環(huán)境化學(xué)物的生殖發(fā)育毒性及其評(píng)價(jià)本節(jié)主要內(nèi)容.ppt

第三節(jié) 環(huán)境化學(xué)物的生殖 發(fā)育毒性及其評(píng)價(jià),本節(jié)主要內(nèi)容, 生殖毒性及評(píng)價(jià) 發(fā)育毒性及評(píng)價(jià),返回本章目錄,一、基本概念,生殖發(fā)育是哺乳動(dòng)物繁衍種族的生理過(guò)程，其中包括： 生殖細(xì)胞（即精子和卵細(xì)胞）發(fā)生、卵細(xì)胞受精、著床（或植入）、胚胎形成、胚胎發(fā)育、器官發(fā)生（或器官形成）、胎仔發(fā)育、分娩、哺乳、性成熟過(guò)程。,（一）生殖發(fā)育,（二）生殖發(fā)育毒性,環(huán)境化學(xué)物對(duì)生殖發(fā)育損害作用可分為：,生殖毒性-生殖毒理學(xué),發(fā)育毒性-發(fā)育毒理學(xué),（三）生殖毒性,生殖毒性是指環(huán)境污染物對(duì)生殖過(guò)程的影響。 生殖毒性的表現(xiàn)主要包括對(duì)性成熟、配子生成和轉(zhuǎn)移、性周期、性行為、受精的有害作用；廣義的還包括對(duì)妊娠、分娩、哺乳等的有害作用。,生殖毒理學(xué)主要研究環(huán)境化學(xué)物對(duì)生殖細(xì)胞發(fā)生、卵細(xì)胞受精、胚胎形成、妊娠、分娩和哺乳過(guò)程的損害作用及其評(píng)定。 廣義的生殖毒理學(xué)可以包括發(fā)育毒理學(xué)。,（四）生殖毒理學(xué),（五）發(fā)育毒性,發(fā)育毒性是指環(huán)境污染物對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程的影響。 發(fā)育毒性的表現(xiàn)主要包括形態(tài)異常、生長(zhǎng)發(fā)育改變、發(fā)育生物體死亡、行為功能缺陷或異常。,（六）發(fā)育毒理學(xué),發(fā)育毒理學(xué)則主要研究從受精卵到性成熟這一發(fā)育期間環(huán)境污染物對(duì)發(fā)育體的毒性作用，也可包括對(duì)生殖細(xì)胞的毒性，如雄性或雌性介導(dǎo)的發(fā)育毒性。狹義的概念則主要指孕期暴露對(duì)發(fā)育體的毒性作用。 發(fā)育毒理學(xué)是在畸胎學(xué)（主要是實(shí)驗(yàn)畸胎學(xué)）、生殖毒理學(xué)（主要是化學(xué)致畸作用）基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一門(mén)毒理學(xué)的分支學(xué)科。從毒理學(xué)角度而言，發(fā)育毒性作為生殖毒性研究的內(nèi)容，直到20世紀(jì)80年代末才從生殖毒理學(xué)中分化出來(lái)。,二、生殖毒性及評(píng)價(jià),(一)雄性生殖毒性,1.雄性生殖基礎(chǔ),精子雄性生殖細(xì)胞,結(jié)構(gòu)：大小、頭、尾（結(jié)構(gòu)畸形）。 數(shù)量：多少（數(shù)量畸形）。 運(yùn)動(dòng)：運(yùn)動(dòng)啟動(dòng)、運(yùn)動(dòng)能力（能量）。 指示生物： 魚(yú)等動(dòng)物精子，如文昌魚(yú)；人類(lèi)精子庫(kù)。 生育功能自檢，英國(guó)生產(chǎn)。,2.雄性生殖毒性,睪丸的功能主要是生成精子和合成雄性激素，精子的生成有賴(lài)于下丘腦垂體睪丸軸的調(diào)節(jié)功能。 環(huán)境化學(xué)物毒性： （1）睪丸生精能力損害。 （2）下丘腦垂體睪丸軸調(diào)節(jié)功能的影響。 （3）對(duì)性功能的影響。,（1）對(duì)睪丸生精能力的損害,影響睪丸生精功能的典型環(huán)境化學(xué)物有： 棉酚 農(nóng)藥（馬拉硫磷和敵敵畏） 工業(yè)污染物（如CS2） 維生素A缺乏等,棉酚: 棉酚毒性作用部位是睪丸 ，使睪丸內(nèi)的精子、精細(xì)胞和精母細(xì)胞受損，直接作用于精子，使其活力受到抑制，作用于精子發(fā)育過(guò)程的不同階段，最終導(dǎo)致精子減少或無(wú)（治療后大部分可恢復(fù)）、不育。 多種農(nóng)藥： 馬拉硫磷和敵敵畏，都能引起精子數(shù)目減少、畸形精子增多和性功能減退。,工業(yè)污染物： 二硫化碳（CS2），對(duì)多種動(dòng)物的睪丸有損害作用，表現(xiàn)為睪丸明顯萎縮，精子生成障礙。 重金屬： 鉛、鎘、汞、錳。均具有不同程度的生殖毒性。都能引起精子數(shù)目減少、畸形精子增多和性功能減退。,（2）對(duì)內(nèi)分泌功能的影響,影響內(nèi)分泌功能典型的環(huán)境污染物是鉛和二硫化碳（CS2）。,鉛可干擾下丘腦垂體睪丸軸的正常功能，影響促性腺釋放激素(GnRH)的釋放，血清中促卵泡生成激素(FSH)、促黃體生成激素(LH)、睪酮含量降低。 有報(bào)道12 名鉛作業(yè)工人血清中FSH、LH和睪酮的平均值均明顯低于對(duì)照組，三種激素與血鉛含量呈負(fù)相關(guān)。,二硫化碳（CS2）： 在人群調(diào)查中觀(guān)察到接觸CS2的血清中FSH水平顯著低于對(duì)照組，而LH則較對(duì)照組明顯升高。一般認(rèn)為L(zhǎng)H水平增高出現(xiàn)的時(shí)間先于FSH水平增高和睪酮水平降低時(shí)間，所以L(fǎng)H水平可作為評(píng)價(jià)CS2對(duì)男性生殖系統(tǒng)損害的早期檢測(cè)指標(biāo)。,（3）對(duì)性功能影響,雄性機(jī)體性功能： 包括性欲、陰莖勃起、性交、情欲高潮和射精等幾個(gè)方面。 雄性發(fā)育條件： 正常的內(nèi)分泌系統(tǒng)，即下丘腦垂體睪丸分泌軸的功能正常。精子的成熟、儲(chǔ)存及輸出，即有正常的睪丸、附睪、輸精管、射精管和尿道。 外生殖器官和附屬性腺正常。 環(huán)境化學(xué)物如影響上述任何一個(gè)環(huán)節(jié)，則表現(xiàn)出雄性不育，或稱(chēng)雄性生殖功能障礙。,典型物質(zhì),有機(jī)汞 易于通過(guò)血睪屏障，在睪丸中積蓄量高，影響早期精細(xì)胞，并可導(dǎo)致不育。 無(wú)機(jī)汞 主要影響精原細(xì)胞及精細(xì)胞，使生育能力降低，此種損害作用具有可逆性。 錳 可抑制睪酮的分泌，抑制生精上皮中線(xiàn)粒體的琥珀酸脫氫酶活性，造成大量細(xì)胞死亡。,1. 對(duì)卵細(xì)胞的影響,電離輻射指可以引起物質(zhì)發(fā)生電離作用的輻射，對(duì)機(jī)體的損害作用大。原始生殖細(xì)胞對(duì)電離輻射最為敏感，極易受損傷。 日本原子彈爆炸地附近，50%婦女不孕。 生育期女性避免放射工作或改行。,（二）對(duì)雌性生殖系統(tǒng)的損害作用,二硫化碳（CS2）對(duì)雌性動(dòng)物性腺、胚胎均有損害作用?？梢? 卵巢萎縮、原始細(xì)胞數(shù)減少、原始細(xì)胞和濾泡變性等損害作用。 卵母細(xì)胞染色體畸變。,2. 對(duì)內(nèi)分泌功能的影響,（1） 苯及同系物 苯、甲苯、二甲苯等有機(jī)溶劑在一定劑量下會(huì)造成女性或雌性動(dòng)物的生殖功能損害，其機(jī)理可能是該類(lèi)化合物直接作用于下丘腦，干擾垂體卵巢系統(tǒng)，使內(nèi)分泌調(diào)節(jié)系統(tǒng)異常，導(dǎo)致月經(jīng)異常。,（2）有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥 雌性大鼠慢性接觸林丹時(shí)： 發(fā)現(xiàn)幼鼠陰道開(kāi)啟和排卵周期延遲。 血清中垂體 LH 和催乳素降低，而垂體FSH濃 度升高。 垂體和子宮的質(zhì)量明顯低于對(duì)照組。,（3）其它毒物作用 對(duì)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)系統(tǒng)（下丘腦垂體性腺 軸）的影響。 對(duì)子代產(chǎn)生影響，如畸形、死胎、功能 發(fā)育不全等。,（三）生殖毒性及評(píng)定,1.生殖毒性 (1)雌性可出現(xiàn)排卵規(guī)律改變、月經(jīng)失調(diào)或 閉經(jīng)、卵巢萎縮、受孕減少、胚胎死亡、 生殖力降低、不孕或不育等。 (2)雄性可表現(xiàn)為睪丸萎縮或壞死、精子數(shù)目 減少等。,（1）研究設(shè)計(jì) 動(dòng)物選擇 多用性成熟大鼠 A 每組雌雄各1620只，或雌性16 20 只，雄性810只。 B 接觸受試物的方式可混入飼料或飲水 中，由動(dòng)物攝取，也可采用灌胃或腹腔 注射。,2.生殖毒性作用的評(píng)定, 劑量分組 設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)對(duì)照組 A 高劑量組： 以超過(guò)人類(lèi)實(shí)際接觸水平，能使新一代動(dòng)物出現(xiàn)輕度中毒，死亡率不超過(guò)10%，不完全喪失生育能力。 B 低劑量組： 新代動(dòng)物僅能出現(xiàn)輕微的中毒癥狀。 C 中間劑量組： 介于高劑量和低劑量之間的劑量。,（2）試驗(yàn)方法, 三代兩窩生殖試驗(yàn) 選用大鼠繁殖三代每代生育兩窩。 兩代一窩和一代一窩生殖試驗(yàn) 基本程序與三代兩窩試驗(yàn)法相同，但只進(jìn)行到第二代F2，每代只生育一窩。,（3）觀(guān)察指標(biāo), 受孕率：反映雌性動(dòng)物生育能力以及雌性動(dòng)物受孕情況。 妊娠雌性動(dòng)物數(shù) 受孕率100% 交配雌性動(dòng)物數(shù), 正常分娩率：反映雌性動(dòng)物妊娠過(guò)程是否受到影響。 正常分娩雌性動(dòng)物數(shù) 正常分娩率 100% 妊娠動(dòng)物數(shù), 幼仔出生存活率：反映雌性動(dòng)物分娩過(guò)程是否正常，如分娩過(guò)程受到影響，則幼仔往往在出生4 天內(nèi)死亡。 出生后4天存活幼仔數(shù) 幼仔出生存活 = 100% 分娩時(shí)出生幼仔數(shù), 幼仔哺育成活率：反映雌性動(dòng)物授乳哺育幼仔的能力。 21天斷奶幼仔存活數(shù) 幼仔哺育成活率100% 出生后4天存活幼仔數(shù),二、發(fā)育毒性及評(píng)價(jià),內(nèi) 容,（一）胚胎毒性 （二）母體毒性 （三）發(fā)育毒性評(píng)定 （四）致畸作用的機(jī)理,（一）胚胎毒性,胚胎毒性(embryo toxicity)指環(huán)境化學(xué)物對(duì)胚胎或胎兒產(chǎn)生的毒作用。 表現(xiàn)為： 胚胎死亡 生長(zhǎng)遲緩 功能發(fā)育不全 畸形,（二）母體毒性,母體毒性(maternal toxicity)指環(huán)境化學(xué)物在一定劑量下，對(duì)受孕母體產(chǎn)生的損害作用。 母體毒性常見(jiàn)的有以下幾種特點(diǎn)。,母體毒性特點(diǎn),1. 具有胚胎毒性作用，但無(wú)母體毒性出現(xiàn) 有的環(huán)境化學(xué)物具有致畸作用，且有特定的作用機(jī)理，與母體毒性無(wú)關(guān)。此種受試物致畸作用往往較強(qiáng)，應(yīng)予特別注意。 2. 出現(xiàn)胚胎毒性作用的同時(shí)也表現(xiàn)母體毒性作用 此種受試物可能既對(duì)胚胎有特定的致畸作用，同時(shí)也對(duì)母體具有損害作用，但兩者并無(wú)直接聯(lián)系。,3.不具有特定致畸作用，但可破壞母體正常生理穩(wěn)態(tài)，對(duì)胚胎產(chǎn)生非特異性的損害作用，并造成胚胎毒性。 4.僅具有母體毒性，但不具有致畸作用。 5.在一定劑量下，既不表現(xiàn)母體毒性，也未見(jiàn)致畸作用等胚胎毒性。,（三）發(fā)育毒性及評(píng)定,世界上很多國(guó)家和機(jī)構(gòu)對(duì)環(huán)境化學(xué)物致畸作用的檢驗(yàn)，多采用傳統(tǒng)常規(guī)試驗(yàn)方法致畸試驗(yàn)。主要介紹： 1. 致畸試驗(yàn) 2. 致畸物體內(nèi)篩檢試驗(yàn)法 3. 致畸和發(fā)育毒性體外試驗(yàn)法 4. 生殖毒性和發(fā)育毒性三階段一代試驗(yàn)法 5. 人群調(diào)查,1.致畸試驗(yàn),致畸試驗(yàn)是檢查受試環(huán)境化學(xué)物能否通過(guò)妊娠母體引起胚胎畸形的動(dòng)物試驗(yàn)。 動(dòng)物選擇 劑量分組 動(dòng)物交配處理 胎仔檢查 結(jié)果評(píng)定,（1）動(dòng)物選擇原則 食性和對(duì)受試物代謝過(guò)程與人類(lèi)接近。 體型小、馴服、容易飼養(yǎng)、繁殖及價(jià)廉。 妊娠過(guò)程較短，每窩產(chǎn)仔較多和胎盤(pán)構(gòu)造與人類(lèi)接近。 首選大鼠，此外可采用小鼠或家兔。 狗、猴現(xiàn)已少用于教學(xué)、臨床研究。,（2）劑量分組原則及方法 劑量分組一般原則： A 要求找出最大無(wú)作用劑量和致畸閾劑量。 B 應(yīng)不影響母體生育能力，避免和減少大批流 產(chǎn)、胚胎死亡、母體死亡。,劑量分組方法： A 劑量組設(shè)3個(gè)：高、中、低組 最高劑量組：應(yīng)為可引起母體輕度中毒，死 亡不超過(guò)10%； 最低劑量組：不應(yīng)觀(guān)察到任何中毒癥狀； 中間劑量組：可允許母體出現(xiàn)某些較輕的中 毒癥狀。,B 對(duì)照組設(shè)2個(gè) 對(duì)照組：陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照組 常用的陽(yáng)性對(duì)照物有維生素A、乙酰水楊酸、敵枯雙、五氯酚鈉及脒基硫脲等。,C 每組所需動(dòng)物數(shù)： 大鼠或小鼠1220只，家兔812只，狗等大動(dòng)物34只。,（3）動(dòng)物交配處理,將性成熟雌雄動(dòng)物按1:1或2:1比例同籠交 配。 每日將受孕雌鼠隨機(jī)分入各劑量組和對(duì)照 組。凡發(fā)現(xiàn)陰栓或檢出精子，即確定為受孕“0”日。,接觸受試物的方式： 混入飼料或飲水喂養(yǎng) 灌胃 腹腔注射 給受試物時(shí)間： 根據(jù)觀(guān)察指標(biāo)的需要，如器官畸形。,（4）染毒,（5）胎仔檢查,大鼠在受孕后第1920天，小鼠第1819天，處死取胎。 記錄活產(chǎn)幼仔、死胎以及吸收胎，大鼠還應(yīng) 取出卵巢，記錄黃體數(shù)。, 活產(chǎn)胎仔取出后，檢查性別，逐只稱(chēng)質(zhì)量，并按窩計(jì)算平均體質(zhì)量。 畸形檢查： A 外觀(guān)畸形，如露腦，無(wú)尾和短肢等。 B 內(nèi)臟及軟組織畸形。 C 骨骼畸形檢查。,（6） 結(jié)果評(píng)定,在致畸試驗(yàn)結(jié)果評(píng)定時(shí)，主要計(jì)算畸胎總數(shù)和畸形總數(shù)。 常用的評(píng)價(jià)指標(biāo)有: . 活產(chǎn)幼仔平均畸形出現(xiàn)率 . 畸胎出現(xiàn)率 . 母體畸胎出現(xiàn)率,. 活產(chǎn)幼仔平均畸形出現(xiàn)率： 畸形總數(shù) 活產(chǎn)幼仔平均畸形出現(xiàn)率= 100% 活產(chǎn)幼仔總數(shù),. 畸胎出現(xiàn)率： 出現(xiàn)畸形的胎仔總數(shù) 畸胎出現(xiàn)= 100% 活產(chǎn)胎仔總數(shù),. 母體畸胎出現(xiàn)率：即出現(xiàn)畸形胎仔的母體在妊 娠母體中所占的百分率 出現(xiàn)畸胎的母體數(shù) 母體畸胎出現(xiàn)率 100% 妊娠母體數(shù),d. 計(jì)算各組雌性動(dòng)物的受孕率、平均體質(zhì)量和 妊娠增長(zhǎng)體質(zhì)量數(shù)。 e. 對(duì)于胎仔，可計(jì)算每窩的活產(chǎn)胎仔數(shù)、死胎率、 吸收胎率、平均胎仔體質(zhì)量、活產(chǎn)胎仔雌雄性 別比等。,2.致畸物體內(nèi)篩檢試驗(yàn)法,在受孕小鼠或大鼠進(jìn)行。 利用孕鼠篩檢環(huán)境化學(xué)物是否具有致畸作用。 觀(guān)察外觀(guān)畸形，如胚胎致死、生長(zhǎng)遲緩等發(fā)育毒性表現(xiàn)。還可確定生長(zhǎng)發(fā)育遲緩是否有可逆性。,3.致畸和發(fā)育毒性體外試驗(yàn)法,細(xì)胞、組織和器官培養(yǎng)，建立了全胚胎培養(yǎng)、器官如肢芽（limb bud）、腭片、骨骼、肺、牙齒、腎等培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)的體外試驗(yàn)法。, 全胚胎培養(yǎng)法,將試驗(yàn)動(dòng)物的全胚胎在一定的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，觀(guān)察在接觸受試物的情況下，是否呈現(xiàn)致畸作用以及發(fā)育毒性。 胚胎來(lái)源： 大鼠、小鼠、家兔；雞、魚(yú)和蛙類(lèi)等。 觀(guān)察指標(biāo)： A 胚胎存活率；B 肉眼及組織學(xué)形態(tài)異常變化。 例如，胚胎外形、體節(jié)數(shù)、卵黃囊、神經(jīng)管、上下顎、眼、耳、 心臟和肢芽的發(fā)育情況。,器官培養(yǎng)法,將胚胎或胎仔組織、器官或器官的一部分在體外培養(yǎng)，觀(guān)察環(huán)境化學(xué)物對(duì)其發(fā)育過(guò)程的影響。 常用方法 對(duì)嚙齒動(dòng)物肢芽培養(yǎng)方法。 觀(guān)察指標(biāo) 細(xì)胞增殖和分化、核酸和蛋白質(zhì)含量，肢芽大小和形狀、軟骨形成、膠原和蛋白聚糖的生物合成可對(duì)發(fā)育過(guò)程進(jìn)行定量評(píng)定。,細(xì)胞培養(yǎng)法,細(xì)胞培養(yǎng)法：傳代細(xì)胞株(cell line) 和原代細(xì)胞。 原代細(xì)胞對(duì)致畸物較為敏感，與機(jī)體細(xì)胞實(shí)際情況相符合。在致畸物作用下，可觀(guān)察到細(xì)胞毒性作用和分化過(guò)程。 常用原代細(xì)胞有大鼠、小鼠和鳥(niǎo)類(lèi)的肢芽細(xì)胞，神經(jīng)元細(xì)胞等。人腦細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、平滑肌、心肌、骨細(xì)胞等細(xì)胞分離和培養(yǎng)。,4.三階段一代試驗(yàn)法,生殖毒性和發(fā)育毒性采用三階段一代試驗(yàn)法：三階段一代繁殖試驗(yàn)，也稱(chēng)三階段生殖試驗(yàn)(three segment reproduction test)。 第一階段試驗(yàn)：生育力與生殖功能試驗(yàn)。 第二階段試驗(yàn)：致畸作用和胚胎毒性的評(píng)定。 第三階段試驗(yàn)：圍生期及出生后發(fā)育情況試驗(yàn)。, 第一階段試驗(yàn),第一階段試驗(yàn)：即生育力與生殖功能試驗(yàn)。 動(dòng)物選擇： 性成熟雄雌鼠，每組雌性動(dòng)物20只，雄性10只，先開(kāi)始接觸受試物60天，然后雌鼠接觸14天，并進(jìn)行交配。 接觸期： 包括全部精子發(fā)生期和排卵期。, 劑量： 分為23個(gè)劑量組和1個(gè)對(duì)照組。 A 高劑量組：可引起母體輕度中毒，不能出現(xiàn)嚴(yán)重中毒癥狀或10%以上的死亡。 B 低劑量組：只引起生理效應(yīng)、藥理學(xué)效應(yīng)或?qū)M織中某些酶的活力造成一定的影響，但不應(yīng)出現(xiàn)中毒癥狀。 C 中間劑量：與高劑量和低劑量成等比級(jí)數(shù)，只出現(xiàn)輕微的中毒或無(wú)任何癥狀。,觀(guān)察指標(biāo) 將孕鼠(10只)處死，剖開(kāi)子宮，觀(guān)察記錄： A 黃體數(shù)、著床數(shù)和吸收胎數(shù)。 B 分別計(jì)算著床前死亡率和著床后死亡率。, 第二階段試驗(yàn),第二階段試驗(yàn)：致畸作用和胚胎毒性的評(píng)定。 每組雌鼠20只，在妊娠6 15日接觸受試 物。 自然分娩前1天，處死孕鼠，取出胎仔， 稱(chēng)質(zhì)量、 鑒定性別并檢查內(nèi)臟和骨骼有無(wú) 畸形。, 第三階段試驗(yàn),第三階段試驗(yàn)：圍生期及出生后發(fā)育情況試驗(yàn)。 可以評(píng)定受試物對(duì)胎仔發(fā)育后期、母體妊娠、分娩和授乳以及幼仔在新生期間存活和生長(zhǎng)發(fā)育的影響。 分組：設(shè)23個(gè)劑量組和一個(gè)對(duì)照組。 觀(guān)察指標(biāo)：受孕率、幼仔性別比例或雌雄兩性各占幼仔總數(shù)的百分率、出生存活率、哺育成活率等。 可發(fā)現(xiàn)第二階段試驗(yàn)中未被檢到的畸形。,5.人群調(diào)查,人群調(diào)查觀(guān)察指標(biāo)詳細(xì)方法可參照有關(guān)的臨床診斷檢驗(yàn)指標(biāo)，主要觀(guān)察指標(biāo)有：,（四）致畸作用的機(jī)理,致畸作用的機(jī)理主要包括以下幾個(gè)方面： 基因突變和染色體畸變 生物合成的原料和能量不足 細(xì)胞毒作用 酶的抑制 對(duì)細(xì)胞膜損傷 非特異性發(fā)育毒性作用 母體及胎盤(pán)的正常功能受到干擾,1.基因突變和染色體畸變,基因突變和染色體畸變表現(xiàn)為： 基因突變所致的畸形具有遺傳性，引起的畸 形約占5%。 染色體畸變常導(dǎo)致胚胎死亡、畸形、功能障 礙，引起的畸形約為10%。,2.生物合成的原料和能量不足,生物合成的原料和能量不足主要有： 母體中維生素和無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)狀況失調(diào)、 缺氧等，葉酸缺乏、維生素A缺乏與畸形 有關(guān)。, 藥物致畸：反應(yīng)停，導(dǎo)致嚴(yán)重畸形。 鎂、錳、葉酸、泛酸等