紫外可見分光光度法的原理及應(yīng)用-PPT【研究知識】

1、紫外-可見分光光度法的原理及應(yīng)用,紫外-可見分光光度法的原理,物質(zhì)對光的選擇吸收 當一束光照射到某種物質(zhì)的固態(tài)物或溶液上時，一部分光會被吸收或被反射，不同的物質(zhì)對于照射它們的光束的吸收程度是不同的，對某個波長的光吸收強烈，對另外波長的光吸收很小或不吸收，我們把這種現(xiàn)象稱為光的選擇吸收。 一切物質(zhì)都會對可見和不可見光中的某些波長的光進行吸收。,物質(zhì)呈現(xiàn)各種各樣顏色，就是它們對可見光 中某些特定波長的光線選擇吸收的結(jié)果。,物質(zhì)的結(jié)構(gòu)決定了物質(zhì)在吸收光時只能吸收某些特定波長的光。我們可以利用測量物質(zhì)對某種波長的光的吸收來了解物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特性。 用經(jīng)過分光后的不同波長的光依次透過該物質(zhì)，通過測量物質(zhì)對不

2、同波長的光的吸收程度（吸光度），以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標作圖，就可以得到該物質(zhì)在測量波長范圍內(nèi)的吸收曲線。這種曲線體現(xiàn)了物質(zhì)對不同波長的光的吸收能力，稱為吸收光譜。,紫外-可見分光光度法的原理,入射光,透射光,檢測器,吸收光譜,紫外-可見分光光度法的原理-定性分析,不同結(jié)構(gòu)的物質(zhì)吸收光譜也不同，這是對物質(zhì)進行定性分析的基礎(chǔ)：通過檢測吸收光譜來比對鑒定分析物質(zhì)。,利用標準物質(zhì)定性分析 在相同條件下，測定未知物的吸收光譜，與標準物的吸收光譜進行比較，如果兩吸收光譜的形狀和吸收峰的數(shù)目、位置、拐點等完全一致，就可初步判定未知物與標準物是同一種物質(zhì)。,紫外-可見分光光度法是利用物質(zhì)對光的吸收光譜

3、，對物質(zhì)進行定性分析或定量分析的方法。按所吸收光的波長區(qū)域不同，分為紫外分光光度法和可見分光光度法，合稱為紫外-可見分光光度法。,紫外-可見分光光度法的原理-定量分析,Lambert Beer 光吸收定律：當一束平行單色光通過均勻的樣品時，其吸光度與吸光組分的濃度、吸收池的厚度乘積成正比.,吸收系數(shù),吸光系數(shù) 1定義 一定條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度及單位液層厚度時的吸光度，叫這個物質(zhì)的吸光系數(shù)。 2兩種表示方法 (1) 摩爾吸光系數(shù)( )：一定波長下，吸光物質(zhì)的溶液濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時，溶液的吸光度。 (2)百分吸光系數(shù)()：一定波長下，吸光物質(zhì)的溶液濃度為1g/100ml(

4、1%)，液層厚度為1cm時，溶液的吸光度。,紫外-可見分光光度法的原理-定量分析,最大吸收波長,利用標準曲線法定量分析 在一定波長（max）下測定某物質(zhì)的標準系列溶液的吸光度作標準曲線，然后測定樣品溶液的吸光度值，由標準曲線求得樣品溶液的濃度或含量。,測定步驟 首先配制一系列被測物的標準溶液，測其吸光度，繪出A-c工作曲線； 在相同條件下，測出被測物的吸光度Ax; 根據(jù)Ax的值在工作曲線上查處cx的大小。 適用范圍 大批重復試樣的分析。,標準曲線法(工作曲線法),未知物的吸光度,未知物的濃度,根據(jù) Lambert- Beer定律，以該物質(zhì)吸收光譜圖中的max為入射光，首先配制一個與被測溶液濃度

5、相近的標準溶液cs，測其As，再將樣品溶液推入光路，測其Ax ，則試樣溶液的濃度cx為： 此法適于非經(jīng)常性的分析工作，準確度不如標準曲線法。,紫外可見分光光度法的定量方法,單一組分的測定 （1）標準對照法,17:24:36,例： 維生素B12的含量測定精密吸取B12注射液2.50mL，加水 稀釋至10.00mL；另配制對照液，精密稱定對照品25.00mg，加水稀釋至1000mL。在361nm處，用1cm吸收池，分別測定吸光度為0.508和0.518，求B12注射液注射液的濃度（單位ug/mL),1）對照法,2.吸收系數(shù)法,C=A/E1%L,當其為百分吸收系數(shù)E1%時,吸光度的測量：紫外-可見分

6、光光度計,光源,單色器,吸收池,檢測器,顯示,在紫外可見分光光度計中，常用的光源有兩類：可見光光源，如鎢燈和鹵鎢燈；紫外光源，如氫燈和氘燈。,1 光源,紫外-可見分光光度計的組成,根據(jù)測定時所選用的光源： 可見分光光度法(400800nm) 紫外分光光度法(200400 nm)紅外分光光度法(800nm50m),單色器以棱鏡或光柵分光，提供單色光。,2 單色器,3吸收池,吸收池也稱比色皿，用于盛放參比溶液或待測溶液。它是由無色透明、耐腐蝕、化學性質(zhì)相同、厚度相等的玻璃制成的，按其厚度分為0.5 cm，1 cm，2 cm，3 cm和5 cm。在可見光區(qū)測量吸光度時使用玻璃吸收池，紫外區(qū)則使用石英

7、吸收池。使用比色皿時應(yīng)注意保持清潔、透明，避免磨損透光面。,紫外-可見分光光度計的組成,4 檢測器 檢測器的作用是檢測光信號，并將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘枴，F(xiàn)今使用的分光光度計大多采用光電管或光電倍增管作為檢測器。,5 信號顯示系統(tǒng) 常用的信號顯示裝置有自動記錄和數(shù)字顯示裝置等。,儀器,可見分光光度計,儀器,紫外-可見分光光度計,優(yōu)點：靈敏度高,主要用于微量分析； 準確度高,濃度測量相對誤差僅有13%； 操作簡便、迅速，所需設(shè)備并不復雜； 應(yīng)用廣泛。 缺點： 僅適合微量分析； 所需儀器相對昂貴。,紫外分光光度法的優(yōu)缺點,22,紫外-可見分光光度法的應(yīng)用范圍,幾乎所有的無機元素和在紫外及可見光區(qū)有特征吸收的有機物或有機化合物都能用紫外/可見分光光度法進行測定。目前，紫外可見分光光度計已成為全世界歷史最悠久、使用最多、覆蓋面最廣的常規(guī)分析儀器。,紫外-可見分光光度法的應(yīng)用范圍,紫外-可見分光光度法的應(yīng)用范圍