蛇床子中有效成分提取工藝的研究

聊城大學(xué)本科畢業(yè)論文本科畢業(yè)論文題 目 蛇床子中有效成分提取工藝的研究 專 業(yè) 化學(xué) 作者姓名 劉魯祥 學(xué) 號 2011202195 單 位 化學(xué)化工學(xué)院2011級4班 指導(dǎo)教師 孫愛玲 2015年 5 月 教務(wù)處編原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨立進行研究取得的成果。除文中已經(jīng)引用的內(nèi)容外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得聊城大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均在文中以明確的方式表明。本人承擔(dān)本聲明的相應(yīng)責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名： 日期： 指 導(dǎo) 教 師 簽 名: 日期： 目 錄1.緒論1 1.1 引言1 1.2 蛇床子有效成分及藥理作用研究進展1 1.2.1化學(xué)成分 1 1.2.2 藥理作用2 1.3中藥提取方法研究進展3 1.3.1 傳統(tǒng)工藝3 1.3.2 新工藝4 1.4高效液相色譜法簡介5 1.5 本論文選題的意義和主要內(nèi)容52. 實驗部分7 2.1 實驗儀器7 2.2 試劑與藥材7 2.3 色譜條件7 2.4 提取方法7 2.5 結(jié)果與討論8 2.5.1 HPLC條件的優(yōu)化8 2.5.2不同提取溶劑提取效率的比較 9 2.5.3不同提取方法提取效率的比較9 2.5.4不同提取濃度提取效率的比較 .10 2.5.5 85%乙醇為提取溶劑時回流時間對提取效率的比較 . 103.結(jié)論11參考文獻12致 謝13摘 要對蛇床子提取工藝方法進行了研究，建立了蛇床子有效成分的高效液相色譜（high performance liquid chromatography , HPLC）分析方法。采用冷浸、超生、回流三種方法對蛇床子有效成分進行了提取，比較了使用不同方法提取效率的高低，并且用高效液相色譜分析方法對提取物進行了分析，并考察了不同提取時間對提取效率的影響。分析結(jié)果表明：不同的提取方法、提取溶劑、提取時間、提取濃度對于提取效率都有一定的影響。其中以85%乙醇回流2.5小時，提取效果最佳。關(guān)鍵詞 ：蛇床子；加熱回流；超生；冷浸；高效液相色譜Abstract Of cnidium extraction process methods were studied to establish a high performance liquid chromatography Osthol active ingredient (high performance liquid chromatography, HPLC) analysis. Cold immersion, ultrasonic, reflux three methods Osthol active ingredients were extracted and compared using different methods to extract the level of efficiency, and high performance liquid chromatography analysis of extracts were analyzed and studied different extraction time effect of extraction efficiency. The results showed that: different extraction methods, extraction solvent, extracting time, the concentration of the extraction efficiency has a certain impact. Of which 85% ethanol was refluxed for 2 hours, extracting the best results.Key words：Fructus Cnidii ; Deated to reflux ; Ultrasound ; Cold soak ; HPLC II蛇床子中有效成分提取工藝的研究1. 緒論1.1引言蛇床子是傘形科植物蛇床的干燥成熟果實，又名蛇米、蛇珠、蛇栗、蛇床仁等。該品為雙懸果，呈橢圓形，長24mm，直徑約2mm。表面灰黃色或灰褐色，頂端有2 枚向外彎曲的柱基，基部偶有細梗。分果的背面有薄而突起的縱棱5 條，接合面平坦，有2 條棕色略突起的縱棱線。果皮松脆，揉搓易脫落，種子細小，灰棕色，顯油性。氣香，味辛涼，有麻舌感。藥理作用：味辛、苦，性溫，入腎、脾經(jīng)，具有溫腎助陽、祛風(fēng)、燥濕、殺蟲的功效，可治女子帶下陰癢，子宮寒冷不孕，風(fēng)濕痹痛，疥癬，濕瘡等1。蛇床子的主要藥理活性成分是香豆素類化合物和揮發(fā)油，另外還含有單萜多醇、糖類，以及近來新發(fā)現(xiàn)的倍半萜類成分等。對于蛇床子的活性成分的研究多集中于香豆素成分，尤其是含量較高的蛇床子素，其藥理作用的研究較為深入。本次實驗就蛇床子中蛇床子素在提取溶劑濃度、提取時間、提取方法、提取溶劑四方面進行實驗，并通過高效液相色譜對各方案提取的蛇床子素進行含量測定，最終優(yōu)選最佳提取方案，為以后蛇床子研究者提供更多的參考。1.2蛇床子有效成分及藥理作用研究進展1.2.1化學(xué)成分蛇床子主要含香豆素類化合物，此外還有色原酮類和苯并呋喃類化合物。蛇床子揮發(fā)油中相對含量較高的組分主要有倍半萜類此外還有酯類和萜醇類化合物。（1）簡單香豆素類 現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)蛇床子中含有的簡單香豆素類的化合物有；蛇床子素( o s t h o ）、 a u r a p t e n o l 、d e me t h y l - a u r a p t e n o l、2 - d e o x y me r a n z i n h y d r a t e、水合橙皮內(nèi)酯( m e r a n z i n h y d r a t e ）、 ma r r a y a c a r p i n 、7 一 me t h o x y - 8 一 f o r myl c o u ma - r i n、以及6 一 me t h o x y - 8 - me t h y l c o u ma f i n 。（2）線型呋喃香豆素 此類化合物以線型呋喃香豆素為基本結(jié)構(gòu)，常在5，8位有取代基。如：歐芹屬素乙( i mp e r a t o r i n ）、別英波托林( a l l i s o i mp e r a t o r）。（3）角型呋喃香豆素 此類化合物以角型呋喃香豆素為基本結(jié)構(gòu)，取代基通常在呋喃環(huán)上。在 8位有雙鍵的呋喃香豆素，如：白芷素( a n g e l i c in）、2 - 乙酰白芷素。（4） 色原酮 此類化合物以色原酮為基本結(jié)構(gòu)。（5） 其他類成分 分子中含雙香豆素母核的化合物，如dlumtatin此類化合物以色原酮為基本結(jié)構(gòu)。除上述成分外，還從蛇床子中分離出一些其他成分，如谷甾醇、單萜、 倍半萜、萜醇類、以及多種糖苷類化合物。蛇床子揮發(fā)油中，倍半萜烯類的相對含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)在8 5 以上，酯類組分質(zhì)量分?jǐn)?shù)在7 以上，萜醇類組分質(zhì)量分?jǐn)?shù)在 2 以上。1.2.2藥理作用 （1）對心血管系統(tǒng)的影響 蛇床子的水提取物、總香豆素對氯仿誘發(fā)的小鼠室顫，氯化鈣誘發(fā)的大鼠室顫均有明顯的預(yù)防作用蛇床子素對離體豚鼠左心房呈劑量依賴性負性肌力作用，對離體豚鼠心房呈負性頻率作用 。 （2）對呼吸系統(tǒng)的影響 蛇床子總香豆素具有松弛由藥物(組胺、乙酰 膽堿)引起的支氣管痙攣和直接舒張支氣管的作用，此作用可被腎上腺素受體阻斷劑心得安所阻斷，小鼠灌服蛇床子總香豆素后，體內(nèi)酚紅排出 量明顯增加，表明有較強的祛痰作用。 （3）對免疫系統(tǒng)的影響 增強非特異性免疫功能 蛇床子素能增強小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞的吞噬功能，顯著增加碳粒廓清指數(shù)及吞噬指數(shù)。 抗炎作用 蛇床子素和花椒毒酚可抑制二甲苯引起的小鼠耳殼腫脹及醋酸引起的小鼠腹腔毛細血管通透性增高，明顯抑制小鼠肉芽腫。蛇床子素和花椒毒酚對角叉萊膠誘發(fā)的大鼠及切除雙側(cè)腎上腺的大鼠足腫脹有明顯的抑制作用，花椒毒酚還可降低大鼠足腫脹部位炎癥組織內(nèi)PGE含量，但蛇床子素不影響大鼠足腫脹部位炎癥組織內(nèi)PGE含量 。 （4) 對神經(jīng)系統(tǒng)的影響 蛇床子總香豆素對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有一定的抑制作用；蛇床子素可顯著增強閾下催眠劑量戊巴比妥鈉對小鼠的催眠作用，且此催眠作用與劑量相關(guān)2。蛇床子素有促進小鼠學(xué)習(xí)記憶的作用，顯著改善小鼠記憶獲得、鞏固及方向辨別障礙 。 （5）對生殖系統(tǒng)的影響 蛇床子對人精子的表面形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)均有明顯的破壞和損傷引。 （6）抗菌作用 蛇床子對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和大腸埃希氏菌三種細菌臨床分離株殺菌效果明顯。還能明顯減弱金黃色葡萄球菌殘余株的致病 。 （7） 止癢作用 蛇床子的甲醇提取液有明顯的抗瘙癢作用，其中可溶于氯仿的組分顯著地抑制 SP誘發(fā)的瘙癢。1.3中藥提取方法研究進展我國的中藥資源十分豐富，但中藥成分非常復(fù)雜，有效成分含量較少，雜質(zhì)較多，并且藥物中往往含有多種有效成分，為了弄清藥物中各種有效成分的藥理作用與含量，必須將有效成分從中草藥中提取出來，才能作進一步的研究，所以中草藥中藥成分的提取是研究中藥的前提。1.3.1 傳統(tǒng)工藝傳統(tǒng)工藝包括浸漬法，水提醇沉工藝，水煎煮法，滲漉法，回流法，水蒸汽蒸餾法。下面我們簡單的介紹一下幾個傳統(tǒng)工藝： （1）浸漬法浸漬法按提取的溫度和浸漬次數(shù)可分為：冷浸漬法、熱浸漬法、重浸漬法。浸漬法適用于粘性藥物、無組織結(jié)構(gòu)的藥材、新鮮及易于膨脹的藥材、價格低廉的芳香性藥材。不適于貴重藥材、毒性藥材及高濃度的制劑。 （2）水提醇沉工藝中藥水提液經(jīng)濃縮后在常溫或低溫下加入乙醇進行醇沉，乙醇既作為溶劑來溶解濃縮液中的有效成分，又作為沉淀劑來沉淀某些雜質(zhì)。 （3）水煎煮法是在草本植物中加入適量的水，然后加熱至一定溫度并保持一定時間后濾出煮液的方法。該方法不僅簡便易行，而且能煎出大部分有效成分，是最常用的提取草本植物中活性成分的方法之一3。 煎藥機優(yōu)于傳統(tǒng)煎煮法。楊璐璐等4發(fā)現(xiàn)用GNG 中藥抽出機比直火加熱法和蒸氣煎藥法制備湯劑的總固體含量高出2倍以上，且保質(zhì)時間長。張曉燕5等發(fā)現(xiàn)中藥抽出機制備的槐花散湯中蘆丁含量明顯大于常壓直火煎煮法。梁文能6等發(fā)現(xiàn)煎藥機煎煮的黃連解毒湯中黃芩苷的含量高于傳統(tǒng)煎煮法。1.3.2 新工藝新工藝包括：超濾，超臨界流體萃取（SFE），酶法提取，超聲提技術(shù)，罐組式動態(tài)逆流提取工藝，半仿生提取法。（1）超濾超濾（Ultrafiltration）技術(shù)是一種膜濾法，也有錯流過濾（Cross Filtration）之稱。它能從周圍含有微粒的介質(zhì)中分離出10100A的微粒，這個尺寸范圍內(nèi)的微粒，通常是指液體內(nèi)的溶質(zhì)。其基本原理是在常溫下以一定壓力和流量，利用不對稱微孔結(jié)構(gòu)和半透膜介質(zhì)，依靠膜兩側(cè)的壓力差作為推動力，以錯流方式進行過濾，使溶劑及小分子物質(zhì)通過，大分子物質(zhì)和微粒子如蛋白質(zhì)、水溶性高聚物、細菌等被濾膜阻留，從而達到分離、分級、純化、濃縮目的的一種新型膜分離技術(shù)7。 （2） 超臨界流體萃取超臨界流體萃取( supercr itical fluid ex traction, SFE )技術(shù)是以超臨界流體CO2 、NH 3 、H2O、C2H 5OH 、C2H6等代替常規(guī)有機溶劑, 在超臨界狀態(tài)下, 將超臨界流體與待分離的物質(zhì)接觸，通過控制不同的溫度、壓力以及不同種類及含量的夾帶劑，使超臨界流體有選擇性的把極性大小、沸點高低和分子量大小的成分依次萃取出來8。（3）生物酶解技術(shù) 生物酶是一種能力巨大的催化劑, 酶可以作用于污染物質(zhì)中復(fù)雜的化學(xué)鏈，將其降解為小分子有機物或CO2、H2O 等無機物，有機物的處理則通過酶反應(yīng)形成游離基，游離基發(fā)生化學(xué)聚合反應(yīng)生成高分子化合物沉淀，經(jīng)過濾即可除去。與其他微生物處理方法相比，酶技術(shù)的應(yīng)用具有催化效率高、反應(yīng)條件溫和、對設(shè)備要求低、反應(yīng)速度快等優(yōu)點9。（4）半仿生提取法 半仿生提取法( semi2bionic extraction method , SBE) 是從生物藥劑學(xué)的角度，模擬口服給藥及藥物經(jīng)胃腸道轉(zhuǎn)運的原理，運用于經(jīng)消化道給藥的中藥制劑的一種新的提取工藝。將中藥原料分別用近似胃和腸道的酸堿水溶液提取23 次，即先用一定pH 的酸水提取，繼以一定的pH的堿水提取,提取液分別濾過，濃縮，制成制劑。酸堿法是針對單體成分的溶解度和酸堿度有關(guān)的性質(zhì)，在溶液中加適量的酸或堿，調(diào)節(jié)pH值至一定范圍，其目的是使單體成分溶解或析出。近幾十年來，中草藥的生產(chǎn)實現(xiàn)了一定程度的機械化和半機械化。傳統(tǒng)中藥往往被認為有效成分含量低、雜質(zhì)多、質(zhì)量不穩(wěn)定，因此用藥多建立在經(jīng)驗的基礎(chǔ)上，不能與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)接軌。為解決這個問題，中藥必須走提取和純化的道路10。1.4高效液相色譜法簡介高效液相色譜（HighPerformanceLiquidChromatography）又稱為高壓液相色譜（HighPressureLiquidChromatography），是20世紀(jì)60年代末70年代初發(fā)展起來的一種新型分離分析技術(shù)，隨著不斷地改進與發(fā)展，目前已成為應(yīng)用極為廣泛的化學(xué)分離分析的重要手段。它是在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜的理論，在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測器，因而具備速度快、效率高、靈敏度高、操作自動化的特點。1.5本論文的選題意義和主要內(nèi)容 中藥現(xiàn)代化是將傳統(tǒng)中醫(yī)藥的優(yōu)勢、特色與現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)相結(jié)合，以適應(yīng)當(dāng)代社會發(fā)展需求的過程。中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵是轉(zhuǎn)變思想觀念。即學(xué)術(shù)指導(dǎo)思想的現(xiàn)代化。中藥藥理研究不是簡單的“中藥”和“藥理”組合，中藥藥理研究應(yīng)以中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論為前提，以避免中藥的西化問題。中藥的使用是在中醫(yī)理論的措導(dǎo)下進行的，而中醫(yī)理論至今還沒有找到有力的證據(jù)，這使中藥也陷于同樣的境地，即一方面對于疾病臨床療效肯定，一方面又缺乏有力的科學(xué)數(shù)據(jù)來證明，而使其使用多限于經(jīng)驗。中藥具四氣五味、升降浮沉。歸經(jīng)、補瀉等性能和清熱、溫里、補氣等功效，用于治療病人整體的證；西藥有明確的化學(xué)成分，其構(gòu)型和理化性質(zhì)決定了其功效，用于治療病體局部的癥。而目前所進行的所謂中藥藥理研究實質(zhì)上相當(dāng)部分是照搬了現(xiàn)代西藥藥理研究方法。筆者認為真正意義上的中藥藥理研究應(yīng)該在傳統(tǒng)中醫(yī)理論和傳統(tǒng)的四氣五味等藥性理論的認識上有所突破。中藥藥理研究在指導(dǎo)思想和技術(shù)手段必須要在新思路、新突破。 中藥藥理學(xué)通過中藥藥理研究要有重點地逐項揭示中藥的四氣五味、升降浮沉歸經(jīng)的實質(zhì)。從臨床實踐出發(fā)，中藥藥理研究的重點應(yīng)該是方劑，從研究方法上應(yīng)以整體研究為主，建立大量科學(xué)合理的中醫(yī)病(證)動物模型、實驗方法、觀測指標(biāo)及結(jié)果分析、判斷標(biāo)記等，也就是完全符合中藥特點的藥理學(xué)方法。在此基礎(chǔ)上完善和提高血清藥理學(xué)、復(fù)方藥代動力學(xué)以及血清藥物化學(xué)11、中藥復(fù)方化學(xué)的研究，同時積極發(fā)展中藥的分子藥理學(xué)、量子藥理學(xué)、受體藥理學(xué)，以及離子通道、酶、基因等方面的藥理學(xué)研究，整體與高體試驗相結(jié)合，分析與綜合相結(jié)合，中西醫(yī)藥相結(jié)合，從多方面、多層次全面深入地闡明中藥治療作用。 中藥藥理作為應(yīng)用學(xué)科，在中藥新藥開發(fā)、研究和生產(chǎn)行業(yè)，更是有著不可替代的作用。在中國中藥新藥研究的程序中，藥效毒理學(xué)12研究已作為法定的必備研究項目。中藥現(xiàn)代化的基本任務(wù)之一就是要研制出能與國際醫(yī)藥市場接軌的具有中國自主知識產(chǎn)權(quán)的中藥產(chǎn)品，它的定位必然是“安全、高效、優(yōu)質(zhì)、穩(wěn)定、可控”，其中安全有效是藥品最重要的特征。藥效評價13正是由中藥藥理學(xué)科完成的。中國現(xiàn)行的藥品管理法規(guī)定，任何中藥制劑在進入臨床試驗之前，都必須通過嚴(yán)格的藥效和安全評價試驗。由此可見，中藥藥理學(xué)無論在中醫(yī)藥的基礎(chǔ)理論研究或在中藥現(xiàn)代化的研究中都將發(fā)揮十分重要的作用。加強對中藥藥理學(xué)的基礎(chǔ)研究是勢在必行的。用科學(xué)的語言闡明中藥在體內(nèi)的代謝過程、藥理作用和作用機理，這對中藥走向現(xiàn)代化走向國際市場都具有潛在的社會意義和經(jīng)濟價值。 2 實驗部分2.1 實驗儀器美國安捷倫1100高效液相色譜儀；sk3300LH超生波清洗儀2.2 試劑與藥材樣品提取的試劑甲醇和乙醇為分析純；HPLC檢測的甲醇為色譜純試劑，檢測用水為哇哈哈純凈水；實驗用水為二次蒸餾水。2.3 色譜條件 色譜柱：SPHERIGEL ODS C18柱（250mm4.6mmID. 5um）；流動相：甲醇水；流速：1.0mlmin；溫度：20；檢測波長：245nm。2.4 提取方法2.4.1最佳提取溶劑的選擇（1）精確稱取1.0056g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入10ml甲醇（無水），超聲2小時。（2）精確稱取1.0089g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入10ml乙醇（無水），超聲2小時。（3）精確稱取1.0058g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入10ml乙酸乙酯（無水），超聲2小時。 2.4.2最佳提取方法的選擇（1） 精確稱取1.0053g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入10ml乙醇（無水），超聲2小時。（2） 精確稱取1.0193g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入10ml乙醇（無水），加熱回流2小時。（3） 精確稱取1.1255g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入10ml乙醇（無水），冷浸2小時。2.4.3 最佳溶劑濃度的選擇（1）精確稱取1.0305g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入75%乙醇10ml ，加熱回流2小時。（2）精確稱取1.0466g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入80%乙醇10ml ，加熱回流2小時。（3）精確稱取1.0144g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入85%乙醇10ml ，加熱回流2小時。（4）精確稱取1.0862g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入90%乙醇10ml ，加熱回流2小時。（5）精確稱取1.0325g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入95%乙醇10ml ，加熱回流2小時。（6）精確稱取1.0326g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入無水乙醇10ml ，加熱回流2小時。2.4.4 最佳提取時間的選擇（1）精確稱取1.0394g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入85%乙醇10ml ，加熱回流1小時。（2）精確稱取1.0346g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入85%乙醇10ml ，加熱回流1.5小時。（3）精確稱取1.0143g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入85%乙醇10ml ，加熱回流2小時。（4）精確稱取1.0256g蛇床子于50ml圓底燒瓶中，加入85%乙醇10ml ，加熱回流2.5小時。 2.5結(jié)果與討論 2.5.1 HPLC條件的優(yōu)化本實驗通過比較檢測物分離效果及峰形，得出以甲醇水為流動相，甲醇30%-100%；各組分可以達到基線分離，且峰形較好，在275nm的紫外吸收波長處有較大吸收。蛇床子提取液的HPLC分析結(jié)果見圖：圖1蛇床子提取液的HPLC分析結(jié)果 I峰代表：蛇床子素 II峰代表：歐前胡素 2.5.2 不同提取溶劑提取效率的比較 通過采用超生提取方法，分別對甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二次蒸餾水為提取溶劑，比較了不同提取溶劑對蛇床子有效成分提取效率的影響。分析結(jié)果見圖：圖2 同提取溶劑對蛇床子有效成分提取效率的影響以上數(shù)據(jù)可得：甲醇作為溶劑時的提取效率高于乙酸乙酯、乙醇作為溶劑時的提取效率，但是因為甲醇有較大毒性，且價格較昂貴，因此以下實驗均用乙醇作為提取溶劑。2.5.3 不同提取方法提取效率的比較通過無水乙醇作為提取溶劑，分別比較了采用超生、85加熱回流、冷浸三種不同提取方法對蛇床子有效成分提取效率的影響，分析結(jié)果見圖：圖3 提取方法對蛇床子有效成分提取效率的影響從以上實驗數(shù)據(jù)可得：提取方法對提取效率有一定的影響，加熱回流提取的效率高于冷浸和超生的提取效率。因此，選用加熱回流提取的方法。2.5.4 不同溶劑濃度提取效率的比較通過加熱回流的提取方法，乙醇為溶劑提取，分別比較了濃度為75%、80%、85%、90%、95%、無水乙醇六種濃度的乙醇對蛇床子有效成分提取效率的影響，分析結(jié)果見圖：圖4 乙醇濃度對蛇床子有效成分提取效率的影響經(jīng)HPLC分析可知：以85%乙醇為提取溶劑采用回流法對蛇床子中有效成分鋒面積最大，故85%的乙醇加熱回流法提取最佳。2.5.5 85%乙醇為提取溶劑時回流時間對提取效率的比較通過以85%的乙醇為提取溶劑，分別比較1h、1.5h、2h、2.5h不同提取時間對蛇床子有效成分提取效率的影響，分析結(jié)果如下：圖5 不同提取時間對蛇床子有效成分提取效率的影響以上數(shù)據(jù)表明：提取時間對提取效率有顯著影響，回流提取2h提取效率最高，故回流2h作為最佳提取時間。3 結(jié) 論（1） 蛇床子中含有多種化學(xué)成分，本實驗建立了HPLC分離測定蛇床子有效成分的方法，該方法簡便易行、準(zhǔn)確度和靈敏度高，通過各個提取方法提取有效成分測得鋒面積可以清楚知道加熱回流是較好的提取方法。（2）本實驗通過多種傳統(tǒng)的提取方法進行提取，提取方法對提取效率有較大影響，回流提取的效率高于超生和冷浸的提取效率：分別對乙醇、甲醇、乙酸乙酯、水為提取液，考察了不同溶劑對于提取效率的影響，結(jié)果表明85%乙醇提取最佳，因此采用85%為提取溶劑；提取時間對提取效率有顯著影響，回流提取2.5小時提取效率最高，故以回流2.5小時作為最佳提取時間。因此最佳提取方法：85%乙醇為溶劑，加熱回流的方法，提取時間為2.5小時。 綜上，實驗達到預(yù)期效果。參考文獻1Carey J H,Lawrence J,Tosine H M.Photodechlorination of PCBs in the presence of TiO2 in aqueous suspensions.Bull Environ Contam Toxicol,1976,16: 697700.2Ahmed S,Rasul M G,Martens W N,Heterogeneous photocatalytic degradation of phenols in wastewater:A review on current status and developments.Desalination,2010,261: 3-18.3Fujishima A,Honda K.Electrochemical photolysis of water at a semiconductor electrode.Nature,1972,123: 3738.4Ranjit K T,ViswanathsnB,Photocatalytic reduction of nitrite and nitrate ions to ammonia Oil MTi02 catalysts.Journal of Photochemistry and Photobiology A:Chemistry,1997,108:73-785Zhao W,Ma W,Chen C, Efficient degradation of toxic organic pollutants with Ni2O3TiO(2-x)Bx under visible irradiation.Journal of the American Chemical Society,2004,126:3-766Shibata H,Noda N,Ogura Y,Oxidation and reduction of nitrite ion in the TiO2 photo.Induced catalytic reactionJ.Bioscience,biotechnology,and biochemistry,2000,64:1-3.7Mor G.K Shankar K Paulose M.Use of highly-ordered Ti02 nanotube arrays in dye.Sensitized solar cellsJ.Nano Letters,2006,6:215-218.8Haruta M,Yamada N,Kobayashi T,Gold Catalysts Prepared by Coprecipitation for Low-temperature Oxidation of Hy