語言文學論文彩超在小鼠原位肝癌移植模型中的應用研究.doc

彩超在小鼠原位肝癌移植模型中的應用研究 摘要：目的：研究應用彩超評價小鼠原位肝癌移植造模成功的可行性。方法：建立小鼠肝癌原位移植模型， 應用彩超方法觀察(3、5、9、16d)不同造模時間小鼠肝癌原位移植造模情況，同時與解剖觀察腫瘤比較；并取 其腫瘤作病理組織學檢查。結果：彩超在模型建立中后期9d組腫瘤的檢測結果與解剖觀察情況相近，腫瘤檢出率 可達90。結論：彩超檢測方法是一種無創(chuàng)診斷，可用于小鼠原位肝癌模型的實時評價，為建立小鼠原位移植肝癌 模型的判定提供科學依據(jù).畢業(yè)論文 關鍵詞：彩超；小鼠原位肝癌；模型 目前，肝癌治療措施強調實行綜合治療，即通過 西醫(yī)、中醫(yī)及其他有效的手段和方法相結合的綜合 治療。中醫(yī)藥在防治肝癌發(fā)生，減少復發(fā)，減輕放、 化療的毒副作用，提高生存質量，延長生存期等方面 有獨特的優(yōu)勢，隨著醫(yī)藥科技的發(fā)展，中醫(yī)藥治療肝 癌的臨床療效不斷提高，并且也從多方面展開藥物 作用機理的研究。本文開展應用現(xiàn)代臨床醫(yī)療的彩 超技術評價小鼠肝癌原位移植模型，試圖為中醫(yī)藥 臨床防治肝癌藥物的藥效實驗研究提供研究手段及 其新的評價方法。本研究也是國家自然基金項目中 藥復方靶向給藥系統(tǒng)研究的一部分. 材料與方法 1實驗材料小鼠h22肝癌瘤株：中國協(xié)和藥 物所提供；清潔級icrb鼠，雄性，68周齡，體質量 18229：由吉林大學實驗動物中心提供，動物合格證 號101023；bcn一1 360超凈1=作臺jouan公司；kx一41 倒置生物旺微鏡，日本olympus生產(chǎn)；iu22彩超機， phllips公司. 2實驗方法 21小鼠原位肝癌模型的建立及分組取腹腔 接種h22肝癌細胞株后7d的昆明種小鼠。無菌抽取h22 肝癌細胞株腹水，生理鹽水洗滌，離一31 000 rrain，5min 棄上清，臺盼藍染色計數(shù)，生理鹽水調整癌細胞數(shù)至 1108ml備用。健康昆明種小鼠，戊巴比妥鈉腹腔注 射麻醉，小鼠仰臥固定，備皮，常規(guī)消毒鋪巾，于上腹正 中劍突下作一約icm的切口。輕壓雙側肋弓以擠出部分肝葉，濕紗布墊于肝葉下方以保護然后用025ml醫(yī) 用注射器針頭沿肝葉長軸方向插人緩慢注入h22肝 癌細胞懸液003ml(細胞數(shù)為3106)。在拔出針頭的 同時，迅速用棉簽輕壓lmin止血，然后在針眼周嗣用 酒精棉球輕搽。小心地將肝臟網(wǎng)納入腹腔，縫合切口， 術畢【li。術后正常飲水、進食。術后將造模動物隨機4 組，即模型3d組，模型5d組，模型9d組，模型16d組， 另設正常對照組。正常組動物同樣手術方法給予生 理鹽水造模. 22彩超對小鼠肝癌造模的檢測實驗動物分4 次進行b超檢測，每次取5只正常組進行對照，分別于 造模第3、5、9、16h將正常對照組和模型組小鼠腹部 剪毛處理，用彩超儀對小鼠肝臟進行掃描，選擇最 適宜條件。彩超檢測條件：深度：20，增益指數(shù)74， 探頭頻率7512mhz。隨后，脫椎處死小鼠，開腹用 游標卡尺測量腫瘤大小，并與彩超結果進行對照. 23病理形態(tài)學觀察剝離肝臟及其腫瘤，10 甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，he染色，在光學顯 微鏡下進行組織學檢查. 結果 1彩超檢測與解剖肉眼觀察結果正常組小鼠 肝臟彩超檢測結果表明：超聲顯示弱回聲，無結節(jié)； 正常小鼠解剖肝臟表明：肝臟無結節(jié)。模型組小鼠肝 臟超聲與解剖檢測結果表明：小鼠原位移植肝癌存 在高回聲、等回聲、低回聲3種類型，其中以高回聲多 見并較易發(fā)現(xiàn)和測量。當腫瘤生長3d時，有50b鼠 生長出平均02cm014cm大小的結節(jié)，此ft,寸b超顯 示10只小鼠均無結節(jié)；當造模第5天時，有l(wèi)oojx鼠 長出平均o57cmx043em大小不等的結節(jié)或腫塊，并 有1只呈彌漫性生長，彩超僅檢查出一只實際大小在 029emx029em的腫瘤，檢出率占總數(shù)的10；當造 模第9天時，有1001”鼠長出平均089cmx043era， 彩超的檢出率可達90；至第16天時，有100d、鼠長 出089emx066em的腫瘤并且小鼠多伴有腹水，此時 彩超的檢出率仍為90。結果見表l、圖l. 表1 彩超與解剖觀察不問時間小鼠原位移植肝癌情況=10) 彩超檢查解剖觀察造模天數(shù)麗面天萬可忑夏二了蕊麗看夭不ii忑i再再薄 2病理學檢測結果正常組小鼠肝d,nf清晰， 肝細胞索、肝竇排列整齊，匯管區(qū)結構清楚；肝癌模 型組腫瘤細胞生長旺盛，較為彌散，細胞核體積較 大，深染，多呈圓形或橢圓形，胞漿豐富略嗜堿性， 有的胞漿呈空泡狀，可見病理性核分裂與瘤巨細胞， 見圖1. 討論 目前，建立小鼠肝癌動物模型方法主要有皮下 移植和肝癌的原位移植，而肝癌的原位移植能夠更 好地模仿人肝癌體內的血供和生長環(huán)境，提供與肝 癌病人相似的肝癌生物學特性，更好地反映抗癌藥 物的藥效學指標。但此種方法要求接種手法準確， 對操作環(huán)境要求必須無菌，尤其此種模型建立是否 成功常采用動物處死后評價。這是大多數(shù)研究者謹 慎采用此方法的原因之•。目前，采用小鼠原位肝癌 移植模型進行抗腫瘤藥物研究，缺少行之有效的模 型建立評價方法. 彩超是根據(jù)形態(tài)學的改變?yōu)榕R床診斷疾病提供證據(jù)的，它不像病理那樣作出準確的診斷，但一些疾 病在超聲顯像中有特殊表現(xiàn)，并且具有活體、實時、 動態(tài)的優(yōu)點。肝癌的聲像圖有其規(guī)律性，根據(jù)這些變 化的規(guī)律，目前臨床上彩超檢查是常用的診斷方法。上常用的彩超機對于實驗有使用方便，容易獲 得的優(yōu)點，因此，本實驗用臨床用彩超機對小鼠原位 移植肝腫瘤模型建立進行評價，探討用其評價小鼠 原位肝腫瘤的可行性. 實驗結果表明：彩超在對小鼠原位肝癌移植模型 建立的初期(0-5天)評價效果并不理想，檢出率僅為 10，但在腫瘤生長成熟期(大于057era x 043era)對 腫瘤的檢出率有了明顯的提高，檢出率可達到90. 臨床用彩超機在小鼠原位肝癌移植模型的建立過程 中適用于腫瘤成熟期的評價.臨床用彩超機探頭的常用頻率范圍為l一15 mhz，最高頻率為40 mhz，而用于小動物實驗檢測的 高頻率超聲系統(tǒng)探頭頻率為125825mhz，平均中 心頻率為40 mhz，本實驗發(fā)現(xiàn)臨床用彩超機探頭頻 率較低，因此如能夠采用高頻率的探頭將會提高實 驗的檢出率和準確度. 對小鼠原位肝癌移植模型的評價采用彩超手段 是一種無創(chuàng)診斷和監(jiān)澳flb鼠肝癌原位腫瘤的可行檢 測方法，可為中醫(yī)臨床防治肝癌藥物實驗用小鼠肝 癌原位腫瘤模型建立的判斷提供科學依據(jù)。此檢測 方法也可用于其它實驗動物肝癌模型建立的評價. 參考文獻 【l】李志字，薛華，何生，等葡萄球菌腸毒素a脂質體對小鼠原位移 植m2肝癌的治療作用中華肝膽外科雜志嬲，10(10陽b，_6 li zhi•yu，xue hua，he sheng，et a1antitumor ef