《儀器分析實(shí)驗(yàn)》PPT課件.ppt

儀器分析實(shí)驗(yàn),分子熒光法測定水楊酸和乙酰水楊酸,Cary Eclipse分子熒光光譜儀,分子發(fā)光分析法 熒光分析（fluorescence analysis） 磷光分析（phosphorescence analysis） 化學(xué)發(fā)光分析（chemiluminescence analysis） 該類分析方法與吸收分光光度法有密切關(guān)系。,熒光分析法的應(yīng)用 熒光分析可應(yīng)用于物質(zhì)的定性檢測及定量分析。 熒光法主要應(yīng)用在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、生物醫(yī)學(xué)、藥物、環(huán)境監(jiān)測、食品分析等方面，尤其對體內(nèi)活性物質(zhì)及藥物代謝物的測定更為重要。,熒光分析法的特點(diǎn) 1）靈敏度高，檢出限為10-7-10-9g/ml，比紫外可見分光光度法高101000倍。 2）熒光法的選擇性強(qiáng)，能吸收光的物質(zhì)并不一定能產(chǎn)生熒光，且不同物質(zhì)由于結(jié)構(gòu)不同，雖吸收同一波長，產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度也不同。 3）它還有用樣量少、操作簡便等的優(yōu)點(diǎn)。 熒光法的缺點(diǎn)是，由于許多物質(zhì)不發(fā)射熒光，因此使它的應(yīng)用范圍受到限制。,熒光分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu) 發(fā)光源：采用高壓氙燈。 試樣池：熒光分析用的試樣池需用低熒光材料，常用石英池， 形狀為四面透光的方形。 檢測器：熒光的強(qiáng)度比較弱，因此要求檢測器有較高的靈敏度，常用光電倍增管。 單色器：采用光柵作為單色器。,激發(fā)光譜和熒光光譜 任何發(fā)射熒光的物質(zhì)都具有兩個(gè)特征光譜，即激發(fā)光譜（excitation spectrum）和熒光光譜(fluorescence spectrum)。它們是熒光分析中定性和定量的基礎(chǔ)。 熒光物質(zhì)的最大激發(fā)波長（ex）和最大熒光波長（em）是鑒別物質(zhì)的根據(jù)，也是定量測定時(shí)的最靈敏的條件。,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、學(xué)習(xí)熒光分析法的基本原理和儀器的操作。 2、學(xué)習(xí)熒光分析法進(jìn)行多組分含量分析的原理及方法。,二、基本原理 在稀溶液中，熒光強(qiáng)度IF與入射光強(qiáng)度I0、熒光量子效率F以及熒光物質(zhì)的濃度c等有關(guān)，可表示為： IF= K F I0 bc 式中：K為比例常數(shù)，與儀器性能有關(guān)； 為摩爾吸光系數(shù)；b為液層厚度。 當(dāng)儀器參數(shù)固定后，以最大激發(fā)波長的光為入射光，測定最大發(fā)射波長時(shí)的熒光強(qiáng)度IF與熒光物質(zhì)的濃度c成正比。,乙酰水楊酸（ASA，即阿司匹林）水解能生成水楊酸（SA），而在乙酰水楊酸中，或多或少都存在著水楊酸。由于兩者都有苯環(huán)，也有一定的熒光效率，因而在以三氯甲烷為溶劑的條件下可用熒光法進(jìn)行測定。從乙酰水楊酸和水楊酸的激發(fā)光譜和熒光光譜圖中可以發(fā)現(xiàn)：乙酰水楊酸和水楊酸的激發(fā)波長和發(fā)射波長均不同，利用此性質(zhì)，可在各自的激發(fā)波長和發(fā)射波長下分別測定。,三、儀器與試劑 儀器： Cary Eclipse熒光光度計(jì)，容量瓶，移液管 試劑：乙酰水楊酸、水楊酸、三氯甲烷、乙酸均 為A.R級(jí)，阿司匹林藥片,四、實(shí)驗(yàn)步驟 1）4.00g/ml乙酰水楊酸和7.50g/ml水楊酸使用液的配制 2）激發(fā)光譜和熒光光譜的繪制 3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 4）樣品的分析,五、結(jié)果與討論 1、從繪制的水楊酸和乙酰水楊酸激發(fā)光譜和發(fā)射光譜圖上，確定它們的最大激發(fā)波長和最大發(fā)射波長。 水楊酸：最大激發(fā)波長 nm；最大發(fā)射波長 nm 乙酰水楊酸：最大激發(fā)波長 nm；最大發(fā)射波長 nm 2、分別繪制水楊酸和乙酰水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定試樣溶液中水楊酸和乙酰水楊酸的濃度，并計(jì)算每片阿司匹林藥片中它們的含量（mg）。,六、注意事項(xiàng) 1、比色皿使用之前應(yīng)清洗干凈。若比色皿很臟，清洗方法為：先將比色皿置于鉻酸洗液中浸泡半小時(shí)左右，再用蒸餾水洗凈，涼干留用。 2、比色皿用完之后，應(yīng)先用無水乙醇清洗，后再用蒸餾水洗凈，涼干后收于比色皿盒中。 3、定期清理儀器的比色部分，以保持儀器內(nèi)部的整潔和潔凈。,七、思考題 1、在熒光測定中，為什么激發(fā)光的入射與熒光的接收不在一條直線上，而是呈一定的角度。 2、從乙酰水楊酸和水楊