胡下皮后壁細胞222黃芩的薄層定性鑒別(10) 取本品粉末1g，加乙酸乙酯-甲醇（3：1）的混合溶液30ml，加熱回流30分鐘，防冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，取上清液作為供試品溶液。另取黃芩對照品藥材1g，同法制成對照品藥材溶液。再取黃芩苷對照品加甲醇制成每1ml含1ml的對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液2l及上述三種對照品溶液各1l，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酰乙酯-甲醇-甲酸（10：3：1：2）為展開劑，預飽和30分鐘，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(見下圖)。223黃連的薄層定性鑒別(8)（1）取本品粉末1g，加乙醇10ml，加熱至沸騰，放冷，濾過。取濾液5滴，加稀鹽酸1ml與含氯石灰少量，即顯櫻紅色；另取濾液5滴，加5沒食子酸乙醇溶液23滴，蒸干，趁熱加硫酸數(shù)滴，即顯深綠色。（2）取本品粉末50mg，加甲醇5ml，加熱回流15分鐘，濾過，濾液補加甲醇使成5ml，作為供試品溶液。另取黃連對照藥材，同法制成對照品藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對照品。照薄層色譜法（附錄B）試驗，吸取上述溶液1l，點于同一硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水（6:3:1.5:1.5:0.3）為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的黃色熒光斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的一個黃色熒光斑點(7)。（見下圖）224柴胡的薄層定性鑒別 取本品粉末05g，加甲醇20ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液濃縮至約5ml，作為供試品溶液。另取柴胡對照品藥材05g，同法制成對照藥材溶液。再取柴胡皂苷對照品加甲醇制成每1ml各含05mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述對照品溶液5l，點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙脂-乙醇-水（8：2：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2對二甲氨基苯甲醛的40硫酸溶液，在60加熱至斑點顯色清晰，置日光及紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點(11)。（見下圖）黃芩鑒別 黃連鑒別 柴胡鑒別1.樣品 1.樣品 1.樣品2. 黃芩苷對照品溶液 2. 小檗堿對照品溶液 2. 柴胡皂苷對照品溶液2.3黃柴安胃膠囊中鹽酸小檗堿的含量測定2.3.1供試品溶液的制備 取本品20粒，除去膠囊外殼，精密稱定，研細,精密稱出適量(約相當于2粒重)，置索氏提取器中，用鹽酸甲醇(1:100)適量，加熱回流至提取液無色，回收溶液至干，殘留物加乙醇少量使溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。照柱色譜法(附錄)試驗，精密量取1ml,置于已處理好的氧化鋁柱(內(nèi)徑約0.9cm，中性氧化鋁5g,濕法裝柱，并先用乙醇30ml預洗)上,用乙醇35ml分次洗脫，收集洗脫液,置50ml量瓶中，加乙醇稀釋到刻度，搖勻,即得。2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品，加乙醇制成0.1mg/ml的對照品溶液。2.3.3 紫外條件選擇：精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液10ml，揮干，加1%鹽酸甲醇液定容至10ml，在240400nm波長范圍內(nèi)掃描，于344nm處有最大吸收，將344nm確定為測定波長。234線行關系考察 分別精密吸取對照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml于10ml容量瓶中，1%鹽酸甲醇液定容，隨行空白，在344nm處測定吸光度，其A值分別為0362、0418、0477、0529、0586，以吸光度A對濃度C進行回歸得回歸方程：y=5.59c+0.3067 ( r=0.9998 n=5) 。鹽酸小檗堿對照品標準液濃度在102-510mg/ml范圍內(nèi)線行關系良好。表一:標準曲線繪制濃度X吸收度AxxyyxyX平均Y平均0.010.3620.00010.1310440.003620.030.47440.020.4180.00040.1747240.008360.030.4470.00090.2275290.014310.040.5290.00160.2798410.021160.050.5860.00250.3433960.0293合計0.152.3720.00551.1565340.07675xyxxyyxy離均差平方和LxxLyyLxy0.0010.0312570.00559a0.3067b5.592.3.5 精密度試驗 精密吸取小檗堿對照品溶液共5份，于具塞試管中，依照“2.3.3”項下測定方法在344nm處測定其吸收度，結(jié)果RSD0.102.3.6 樣品的含量測定 取黃柴安胃膠囊（批號：20070320、）,按標準曲線”項下測吸光度,計算鹽酸小檗堿含量,結(jié)果見表1。表1 樣品的含量測定結(jié)果 批號 吸光度(A) 樣品小檗堿濃度(mg/ml) 平均含量mg/g RSD/% 20070113 0.443 0.2438 20060508 0.440 0.2385 0.2379 6.25% 20060320 0.436 0.23132.3.7 重現(xiàn)性實驗平行制備5份樣品試液1、2、3、4、5號，在344nm波長處測定吸光度，求得RSD0.19，結(jié)果表明，主觀性良好。.2.3.8 穩(wěn)定性試驗 取供試液按”標準曲線” 項下處理后,于不同時間點測定其吸收度，結(jié)果表明，經(jīng)考察在2小時內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD0.18.2.3.9加樣回收率 精密稱取 5份鹽酸小檗堿對照品各10.3mg分別置10 ml容量瓶中，加入黃柴安胃膠囊樣品液（批號：20070320、）溶解定容，得樣品1、2、3、4、5號，在344nm處測定吸光度，并計算出回收率。結(jié)果見表2。表2 加樣回收率實驗結(jié)果序號 樣品含量（mg/ml） 加入對照品量（mg/ml） A 測得量（mg/ml） 回收率（） 平均回收率（%） RSD/%1 2.438 1.03 0.495 3.369 90.392 2.438 1.03 0.492 3.315 85.1532.438 1.03 0.496 3.454 92.04 88.62% 3.08%4 2.438 1.03 0.494 3.351 88.6452.438 1.03 0.493 3.333 86.89 3. 結(jié)果與討論3.1黃柴安胃膠囊是根據(jù)我院協(xié)定處方制成的醫(yī)院制劑。經(jīng)多年臨床驗證，取得了滿意的療效。鑒于醫(yī)院的現(xiàn)有條件限制，高效液相色譜、薄層掃描色譜作為高成本的先進檢測手段都不能在醫(yī)院制劑質(zhì)量控制中普遍使用，因此選擇了用靈敏度高、檢測結(jié)果準確、方法簡便及經(jīng)濟合理的紫外分光光度法進行質(zhì)量檢測。同時根據(jù)2005版中國藥典的相關規(guī)定，對該制劑中的黃芩、黃連、香附、柴胡、元胡、陳皮、白芍、炙甘草用薄層色譜法進行定性鑒別，并選定以含量穩(wěn)定且在紫外分光光度計中檢測結(jié)果較穩(wěn)定重現(xiàn)性較好的黃連鹽酸小檗堿作為含量測定的指標性成分。 3.2黃柴安胃膠囊由黃連、黃芩 、柴胡 、制半夏 、黨參 、香附 、枳殼、陳皮、白芍、烏賊骨、蒲公英、元胡、炙甘草組成，具有疏肝理氣、化濕和胃之功，主治胃脘脹痛或痛竄兩肋噯氣、嘈雜泛酸、或脘腹痞悶、有灼熱感、舌質(zhì)淡紅或紅、苔薄或黃膩、脈弦滑。實驗用薄層色譜法對制劑中的黃芩、黃連、香附、柴胡進行定性鑒別，并用紫外分光光度法對制劑中的黃連鹽酸小檗堿進行含量測定。本法的特點靈敏度與準確度較 高、選擇性較好、設備簡單、操作簡便，便于在基層單位對藥品進行質(zhì)量控制。3.3將原古方中的湯劑該為膠囊劑，使藥物的使用更加方便。膠囊劑是由改善服藥方法而發(fā)展起來的。膠囊劑不僅整潔、美觀、容易吞服，而且還有以下特點：膠囊劑具有掩蓋藥物的不良氣味、藥物的生物利用度高、提高藥物的穩(wěn)定性、可定時定位釋放藥物等優(yōu)點，改善了原湯劑的不良氣味大、服用量大等缺點。湯劑的氣味大多都較難接受，改變?yōu)槟z囊劑后掩蓋了原藥物的不良氣味，便于臨床給藥。4.附:質(zhì)量標準草案黃柴安胃膠囊Huang chai an wei jiao nang【處方】 黃連600g 黃芩1000g 柴胡1200g 制半夏1000g黨參2000g 香附1000g 枳殼1000g 陳皮1000g白芍1500g 烏賊骨1500g 蒲公英2000g 元胡1000g 炙甘草600g 制成2400?！痉浇狻勘痉綖椴窈韪紊?2)加減而成(5)，柴胡為君，和解少陽，是疏肝解郁之要藥，配以白芍，和胃之痛；同時芍藥與甘草同用，更可緩解孿急；枳殼、香附、陳皮、元胡行氣消滯、止痛；川連、黃芩、蒲公英(6)、烏賊骨親熱燥濕、和胃消痞，黨參益氣和中，配伍合理，共奏疏肝理氣、化濕和胃之功(1)。(現(xiàn)代臨床藥理學研究表明黃芩(4)具有抗病原體 ，抗炎、解熱，保肝、利膽，鎮(zhèn)靜，對血液系統(tǒng)影響(3)，降血脂、抗動脈粥樣硬化，降壓、抗心肌缺血、抗心律失常等藥理作用(9)；黃連具有抗病原體，抗炎、解熱，抗?jié)?，對心血管系統(tǒng)的影響等藥理作用；柴胡具有解熱，抗病原微生物，抗炎，促進免疫功能，鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳，保肝、利膽、降血脂，對腎臟的影響等藥理作用。(3)【制法】以上十三味藥，黃連、元胡、1/3烏賊骨粉碎成細粉，過篩混勻；香附、黃芩、柴胡、蒲公英、制半夏、黨參、白芍、炙甘草、陳皮、3/2烏賊骨加水煎煮3次（每次2，1，1小時），過濾，濾液濃縮至膏面無蒸汽散發(fā)；上述細粉與浸膏拌勻后，干燥，粉碎，裝入膠囊，即得?！拘誀睢勘酒窞槟z囊劑，內(nèi)容物為棕色至棕褐色，氣香，味苦?！捐b別】取本品內(nèi)容物置顯微鏡下觀察:不規(guī)則透明薄片，有的具細條紋；另有不規(guī)則碎塊表面顯網(wǎng)狀或點裝紋理。下皮厚壁細胞綠黃色，細胞多角形、類方形，壁稍彎曲，木化，有的成連珠狀增厚， 紋孔細密。石細胞淡黃色，類圓形或長圓形，直徑約只至60m，壁較厚，紋孔細密。螺紋導管直徑1632m?！緳z查】本品應符合中國藥典2005年版一部附錄膠囊劑項下的有關規(guī)定?！竞繙y定】 照紫外-可見分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄VA)測定。吸收波長的選擇 精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液10ml，揮干，加1%鹽酸甲醇液定容至10ml，在240400nm波長范圍內(nèi)掃描，于344nm處有最大吸收，將344nm確定為測定波長。對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品，加乙醇制成0.1mg/ml的對照品溶液。供試品溶液的制備 取本品20粒，除去膠囊外殼，精密稱定，研細,精密稱出適量(約相當于2粒重)，置索氏提取器中，用鹽酸甲醇(1:100)適量，加熱回流至提取液無色，回收溶液至干，殘留物加乙醇少量使溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。照柱色譜法(附錄)試驗，精密量取1ml,置于已處理好的氧化鋁柱(內(nèi)徑約0.9cm，中性氧化鋁5g,濕法裝柱，并先用乙醇30ml預洗)上