大血藤的病蟲(chóng)害鑒定與及防治

學(xué)科代碼： 070401 學(xué) 號(hào)： 2009407052 本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）題目：大血藤的病蟲(chóng)害鑒定與及防治學(xué) 院： 環(huán)境與生命科學(xué)學(xué)院 專(zhuān) 業(yè)： 生物科學(xué) 班 級(jí)： 2009級(jí) 學(xué)生姓名： 吳繼謹(jǐn) 指導(dǎo)教師： 張國(guó)輝 2013年3月25日凱里學(xué)院本科畢業(yè)論文目錄目錄I摘要II關(guān)鍵詞IIAbstractIIKeywords. II0 引言11 材料與方法11.1試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)11.2 實(shí)驗(yàn)材料11.2.1 標(biāo)本采集11.2.2 生物防菌11.2.3 試劑11.2.4 儀器設(shè)備11.2.5 PSA培養(yǎng)基的制備11.3試驗(yàn)方法11.3.1 病癥的觀察與描述11.3.2病原菌的分離與培養(yǎng)11.3.3 病原菌的鑒定21.3.4 生物防菌對(duì)病原菌的抑制的測(cè)定22 結(jié)果與分析22.1 病癥的觀察與描述22.2 分離培養(yǎng)結(jié)果22.3 顯微鏡鏡檢結(jié)果32.4生防菌預(yù)防結(jié)果與分析33 結(jié)論與討論4參考文獻(xiàn)6致謝7大血藤的病蟲(chóng)害鑒定及防治吳繼謹(jǐn) （凱里學(xué)院環(huán)境與生命科學(xué)分院，貴州凱里556011）摘要：為了了解和鑒定出引起大血藤病害的微生物，通過(guò)組織分離法從葉片中分離得到病原菌，并對(duì)病原菌進(jìn)行培養(yǎng)和鑒定。顯微鏡檢的病原菌特征表明，引起大血藤病害的是絲核菌（Rhizoctonia)和鏈格孢屬（Alternaria Nees)。引起玉泉的大血藤病害的這兩種病原菌，可以通過(guò)生物防治來(lái)減少病害的危害。關(guān)鍵詞：大血藤；病蟲(chóng)害；絲核菌；鏈格孢屬；生物防治 Damage identification and control of the primary diseaseWu Jijin(environment and life science, Caili University Guizhou Kaili 556011) Abstract: in order to understand and identify the bacteria that cause Sargentgloryvine disease, pathogenic bacteria isolated from the leaves obtained by tissue isolation method, and culture and identification of pathogenic bacteria. Showed that the pathogen characteristics of microscopy, primary disease is caused by Rhizoctonia (Rhizoctonia) and Alternaria (Alternaria Nees). The two pathogens Sargentgloryvine Stem disease in Yuquan, can reduce damage by biological controlKeywords: Caulis Sargentoxae; pests and diseases; Rhizoctonia; Alternaria spp.; biological controlII凱里學(xué)院本科畢業(yè)論文0 引言 大血藤(Caulis Sargentodoxae）又名血藤、紅皮藤、千年健等，為木通科植物大血藤的莖，生于山坡疏林、溪邊；有栽培。主產(chǎn)湖北、四川、江西、河南、江蘇、安徽、浙江、云南、貴州等地。落葉木質(zhì)藤本，長(zhǎng)達(dá)到10余米。藤?gòu)酱诌_(dá)9厘米，全株無(wú)毛 。當(dāng)年枝條暗紅色，老樹(shù)皮有時(shí)縱裂 。大血藤莖含大黃素、大黃素甲醚、-谷甾醇、硬脂等多種化學(xué)成分。其莖可以入藥，具有敗毒消癰、活血通絡(luò)、祛風(fēng)殺蟲(chóng)的作用。治急慢性闌尾炎、風(fēng)濕痹痛、赤痢、血淋、月經(jīng)不調(diào)、疳積、蟲(chóng)痛、跌撲損傷等。其花為總狀花序，長(zhǎng)6-12厘米，花為紫色，花期4-5月，果實(shí)的顏色由綠色到藍(lán)紫色，成熟為紅色，果期6-9月，花和果都具有很高的觀賞價(jià)值。所以，大血藤由于具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值而被廣泛的種植。 但近幾年來(lái)，大血藤卻遭受很多種病害，嚴(yán)重的影響了它的生長(zhǎng)發(fā)育，降低了它的藥用價(jià)值和觀賞價(jià)值，引起了政府、廣大農(nóng)民、專(zhuān)家、學(xué)者的重視。引起大血藤病害的原因多種多樣，如今經(jīng)過(guò)前者研究得之的有：大血藤黃化?。淮笱偬烤也。环?、袋蛾類(lèi)、紅蠟蚧、螨類(lèi)、刺蛾類(lèi)等引起的病害。本文對(duì)大血藤進(jìn)行初步的病害分析，簡(jiǎn)要提出對(duì)大血藤幾種病的防治措施，以期為貴州省黔東南州大血藤病害的研究有一定的參考價(jià)值。 而本文從生防菌防治的角度提供了新的視野，采用組織分離法分離得到大血藤絲核菌、鏈格孢屬病原菌，通過(guò)對(duì)病原菌的培養(yǎng)性狀、分生孢子的形態(tài)觀察，證明了引起大血藤為絲核菌、鏈格孢屬病原菌。本實(shí)驗(yàn)用F19、F18、F2三種生物防菌對(duì)絲核菌、鏈格孢屬具有高效的抑制作用，特別是F19和F2兩種生防菌。這實(shí)驗(yàn)說(shuō)明了除了傳統(tǒng)的化學(xué)試劑、農(nóng)藥滅菌，我們還可以產(chǎn)用新的方法生物防菌。它避免了傳統(tǒng)的農(nóng)藥滅菌引起病原菌的抗藥性增強(qiáng)，造成藥物的浪費(fèi)，滅菌效果低以及藥物沿著食物鏈和食物網(wǎng)集留在更高的營(yíng)養(yǎng)極，給生物體帶來(lái)危害的情況。并且它用量低，專(zhuān)一性強(qiáng)。從生態(tài)系統(tǒng)的平衡和經(jīng)濟(jì)的角度來(lái)說(shuō)，它更科學(xué)，更實(shí)用。1 材料與方法1.1 試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)生物實(shí)驗(yàn)室和顯微鏡實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。1.2 實(shí)驗(yàn)材料1.2.1 標(biāo)本采集 分別對(duì)玉泉和銀屏縣邊沙村兩地大血藤進(jìn)行病害標(biāo)本的調(diào)查和采集，并對(duì)整植株危害程度進(jìn)行記錄，采集新鮮標(biāo)本用于室內(nèi)分離鑒定。1.2.2 生物防菌 從北京微生物研究所購(gòu)得，有F19、F18、F2等1.2.3 試劑 無(wú)水乙醇、70的酒精、工室外試驗(yàn)于2012年1月分別在玉泉進(jìn)行，室內(nèi)試驗(yàn)在凱里學(xué)院環(huán)境與生命科學(xué)學(xué)院微業(yè)酒精、升汞、鏈霉素。1.2.4 儀器設(shè)備 電熱恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、無(wú)菌操作臺(tái)、顯微鏡等1.2.5 PSA培養(yǎng)基的制備 取1000克干凈水倒入電飯鍋中，再將稱(chēng)好的200克的馬玲署塊、17克的蔗糖放進(jìn)水里，加熱，用玻璃棒不斷攪拌，至馬鈴薯肉汁幾乎溶解于水，停止加熱，過(guò)濾，將17-18克的瓊脂倒進(jìn)濾液中，充分?jǐn)嚢?，待其冷卻到50度左右，裝入多個(gè)培養(yǎng)瓶中，封裝，再放入高壓蒸汽滅菌鍋里進(jìn)行121度的長(zhǎng)達(dá)30分鐘的高壓滅菌。1.3 試驗(yàn)方法1.3.1 癥狀的觀察和描述 到玉泉和錦屏縣邊沙兩地對(duì)大血藤的病害癥狀和發(fā)病程度進(jìn)行觀察，主要從病組織的表面病斑形態(tài)、顏色、大小及危害程度等方面進(jìn)行觀察和描述，并對(duì)危害組織進(jìn)行拍照。1.3.2 病原菌的分離和培養(yǎng) 對(duì)于病原菌的真菌分離采用組織表面分離法。取病健交界處的葉片小塊組織2-4mm，先用70%的酒精對(duì)大血藤葉片病斑部進(jìn)行表面消毒處理，然后放入0.1%的升汞溶液中進(jìn)行消毒2分鐘，再放進(jìn)無(wú)菌水中漂洗3次，移入PSA平板內(nèi)培養(yǎng)。在PSA培養(yǎng)基上28培養(yǎng)34天，病組織的周?chē)L(zhǎng)出不同的菌絲體，挑取外圍新長(zhǎng)的菌絲，分別移置到新的添加鏈霉素的PSA培養(yǎng)基上，依次重復(fù)多次，直至得到純的病原菌進(jìn)行純培養(yǎng)，然后對(duì)菌落進(jìn)行觀察、描述和拍照。1.3.3 病原菌的鑒定 對(duì)培養(yǎng)的真菌進(jìn)行顯微觀察、描述以及照相。主要觀察孢子的形態(tài)結(jié)構(gòu)、顏色、菌絲的顏色是否有隔和分支。操作步驟：用滅菌后的接種針挑取少許菌絲，放在加有1 滴浮載劑（水）的載玻片上，蓋上蓋玻片后放在光學(xué)顯微鏡下觀察、描述。同時(shí)對(duì)在顯微鏡下的病原菌進(jìn)行拍照，以及對(duì)孢子大小進(jìn)行測(cè)量、記錄。1.3.4 生物防菌對(duì)病原菌的抑制的測(cè)定 通過(guò)觀察F19、F18、F2三種生防菌從三個(gè)空間方向?qū)Σ≡拈L(zhǎng)勢(shì)的影響，可以比較出哪種生防菌的抑制作用更強(qiáng)。2 結(jié)果與分析通過(guò)實(shí)驗(yàn)采用組織表面分離法分離和培養(yǎng)得到病菌，經(jīng)顯微鏡檢查的結(jié)果，通過(guò)癥狀觀察以及危害程度進(jìn)行分析，最后鑒定為引起玉泉大血藤病害的的病原微生物是絲核菌和鏈格孢屬。2.1 病癥的觀察描述 圖1 大血藤絲核菌病害病葉 圖2 大血藤病害病葉左圖葉片病斑為黃色、黑色、褐色的圓點(diǎn)、圓形或不規(guī)則的圖形，成孤立的塊狀或網(wǎng)狀沿著葉緣布滿整片葉片。病斑大小約為1-20mm，病害的部位變得枯萎、腐爛，甚至空洞（見(jiàn)圖1）。 右圖葉片病斑為黃色或黑褐色，近似圓或橢圓形，大小約為2-10，呈塊狀和圓形狀孤立分布在葉尖和葉中，病害使葉尖枯萎j繼而腐爛，病斑中心變得空洞(見(jiàn)圖2）。2.2 分離培養(yǎng)結(jié)果 圖3 絲核菌的菌落正面觀 圖4 絲核菌的菌落背面觀 絲核菌在PSA培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)，菌落很大，呈棉花狀生長(zhǎng)。菌落中心向上突起，邊緣整齊光滑，質(zhì)地均勻柔潤(rùn)，不透明。菌落初期為白色，三天之后變蒼白色，逐漸變?yōu)槲ⅫS色。培養(yǎng)基的背面觀，呈鮮紅色，中心呈紅褐色，菌落具有明顯的同心輪紋，由外到內(nèi)輪紋顏色由淺到深。再培養(yǎng)到后期，培養(yǎng)基的背面觀呈黑褐色（如圖3，4）。 圖5 鏈格孢屬的菌落的背面觀 圖6 鏈格孢屬的菌落正面觀 鏈格孢屬在PSA培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)，菌落較大，呈絨毛狀生長(zhǎng)，形成不規(guī)則“四葉草”型，菌落邊緣粗糙，不光滑，質(zhì)地不均勻不透明，不易挑取。中央長(zhǎng)勢(shì)較周?chē)?。其培養(yǎng)基背面觀呈灰黑色，中央部較周?chē)伾睿ㄈ鐖D5，6）。2.3 顯微鏡鏡檢結(jié)果絲核菌rhizoctonia 屬半知菌亞門(mén),無(wú)孢目,絲核菌屬。菌絲褐色,蛛網(wǎng)狀,多直角分枝,近分枝處形成隔膜,縊縮狀。病菌菌絲粗壯，初時(shí)無(wú)色，老熟時(shí)淡褐色，老熟菌絲常呈一連串桶形細(xì)胞，并可交織而成質(zhì)地疏松的黑褐色菌核。 主枝細(xì)胞念珠狀，兩菌絲有時(shí)以短分枝相聯(lián)結(jié)，菌絲表面細(xì)胞為褐色，內(nèi)部土白道淺褐色。分枝有性態(tài)為亡革菌屬（Thanatephorus），常不發(fā)生。常見(jiàn)的有立枯絲核菌（R. solaniKhn.），引致多種植物立枯病(如圖8)。鏈格孢屬（Alternaria alternata）屬半知菌綱，鏈孢霉目，黑霉科.。鏈格孢屬分生孢子頂部小膨大，分生孢子梗頂部有1個(gè)至多個(gè)孢痕，分生孢子呈典型的倒棒狀，分隔處隘縮明顯或不明顯，一般成鏈，為褐色。菌絲灰色至黑色，多成直角分支，菌絲形成隔膜，隘鎖狀。生長(zhǎng)迅速，擴(kuò)散快（如圖7）。 圖7 鏈格孢屬的菌絲和孢子 圖8絲核菌的菌絲 2.4 生防菌預(yù)防結(jié)果與分析通過(guò)F19、F18、F2三種生防菌從三個(gè)空間方向?qū)︽湼矜邔俨≡拈L(zhǎng)勢(shì)的影響，可以比較出這三種生防菌的抑制效果。本次試驗(yàn)得出F19、F18、F2三種生防菌對(duì)上訴病原菌均有抑制作用，其中F18的抑制作用最強(qiáng)。因?yàn)榧?xì)菌與真菌存在著競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系，生物防治主要是利用有益微生物對(duì)病原物的各種不利作用，來(lái)減少病原物的數(shù)量和削弱其致病性。有益微生物產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，抑制或殺死病原菌，還能誘導(dǎo)或增強(qiáng)植物杭病性，通過(guò)改變植物與病原物的相互關(guān)系，抑制病害發(fā)生。有益微生物對(duì)病原物的不利作用主要有抗菌作用(antibiosis)、溶菌作用(Lysis)、競(jìng)爭(zhēng)作用 (competition )、重寄生作用 (hyperparasitism )、捕食作用 (predation )相交互保護(hù)作用(crossprotection )等（如圖9）。 圖9 生防菌與病原菌的相互作用3 結(jié)論與討論 大血藤因其較高的藥用價(jià)值和觀賞價(jià)值而被越來(lái)越多國(guó)內(nèi)的專(zhuān)家、學(xué)者所研究，他們大多是研究它的化學(xué)物質(zhì)成份，藥用成份，也有少數(shù)學(xué)者研究了它的病蟲(chóng)害鑒定及藥物防治。本次研究通過(guò)科學(xué)合理的實(shí)驗(yàn)方法證實(shí)了藥用大血藤當(dāng)前導(dǎo)致病害的病原菌為絲核菌和鏈格孢屬，并改了以往傳統(tǒng)的藥物防治采用生物防治，取得了良好的效果，為大血藤真菌病害的預(yù)防和鑒定提出了一定的理論依據(jù)和科學(xué)基礎(chǔ)。絲核菌是一種不產(chǎn)生任何無(wú)性孢子，以菌絲或菌核形態(tài)存在于自然界的土壤習(xí)居菌，其中大部分是重要的植物病原菌。該菌的菌核可以殘留在土壤的表面，在土壤存活2-3年，遇到足夠的水分和較高的濕度時(shí)，菌核萌發(fā)出菌絲通過(guò)雨水，土壤中的水的流動(dòng)傳播蔓延，病菌的菌絲直接侵入葉片，破壞葉肉組織，造成葉片收縮、干枯或萎焉，隨之漸漸枯死。鏈格孢霉菌絲，大量存在于土壤、空氣和作為培養(yǎng)料的各種有機(jī)基質(zhì)上，其孢子通過(guò)空氣傳播。在滅菌不徹底，無(wú)菌操作不嚴(yán)及培養(yǎng)料含水量偏高和溫度大的條件下，有利于發(fā)生。該屬引起多種水果蔬菜等黑腐病，這種真菌在很廣的范圍內(nèi)均可以生長(zhǎng)良好，甚至在2的低溫條件下也可緩慢生長(zhǎng)，鏈格孢可通過(guò)機(jī)械傷口、冷害損傷及衰老組織的自然開(kāi)孔侵入，甚至也可以通過(guò)健康的表皮。每逢4月到7月，黔東南地區(qū)多雨高溫，正是這兩種病原菌的繁殖期和生長(zhǎng)期，大量茂盛的葉片也同樣遭受著病害的威脅，嚴(yán)重的影響了植物的生長(zhǎng)。下面基于絲核菌和鏈格孢屬的生長(zhǎng)條件提出一些防治措施。 （1）農(nóng)業(yè)措施：合理規(guī)劃，規(guī)范管理。種植前進(jìn)行土壤滅菌，培育無(wú)毒無(wú)病幼苗。采用大棚種植的，應(yīng)合理規(guī)劃好植株與植株見(jiàn)得距離，行與行的距離，做到通風(fēng)透光。建立良好的灌溉系統(tǒng)和排水系統(tǒng)，以減少病原菌的傳染。入秋后注意落葉的收集，統(tǒng)一處理，可進(jìn)行燃燒。 （2）生物防治：在幼苗種植后，可每月噴灑一次F19、F18、F2三種生防菌，依情況噴灑一定的次數(shù)和量。 參考文獻(xiàn)目錄1張國(guó)輝。大血藤炭宜病的病原鑒定及病害分析J.中國(guó)農(nóng)學(xué)通,2012(15)2張智仙.大血藤化學(xué)成分研究(11)J.中草藥,2010-06-123董玲.血藤的化學(xué)成分J.北京中醫(yī)藥大學(xué)