保健粥方有效成分的研究畢業(yè)論文.doc

中國(guó)中醫(yī)藥大學(xué)本科生畢業(yè)論文 論 文 題 目： 保健粥方有效成分的研究 學(xué) 生 姓 名： 學(xué) 號(hào)： 學(xué) 院： 專 業(yè) 方 向： 班 級(jí)： 指 導(dǎo) 教 師： 論文完成日期： 畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）誠(chéng)信聲明書本人聲明：本人 楊興宇 （學(xué)號(hào)： 20061428 ）所提交的畢業(yè)論文 保健粥方有效成分的研究 是本人在指導(dǎo)教師 惠秋莎 老師指導(dǎo)下獨(dú)立研究、寫作的成果，論文中所引用他人的無(wú)論以何種方式發(fā)布的文字、研究成果，均在論文中加以說(shuō)明；有關(guān)教師、同學(xué)和其他人員對(duì)本文的寫作、修訂提出過(guò)并為我在論文中加以采納的意見(jiàn)、建議，均已在我的致謝辭中加以說(shuō)明并深致謝意。論文作者： （簽字） 時(shí)間： 2011年 6 月 日指導(dǎo)教師已閱： （簽字） 時(shí)間： 2011年 6 月 日畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）版權(quán)使用授權(quán)書本畢業(yè)論文 保健粥方有效成分的研究 是本人 楊興宇 （學(xué)號(hào)： 20061428 ）在校期間所完成學(xué)業(yè)的組成部分，是在指導(dǎo)教師 惠秋莎 老師的指導(dǎo)下獨(dú)立完成的。因此，本人特授權(quán)山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院可將本畢業(yè)論文的全部或部分內(nèi)容編入山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院本科生優(yōu)秀畢業(yè)論文集（非正式出版）。論文作者： （簽字） 時(shí)間： 2011年 6 月 日指導(dǎo)教師已閱： （簽字） 時(shí)間： 2011年 6 月 日保健粥方有效成分的研究楊興宇（2007級(jí)中藥學(xué)專業(yè)6班 學(xué)號(hào)：20061428）摘要 綜述了近年來(lái)中藥口服緩釋制劑的研究進(jìn)展。中藥單體化合物中藥緩釋制劑研究有著廣闊的發(fā)展前景。關(guān)鍵詞 中藥；口服緩釋制劑【摘要】 保健粥方如下：氣虛質(zhì)-山藥粥方：淮山藥、蓮子、紅棗、粳米目的提高盾葉薯蕷藥材的品質(zhì)。方法通過(guò)組織培養(yǎng)，對(duì)誘導(dǎo)獲得的盾葉薯蕷四倍體株系，進(jìn)行了試管苗抗氧化酶活性及薯蕷皂苷元含量分析。結(jié)果大部分四倍體株系A(chǔ)PX活性、SOD和POD比活力高于或相近于二倍體株系。經(jīng)誘導(dǎo)獲得的四倍體株系試管苗與對(duì)照相比薯蕷皂苷元含量有較大差異，大部分四倍體株系薯蕷皂苷元含量都超過(guò)了二倍體株系。結(jié)論經(jīng)誘導(dǎo)獲得的四倍體株系在抗氧化酶活性及有效成分含量方面與二倍體表現(xiàn)出明顯差異，說(shuō)明多倍體誘導(dǎo)可以作為盾葉薯蕷優(yōu)良品種選育的途徑。 【關(guān)鍵詞】 盾葉薯蕷四倍體抗氧化酶活性薯蕷皂苷元Abstract：ObjectiveTo improve the yield and quality of D. zingibiernsis C.H.Wright . MethodsThe research project of polyploidy breeding by tissue culture was done. The antioxidant enzyme activities and the diosgenin were analyzed in polyploidy lines. Results The results showed that SOD and POD activities in most of autotetraploid lines were not lower than those of diploid line, furthermore，the content of diosgenin in most induced plantlets was higher than that in control. Conclusion There was difference between autotetraploid and control lines in diosgenin content and antioxidant enzyme activities，therefore，inducing autotetraploid can be effective way to breeding the superior varieties.Key words： D. zingibiernsisC.H.Wright. ；Antotetraploid,； Autioxidant enzyme activities； Diosgenin 盾葉薯蕷D. zingibiernsis C.H.Wright.屬薯蕷科薯蕷屬根狀莖，又名黃姜、火頭根，其根莖內(nèi)薯蕷皂素的含量一般為2%左右，是目前世界上最好的激素類藥源植物。同時(shí)具有清肺止咳、利濕通淋、通絡(luò)止痛、解毒消腫的功能，可治肺熱咳嗽、濕熱淋痛、風(fēng)濕腰痛、癰腫惡瘡、跌打扭傷、蜂螯蟲咬；其水溶性甾體皂苷成分對(duì)心肌缺血、胸痹、高脂血癥等有明顯治療作用。 盾葉薯蕷是我國(guó)特有資源植物，是世界上薯蕷皂素含量最高的種類，最高單株達(dá)到16.5%，超過(guò)了世界王牌墨西哥小穗花薯蕷15%的紀(jì)錄。據(jù)調(diào)查我國(guó)10個(gè)省市都有盾葉薯蕷分布，其中湖北、湖南、陜西、四川分布最為集中，目前在陜西安康地區(qū)、湖北鄖西地區(qū)、湖南安化地區(qū)、河南南陽(yáng)地區(qū)都有一定規(guī)模的種植面積。實(shí)現(xiàn)人工栽培后，雖然解決了皂素供應(yīng)問(wèn)題，而原料依舊短缺，主要原因是產(chǎn)量低、皂素含量變化較大，質(zhì)量難以控制。因此有必要進(jìn)行品種選育和提純復(fù)壯的工作。鑒于此，筆者利用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了盾葉薯蕷多倍體的誘導(dǎo)，并對(duì)誘導(dǎo)株系進(jìn)行了抗氧化酶活性及有效成分分析，為最終選育優(yōu)良品種提供依據(jù)。1 材料與儀器1.1 材料生長(zhǎng)2540 d的盾葉薯蕷四倍體、二倍體試管苗新鮮葉片及根莖1。1.2 儀器和試劑BECKMAN DU-600分光光度計(jì)，水浴鍋，微量加樣器。酶提取液， pH 7.5的0.05mol/L 的Tris-HCl緩沖液，PBS pH(7.0)，0.1 mmol/L EDTA， 0.1mmol/L H2O2， 0.5 mmol/LASA，丙酮，SOD試劑盒（購(gòu)于建成生物試劑研究所）。2 方法2.1 SOD，POD，APX活性的測(cè)定精密稱取盾葉薯蕷試管苗二倍體及其同源四倍體葉片1.0 g，每份材料加5ml預(yù)冷的提取緩沖液（pH7.5的0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液）及少量石英砂，置于冰浴中研磨后，4冷凍離心機(jī)6 000 r/min離心10min，上清液即為酶提取液。SOD活性按南京建成生物工程研究所試劑盒說(shuō)明書操作。POD總活力按文獻(xiàn)2的方法進(jìn)行，酶的比活力用OD470/ (mgmin)(protein)表示。APX活性參照文獻(xiàn)2的方法，酶活單位定義為每小時(shí)氧化1mol ASA的酶量為一個(gè)酶活單位。2.2 盾葉薯蕷試管苗薯蕷皂苷元含量分析2.2.1 樣品制作盾葉薯蕷試管苗在MS/2+IAA 0.2 mg/L+NAA0.2 mg/L培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，待苗長(zhǎng)至3035d左右，洗凈根上的培養(yǎng)基，將根剪掉，在60下烘干，粉碎，過(guò)60目篩，供含量分析用。2.2.2 薯蕷皂苷元的測(cè)定供試品溶液制備3，4：精密稱取盾葉薯蕷粉末0.71.0 g，置于三角瓶中，加2.0 mol/L的硫酸50 ml，在100水浴鍋中水解4 h，放冷過(guò)濾，藥渣用蒸餾水洗至中性，60干燥后，用石油醚（6090）50 ml在90水浴中索市氏提取5h，提取液回收至干后用無(wú)水乙醇溶解，過(guò)濾至5ml的容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容待測(cè)定。 對(duì)照品溶液制備：準(zhǔn)確稱取薯蕷皂苷元標(biāo)樣0.001 g，置2 ml容量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解，稀釋至刻度，得0.5 g/l的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。 色譜條件選擇5，6：儀器：Agilent 1100 Series。分析條件：Microsorb-MV100 C18 (5m，4.6 mm250 mm )。無(wú)水甲醇為流動(dòng)相，進(jìn)樣量20 l，流速0.5 ml/min, 檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm, 柱溫為室溫。樣品中薯蕷皂苷元與其它成分達(dá)到良好分離（見(jiàn)圖1）。 樣品含量測(cè)定：以上述色譜條件對(duì)盾葉薯蕷中薯蕷皂苷元含量進(jìn)行分析，并計(jì)算其含量。3 結(jié)果3.1 四倍體與二倍體SOD，POD，APX活性比較 盾葉薯蕷二倍體與其同源四倍體各抗氧化酶的比較結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可以看出，盾葉薯蕷四倍體株系A(chǔ)PX活性基本上與二倍體相近或略大，其中有12個(gè)株系比二倍體高；14個(gè)四倍體株系POD活性均高于二倍體對(duì)照株系，平均高出23.4%，POD活性最高的株系G2比對(duì)照高出59%。16個(gè)四倍體株系SOD活性均高于二倍體對(duì)照。平均高出48.1%，活性最高的株系10-10比對(duì)照高出127%。表1 四倍體與二倍體SOD，POD，APX活性比較（略）3.2 盾葉薯蕷試管苗同源四倍體株系薯蕷皂苷元含量分析 對(duì)誘導(dǎo)獲得的19個(gè)四倍體株系試管苗的薯蕷皂苷元含量進(jìn)行了初步分析。結(jié)果見(jiàn)表2，圖24。測(cè)定結(jié)果顯示：19個(gè)盾葉薯蕷四倍體株系中，有10個(gè)株系的薯蕷皂苷元含量高于二倍體，平均比對(duì)照株系高出30.8%。其中10-1、12-4、y9、3-1、y24、11-10，分別比對(duì)照株系高出75%，50%，50%，33%，25%，25%。表2 盾葉薯蕷四倍體株系薯蕷皂苷元含量（略）4 討論 目前，尋找強(qiáng)抗逆性植物，抵御活性氧對(duì)植物細(xì)胞的損傷越來(lái)越受到人們的重視?，F(xiàn)已有通過(guò)基因擴(kuò)增，使SOD過(guò)度表達(dá)，產(chǎn)生較強(qiáng)抗逆性的轉(zhuǎn)基因植物。但由于SOD降解超氧陰離子產(chǎn)生的H2O2同樣也是一種活性氧，對(duì)植物細(xì)胞也有很大傷害，因此單一通過(guò)轉(zhuǎn)一種基因并不能達(dá)到徹底清除活性氧的目的。SOD在需氧原核生物和真核生物中廣泛存在，是活性氧清除系統(tǒng)中第一個(gè)發(fā)揮作用的抗氧化酶，也是植物體內(nèi)氧代謝的關(guān)鍵酶，在保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷過(guò)程中具有十分重要的作用。POD可清除植物體內(nèi)的H2O2，從而使需氧生物體免受H2O2的毒害7，APX被認(rèn)為葉綠體中清除H2O2的關(guān)鍵酶。試驗(yàn)獲得的大部分盾葉薯蕷四倍體株系SOD，POD和APX比活力均高于二倍體，說(shuō)明這些株系將具有比對(duì)照株系更高的抗逆性或抵抗自然災(zāi)害的能力。這為植物抗逆性的提高和產(chǎn)量的增加提供一條有效途徑；極大的縮短了選育時(shí)間，為優(yōu)良品種的前期篩選提供了新的研究思路；為應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行優(yōu)良品種選育提供了新的研究方法。 成分分析結(jié)果說(shuō)明大部分四倍體株系薯蕷皂苷元含量超過(guò)了對(duì)照株系，說(shuō)明多倍體誘導(dǎo)可以作為盾葉薯蕷優(yōu)良品種選育的途徑，所得株系為進(jìn)一步選育優(yōu)良品種提供了有用的育種材料。【參考文獻(xiàn)】 1謝彩俠，高山林，秦慧貞，等.盾葉薯蕷同源四倍體的誘導(dǎo)與鑒定J.藥物生物技術(shù)，2005，12（1）：15.2張志良，翟偉蕾.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)M. 北京：高等教育出版社，2006：168.3都述虎，夏重道，付鐵軍，等 穿龍薯蕷總皂苷水解條件的優(yōu)化J. 中成藥，2000，22（9）：608.4王俊，楊克迪，陳 鈞. 均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)選穿山龍的水解工藝條件J.中藥材，2002，9：659.5王鐵杰， 劉中博，文琪珺，等.RP-HPLC法測(cè)定黃山藥和穿龍薯蕷中薯蕷皂苷的含量J.中藥材，2005，28 （12）： 1074.6趙景嬋，郭治安，成小飛，等.