分析方法驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、NO. 編號(hào)：Analytical Method Validation Standard Operation Procedure分析方法驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程Dept.部門Name姓名Signature簽名 Date日期 Prepared by制定QC質(zhì)量控制部Reviewed by審核QC質(zhì)量控制部Reviewed by審核QA質(zhì)量保證部Approved by批準(zhǔn)Effective Date生效日期Review Date復(fù)審日期Distribution Department分發(fā)范圍： PM-Manufacture生產(chǎn)部制造 PM-Package生產(chǎn)部包裝 PM-Warehouse生產(chǎn)部倉(cāng)庫(kù) EM設(shè)

2、備工程部 GM人事行政部n QA質(zhì)量保證部n QC質(zhì)量控制部 EHS環(huán)境健康安全部 Other其他（說(shuō)明具體部門）_ Table of Contents目錄1Purpose 目的32Scope 范圍33EHS 環(huán)境健康安全34Definition 定義35Responsibility 職責(zé)56Flow Chart 流程圖57Procedure 程序/要求67.1Requirement 要求67.2Procedure 步驟98References 參考189Annexures 附件索引1810Revision History 版本歷史181. Purpose目的描述分析方法的驗(yàn)證步驟，確認(rèn)分析方

3、法達(dá)到使用要求。為以下試驗(yàn)的驗(yàn)證提供指導(dǎo)和參考。 鑒別試驗(yàn)； 雜質(zhì)的定量測(cè)試或限度檢查； 原料藥和制劑中有效成分含量測(cè)定； 制劑中其它成分（如防腐劑等）的測(cè)定； 制劑溶出度、釋放度等檢查中，其溶出量等； 微生物限度。2. Scope范圍本程序適用的化學(xué)方法和微生物方法的驗(yàn)證，這些檢測(cè)方法用于以下目的：2.1 進(jìn)行穩(wěn)定性研究從而建立產(chǎn)品的有效期；2.2 商業(yè)用途及臨床用途的產(chǎn)品及其生產(chǎn)過(guò)程、清潔過(guò)程的放行檢測(cè)。另外，根據(jù)需要，本程序也可適用于在使用的上市產(chǎn)品、賦形劑、和原料產(chǎn)品的新方法的開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證。3. EHS環(huán)境健康安全不適用。4. Definition定義4.1 空白樣品不含被測(cè)物的特定樣品

4、。4.2 賦形劑在劑型配方中除原料藥以外的其他成分。4.3 安慰劑 和藥品組成基本相同但不含活性成分或用惰性成分替代活性成分的制劑，或由藥品賦形劑組成的混合物，其用量等同于藥品制劑中的用量。4.4 準(zhǔn)確度真實(shí)值或認(rèn)可的參考值與測(cè)量值之間的相近程度。4.5 檢測(cè)限（DL）一個(gè)分析規(guī)程的檢測(cè)限是指樣品中的被測(cè)物能被檢測(cè)到的最低量，但此最低量不一定要定量到某一確定的數(shù)值。等同于檢測(cè)限度（LOD）。4.6 定量限（QL）分析規(guī)程的定量限是指樣品中的被分析物能被精確和準(zhǔn)確定量的最低量。定量限是樣品組成中低水平化合物的定量分析的參數(shù)，尤其應(yīng)用于雜質(zhì)和/或降解產(chǎn)物的測(cè)定。等同于最低定量限（LOQ）。4.7

5、專屬性（選擇性）指在一些可能存在的組分，如雜質(zhì)、降解物、基質(zhì)等存在時(shí)，對(duì)被分析物準(zhǔn)確可靠測(cè)定的能力。如果一個(gè)分析方法缺乏專屬性，可由其他輔助的分析方法作補(bǔ)充。4.8 線性分析規(guī)程的線性是指（在給定的范圍）所獲得的測(cè)試結(jié)果與樣品中被分析物濃度（數(shù)量）呈比例關(guān)系的能力。4.9 范圍分析規(guī)程的范圍是樣品中被分析物最高和最低濃度（數(shù)量）之間（包含最高和最低濃度）的間隔，已證明在此范圍內(nèi)分析規(guī)程具有適宜的精密度、準(zhǔn)確度和線性。4.10 精密度分析方法的精密度是指在規(guī)定條件下自均質(zhì)樣品的多次取樣所獲得的一系列測(cè)量之間的接近程度。精密度可從三個(gè)水平考慮：重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性。采用均質(zhì)的，可信的樣品進(jìn)行

6、精密度的研究。如不具備，可使用人工配制的樣品或樣品溶液進(jìn)行研究。精密度通常以標(biāo)準(zhǔn)偏差或相關(guān)系數(shù)表示。4.11 重復(fù)性在短時(shí)期內(nèi)相同操作狀況下的測(cè)量精密度，亦稱為方法偏差。4.12 中間精密度中間精密度表示實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部變量的精密度，比如不同的測(cè)試日，不同的分析員或不同的設(shè)備。4.13 加標(biāo)樣品一種制備好的物料，通常是在安慰劑（空白制劑）中加入了已知量的被分析物。4.14 耐用性分析規(guī)程的耐用性是衡量它不受方法中參數(shù)的微小的、但是經(jīng)過(guò)設(shè)計(jì)的變化的影響的能力，指示了規(guī)程在常規(guī)使用中的可靠性。4.15 系統(tǒng)適用性分析規(guī)程的系統(tǒng)適用性是許多分析規(guī)程的基本要素，通過(guò)對(duì)設(shè)備、電氣、分析操作和樣品進(jìn)行綜合評(píng)估看

7、其是否能達(dá)到預(yù)期要求。系統(tǒng)適用性評(píng)估是從可能影響分析結(jié)果各方面的因素對(duì)整個(gè)分析系統(tǒng)評(píng)估。4.16 方法驗(yàn)證方案方法驗(yàn)證方案是一份如何進(jìn)行驗(yàn)證工作的確認(rèn)文件。方案規(guī)定了對(duì)什么分析方法進(jìn)行驗(yàn)證？驗(yàn)證哪些特性值？各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的目的？如何進(jìn)行數(shù)據(jù)分析？此方案必須由質(zhì)量控制部經(jīng)理和質(zhì)量保證部經(jīng)理批準(zhǔn)。4.17 藥典方法的驗(yàn)證（確認(rèn)）藥典方法通常被認(rèn)為是法定的且經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的分析方法。使用藥典方法時(shí)應(yīng)能證明方法在實(shí)驗(yàn)室的適用性，這就是通常所說(shuō)的方法確認(rèn)。一般要進(jìn)行方法確認(rèn)的有：l 滴定法l 色譜法（有關(guān)物質(zhì)，含量，限度試驗(yàn)，鑒別），l 光譜法（如用于鑒別）。每一類型的藥典方法的確認(rèn)在USP附錄中已有規(guī)定。如某一藥

8、典方法用于其他品種，必須進(jìn)行完整的方法驗(yàn)證。4.18 內(nèi)包裝材料直接與制劑接觸的包裝材料。4.19 外包裝材料與制劑不直接接觸的包裝材料。5. Responsibility職責(zé)5.1 質(zhì)量保證部5.1.1根據(jù)驗(yàn)證主計(jì)劃，確定需要進(jìn)行驗(yàn)證、再驗(yàn)證或確認(rèn)的分析方法。5.1.2收集和準(zhǔn)備支持性的分析文件資料，提供任何有關(guān)分析方法的現(xiàn)狀或存在問(wèn)題的相關(guān)信息。分析文件資料包括，但不限于：a) 待驗(yàn)證/確認(rèn)的分析方法及擬定的控制標(biāo)準(zhǔn)。b) 分析方法的研發(fā)或早期驗(yàn)證報(bào)告，如有。c) 相關(guān)的注冊(cè)申報(bào)文件和公司的內(nèi)部文件，或藥典參照資料。5.1.3審核驗(yàn)證數(shù)據(jù)記錄。5.1.4審核和批準(zhǔn)方法驗(yàn)證/確認(rèn)方案。5.1

9、.5審核和批準(zhǔn)方法驗(yàn)證/確認(rèn)總結(jié)報(bào)告。5.1.6審核和批準(zhǔn)補(bǔ)充的或修訂的方法驗(yàn)證/確認(rèn)方案，如適用。5.2 質(zhì)量控制部5.2.1起草方法驗(yàn)證/確認(rèn)方案和總結(jié)報(bào)告.5.2.2按照已批準(zhǔn)的方法驗(yàn)證/確認(rèn)方案實(shí)施驗(yàn)證。匯總數(shù)據(jù)及圖譜信息，對(duì)過(guò)程中出現(xiàn)的不合格進(jìn)行必要的實(shí)驗(yàn)室調(diào)查。6. Flow Chart流程圖7. Procedure程序/要求7.1 Requirement要求7.1.1 方法驗(yàn)證/確認(rèn)方案方法驗(yàn)證/確認(rèn)方案應(yīng)在實(shí)施驗(yàn)證前建立并獲批準(zhǔn)，確定了預(yù)定的和認(rèn)可的接受標(biāo)準(zhǔn)。驗(yàn)證/確認(rèn)過(guò)程（要求驗(yàn)證特性）的結(jié)果要認(rèn)真記錄，以此得出結(jié)論來(lái)判定此方法是否可達(dá)到預(yù)定要求。方法驗(yàn)證/確認(rèn)方案包含以下基

10、本要點(diǎn)：7.1.1.1 有一個(gè)可追蹤的方案編號(hào)。7.1.1.2 描述待驗(yàn)證/確認(rèn)的分析方法。7.1.1.3 描述每項(xiàng)驗(yàn)證活動(dòng)及其目的。7.1.1.4 需評(píng)估的驗(yàn)證/確認(rèn)特性參數(shù)的名稱（如，線性、準(zhǔn)確度等)7.1.1.5 要求驗(yàn)證的特性參數(shù)（參見(jiàn)附件1）：a） 準(zhǔn)確度b） 線性和范圍c） 精密度-重復(fù)性d） 中間精密度e） 專屬性f） 定量限g） 檢測(cè)限h） 耐用性i） 系統(tǒng)適用性測(cè)試要求確認(rèn)的特性-參見(jiàn)現(xiàn)行版USP附錄7.1.1.6 對(duì)照品參照SOP-Z-QC-003 參比對(duì)照品管理程序中的規(guī)定。7.1.1.7 記錄實(shí)驗(yàn)中所用物料的特征（比如，批號(hào)、過(guò)濾器供應(yīng)商和型號(hào)、安慰劑組成等）以及是否有

11、特定的處理?xiàng)l件如溫度、濕度、光照等。列出所有在方法驗(yàn)證/確認(rèn)過(guò)程中將使用的物料、設(shè)備、試劑和樣品/標(biāo)準(zhǔn)品濃度、參數(shù)設(shè)定（比如，流速、色譜柱批號(hào)、樣品儲(chǔ)存溫度、試劑濃度等）。7.1.1.8 規(guī)定重復(fù)測(cè)試的次數(shù)。7.1.1.9 在評(píng)估每一驗(yàn)證特性值時(shí)將采用預(yù)定的接受標(biāo)準(zhǔn)和統(tǒng)計(jì)工具（比如，均值、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差、線性回歸分析等）。7.1.1.10接受標(biāo)準(zhǔn)可利用開(kāi)發(fā)研究的資料及其他信息來(lái)建立驗(yàn)證接受標(biāo)準(zhǔn)。如果驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不符合接受標(biāo)準(zhǔn)，失敗的根本原因的評(píng)估及整改措施必須記錄并說(shuō)明，并返回研發(fā)部門進(jìn)行進(jìn)一步的評(píng)估，并且應(yīng)獲得QA及QC的批準(zhǔn)。7.1.2 藥典分析方法藥典賦形劑的方法不需再驗(yàn)證。對(duì)產(chǎn)品的功效

12、或質(zhì)量起關(guān)鍵作用的非藥典賦形劑，其關(guān)鍵的測(cè)試方法應(yīng)按照科學(xué)依據(jù)進(jìn)行驗(yàn)證。藥典方法通常被認(rèn)為已經(jīng)通過(guò)驗(yàn)證，因此不作驗(yàn)證要求。藥典分析方法對(duì)原料產(chǎn)品和制劑產(chǎn)品的適應(yīng)性，可通過(guò)方法在使用方滿足系統(tǒng)適應(yīng)性的要求來(lái)確認(rèn)；必要時(shí)，可按本標(biāo)準(zhǔn)所述進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn)并作報(bào)告：專屬性、中間精密度、樣品及標(biāo)準(zhǔn)品溶液的穩(wěn)定性。藥典中分析原料產(chǎn)品和制劑制劑產(chǎn)品的分析規(guī)程可能沒(méi)有關(guān)于穩(wěn)定性的陳述，有時(shí)需采用額外的規(guī)程來(lái)衡量穩(wěn)定性及原料產(chǎn)品和制劑產(chǎn)品中的雜質(zhì)。所有這些方法需經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。7.1.3 藥典微生物測(cè)試方法藥典方法無(wú)需驗(yàn)證。然而這些方法必須通過(guò)確認(rèn)以顯示其在實(shí)際使用條件下的合適性。藥典方法允許的變量（比如，培養(yǎng)基、稀釋劑

13、、過(guò)濾器等）應(yīng)被認(rèn)為是藥典方法中的一部分，但必須證明此種變化不會(huì)影響方法的性能（比如，中和、回收率、培養(yǎng)基供應(yīng)商等）。7.1.4 非藥典方法用于測(cè)試中間體、藥品等的非藥典方法須根據(jù)本規(guī)程、ICH、FDA、USP、中國(guó)藥典的指南進(jìn)行驗(yàn)證。對(duì)以下驗(yàn)證特性進(jìn)行驗(yàn)證： a) 準(zhǔn)確度b) 精密度（重復(fù)性和中間精密度）c) 專屬性（包括影響因素試驗(yàn)）d) 檢測(cè)限（DL）-（LOD）e) 定量限（QL）-（LOQ）f) 線性g) 范圍h) 耐用性i) 系統(tǒng)適用性7.1.5再驗(yàn)證當(dāng)任何測(cè)試參數(shù)或方法進(jìn)行了修改（比如，不同實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的測(cè)試、不同的培養(yǎng)基）、或產(chǎn)品工藝（新的原料合成工藝、新的制造工藝或配方的變更或

14、其它會(huì)影響物料特性的修改），方法的適用性需重新驗(yàn)證。以確保分析程序能持續(xù)的保證藥品的特性、強(qiáng)度、質(zhì)量、純度和效價(jià)以及藥品的生物利用度。如果分析程序在規(guī)定的使用過(guò)程中，只有通過(guò)重復(fù)的調(diào)整分析規(guī)程中的操作條件才能滿足已建立的系統(tǒng)適用性，那么此分析規(guī)程須提請(qǐng)方法開(kāi)發(fā)部門進(jìn)行再評(píng)估、修正和再驗(yàn)證。方法驗(yàn)證的程度應(yīng)基于變更的性質(zhì)及根據(jù)驗(yàn)證方案的要求而定。7.1.6方法驗(yàn)證總結(jié)報(bào)告方法驗(yàn)證/確認(rèn)總結(jié)報(bào)告的格式參照驗(yàn)證報(bào)告的格式。7.1.6.1 報(bào)告包含的內(nèi)容報(bào)告中應(yīng)包含驗(yàn)證過(guò)程中所有的實(shí)驗(yàn)、接受標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)果和數(shù)據(jù)來(lái)源。所有與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的詳細(xì)內(nèi)容（材料、設(shè)備、方法參數(shù)，等等）應(yīng)歸納在報(bào)告中并進(jìn)行評(píng)估。驗(yàn)證活動(dòng)和

15、結(jié)果應(yīng)合理安排，注意每一項(xiàng)目的實(shí)質(zhì)性和小結(jié)。按接受標(biāo)準(zhǔn)的要求，把實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，如方法編號(hào)、樣品信息、原始數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)（平均值、RSD、線性回歸數(shù)據(jù)等）以表格的形式匯總。相關(guān)的色譜圖、光譜圖等都要包括在報(bào)告中，以支持實(shí)驗(yàn)中的相關(guān)數(shù)據(jù)結(jié)果（如：樣品和標(biāo)準(zhǔn)圖譜、專屬性/強(qiáng)度研究圖譜等）。在實(shí)施驗(yàn)證/確認(rèn)方案期間發(fā)生的所有的實(shí)驗(yàn)室調(diào)查也將匯總在方法驗(yàn)證/確認(rèn)報(bào)告中。7.1.6.2 結(jié)果修約、判斷、結(jié)論 所有數(shù)據(jù)應(yīng)該根據(jù)現(xiàn)行版SOP-Z-QA-022“有效數(shù)字的修約和運(yùn)算”進(jìn)行修約。所有報(bào)告中的數(shù)據(jù)將對(duì)照預(yù)定的接受標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)估。應(yīng)明確出驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的結(jié)論，即該方法經(jīng)驗(yàn)證是否符合使用要求。7.1.6.3 批準(zhǔn)方

16、法驗(yàn)證/確認(rèn)報(bào)告必須經(jīng)過(guò)與批準(zhǔn)原驗(yàn)證/確認(rèn)方案相同級(jí)別的簽名者批準(zhǔn)。7.1.7變更控制驗(yàn)證過(guò)程中的變更必須根據(jù)現(xiàn)行版SOP-Z-TM-001“驗(yàn)證管理程序”。7.2 Procedure步驟7.2.1 定量/限度測(cè)試每次驗(yàn)證運(yùn)行之前或期間須評(píng)估方法中規(guī)定的系統(tǒng)適用性參數(shù)。7.2.1.1準(zhǔn)確度根據(jù)測(cè)試程序制備供試液，比如在配方成分（空白制劑）中加入已知量的被分析物（加標(biāo)樣品）的80，100和120，以確定方法的準(zhǔn)確度。配方成分應(yīng)盡可能反映成品的組成。測(cè)定準(zhǔn)確度時(shí)，應(yīng)包含了整個(gè)測(cè)試規(guī)格限度的范圍。l 三個(gè)濃度，每個(gè)濃度下制備三份樣品。l 計(jì)算每個(gè)樣品相對(duì)于已知加入量的百分回收率。按接受標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估每一結(jié)

17、果。l 百分回收率的公式為：回收率=測(cè)得量/加入量*100接受標(biāo)準(zhǔn)：參見(jiàn)附件2。7.2.1.2精密度 重復(fù)性重復(fù)性表示短期內(nèi)在相同的操作條件下的精密度。重復(fù)性也被稱為系統(tǒng)精密度。l 所有測(cè)試項(xiàng)目的重復(fù)性：對(duì)于制劑產(chǎn)品，根據(jù)測(cè)試規(guī)程制備配方成分（空白制劑）的供試液，在其中加了已知量的被分析物（加標(biāo)樣品），準(zhǔn)備6份100%測(cè)試濃度供試液來(lái)測(cè)定方法的精密度；或在規(guī)定范圍內(nèi)至少9個(gè)樣品（如3個(gè)濃度水平，每個(gè)3份樣品）完成檢測(cè)。接受標(biāo)準(zhǔn)：參見(jiàn)附件2。7.2.1.3中間精密度樣品的制備、分析和計(jì)算詳見(jiàn)第7.2.1.2節(jié)精密度- 重復(fù)性，適用所有測(cè)試物質(zhì)，并由第二個(gè)分析員、在不同的天、使用不同儀器（如果實(shí)驗(yàn)

18、室內(nèi)有兩臺(tái)或以上儀器并經(jīng)過(guò)確認(rèn)合格），且采用各自配制的試劑/溶液。分別計(jì)算兩個(gè)分析員的測(cè)試結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。接受標(biāo)準(zhǔn)：第2個(gè)分析員的結(jié)果也必須滿足給定的重復(fù)性接受標(biāo)準(zhǔn)，兩個(gè)分析員的RSD必須滿足中間精密度接受標(biāo)準(zhǔn)，參見(jiàn)附件2。7.2.1.4專屬性在鑒別測(cè)試、雜質(zhì)及含量測(cè)定的驗(yàn)證期間，應(yīng)進(jìn)行專屬性的研究。用于證明專屬性的規(guī)程依賴于所用分析規(guī)程的預(yù)期目標(biāo)。并不是總能證明某分析規(guī)程對(duì)于一個(gè)特定的被測(cè)物具有專屬性（完全辨別）。如此，建議使用由兩個(gè)或多個(gè)分析規(guī)程來(lái)達(dá)到必需的辨別水平。A. 鑒別測(cè)試鑒別測(cè)試應(yīng)運(yùn)用于所關(guān)注的活性物質(zhì)、相關(guān)化合物、已知降解物以及空白制劑。并對(duì)含有該物質(zhì)的測(cè)試顯陽(yáng)性結(jié)果，對(duì)不

19、含有該物質(zhì)的樣品顯陰性結(jié)果?？梢圆捎媒Y(jié)構(gòu)類似的合成前體或降解產(chǎn)物。但如果缺乏合成前體、降解產(chǎn)物，或者此活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與某一可從商業(yè)渠道獲得的化合物相關(guān)，那么鑒別測(cè)試應(yīng)采用此可獲得的化合物。一般應(yīng)對(duì)活性物質(zhì)、相關(guān)化合物、已知降解物以及空白制劑分別進(jìn)行檢測(cè)并獲得相應(yīng)的檢測(cè)結(jié)果。接受標(biāo)準(zhǔn)：相對(duì)于其它結(jié)構(gòu)相似的化合物，活性物質(zhì)的響應(yīng)是專一的（比如，相對(duì)保留時(shí)間、色澤、吸收波長(zhǎng)等）?；钚晕镔|(zhì)、相關(guān)化合物、已知降解物以及空白制劑應(yīng)不互相影響檢測(cè)結(jié)果。B. 含量和雜質(zhì)測(cè)試（制劑產(chǎn)品）如可能，制劑產(chǎn)品的含量和雜質(zhì)測(cè)試方法可采用相同于原料產(chǎn)品的方法。但仍需進(jìn)一步確定專屬性。色譜方法中，應(yīng)用典型的色譜圖來(lái)證明專屬

20、性，并在圖上恰當(dāng)?shù)貥?biāo)出每一種成分，應(yīng)在一等程度上考察關(guān)鍵組分的分離，對(duì)關(guān)鍵性分離，可用兩個(gè)洗脫程度最接近的化合物的分離度來(lái)證明其專屬性。當(dāng)非專屬性方法測(cè)定含量時(shí)，可用其他輔助性的分析方法來(lái)證實(shí)整個(gè)方法的專屬性，如：采用滴定方法來(lái)測(cè)定用于放行的原料藥，可聯(lián)合使用含量測(cè)定和雜質(zhì)的合理檢測(cè)方法。1.可以得到雜質(zhì)的情況對(duì)含量測(cè)定來(lái)說(shuō)，專屬性應(yīng)包括提供被分析物在雜質(zhì)和(或)賦形劑存在時(shí)能被區(qū)分的證明，實(shí)際操作中可以在純物質(zhì)(原料或制劑)中加入一定量的雜質(zhì)或輔料，與未加雜質(zhì)或輔料的樣品測(cè)定結(jié)果相比較，以證明其含量測(cè)定結(jié)果不受這些物質(zhì)的影響。對(duì)雜質(zhì)檢查來(lái)說(shuō)，通過(guò)加入含有一定量雜質(zhì)的原料藥或制劑，證明各雜質(zhì)之

21、間能分離，并也能與樣品基質(zhì)中其他組分分離2.無(wú)法得到雜質(zhì)的情況如果雜質(zhì)或降解物的對(duì)照品不能得到，專屬性可以通過(guò)將含一定量的雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的樣品測(cè)定結(jié)果與另一種成熟的方法測(cè)定結(jié)果比較，如藥典方法或經(jīng)論證的其他方法(獨(dú)立的方法)進(jìn)行比較來(lái)證實(shí)。必要時(shí)，應(yīng)包括放置在強(qiáng)力破壞試驗(yàn)條件下，即光、熱、濕度、酸、堿破壞及氧化情況下的樣品的測(cè)定。如果雜質(zhì)或降解物的對(duì)照品不能得到，專屬性可以通過(guò)路含一定量的雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的樣品測(cè)定結(jié)果與另一種成熟的方法測(cè)定結(jié)果比較，如藥典方法或經(jīng)論證的其他方法(獨(dú)立的方法)進(jìn)行比較來(lái)證實(shí)。l 對(duì)于含量測(cè)定，應(yīng)比較兩個(gè)結(jié)果。l 對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定，應(yīng)比較雜質(zhì)譜。色譜峰純度測(cè)試有助于判斷

22、被測(cè)物的色譜峰是單個(gè)還是多個(gè)成分（如：二極管陣列、質(zhì)譜）。a) 配制等于或高于測(cè)試時(shí)采用的濃度的空白樣品。b) 必要時(shí)，在下述條件下暴露樣品進(jìn)行破壞試驗(yàn)：空白樣品 控制- 未受耐受性挑戰(zhàn)的空白樣品。 熱 空白樣品在40下耐受6個(gè)月或60下持續(xù)1個(gè)月，或其他適當(dāng)條件。 光 將一薄層（約2 mm厚），暴露在雙倍于ICH 耐光性指南中要求的條件下，或其他適當(dāng)條件。 其他：酸、堿、氧化、高濕空白樣品，在需考察的條件中，放置適當(dāng)時(shí)間。藥品 熱- 制劑在40下耐受6個(gè)月或60下持續(xù)1個(gè)月，或其他適當(dāng)條件。 光 制劑去除包裝，暴露在雙倍于ICH 耐光性指南中要求的條件下(總曝光量為2.4 百萬(wàn)勒克斯小時(shí) 和

23、400 瓦特小時(shí)/平方米的近紫外能量)。 其他：酸、堿、氧化、高濕制劑去除包裝，或按處方配制的混合樣品在需考察的條件中，放置適當(dāng)時(shí)間。c) 經(jīng)上述暴露后測(cè)試。d) 一般還應(yīng)檢查活性成分與相關(guān)化合物、已知降解物以及空白制劑之間的分離度情況。當(dāng)制劑產(chǎn)品為復(fù)方制劑時(shí)，還應(yīng)分別考察各活性成分的出峰情況。e) 接受標(biāo)準(zhǔn)空白樣品應(yīng)無(wú)干擾；活性成分與相關(guān)化合物、已知降解物以及空白制劑之間的分離度應(yīng)符合要求；復(fù)方制劑時(shí)，各活性成分的出峰時(shí)間應(yīng)不互相干擾；已知的相關(guān)化合物和耐受性試驗(yàn)引入的降解產(chǎn)物不應(yīng)干擾活性物質(zhì)的測(cè)定?？瞻兹芤河酶髯韵鄳?yīng)的樣品溶液來(lái)評(píng)估，以確認(rèn)是否有來(lái)自空白液的影響。計(jì)算活性物質(zhì)的含量以及估算

24、大等于QL水平的降解產(chǎn)物。如果降解未達(dá)到5-20%，與管理層討論并評(píng)估測(cè)得的降解程度。7.2.1.5檢測(cè)限A. 基于目測(cè)檢查一般用于非儀器方法，但也可用于儀器方法。通過(guò)分析含已知被測(cè)物濃度的樣品，來(lái)確立能可靠的檢測(cè)到被測(cè)物的最低水平。B. 基于信噪比此模式僅適用于能產(chǎn)生噪音基線的分析規(guī)程。信噪比的確定，是將測(cè)得的含已知低濃度被測(cè)物的樣品的信號(hào)與其空白樣品的信號(hào)比較，并建立能可靠地檢測(cè)到被測(cè)物的最低水平。信噪比可通過(guò)人工或采用色譜軟件的方法，通過(guò)比較樣品產(chǎn)生的信號(hào)和基線噪聲來(lái)確定。通?？山邮艿臋z測(cè)限的評(píng)估值為信噪比是3。C. 根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差和斜率檢測(cè)限可表示成：DL= 3.3/S說(shuō)明： =

25、響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差S =校正曲線的斜率斜率S可由被測(cè)物的校正曲線評(píng)估。標(biāo)準(zhǔn)偏差可通過(guò)多種途徑獲得，如： 根據(jù)空白樣品的標(biāo)準(zhǔn)偏差：通過(guò)分析適宜數(shù)量的空白樣品進(jìn)行分析背景響應(yīng)的測(cè)定，計(jì)算這些響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。 根據(jù)校正曲線：測(cè)試包含DL范圍的被測(cè)物樣品，研究其校正曲線?；貧w方程的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差或Y軸截距可作為響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。D. 推薦數(shù)據(jù)檢測(cè)限和用于確定檢測(cè)限的方法必須得到描述。如果DL是根據(jù)目測(cè)評(píng)估或信噪比來(lái)確定，提供相關(guān)色譜圖即可。如果檢測(cè)限的評(píng)估值通過(guò)計(jì)算或外推法獲得，那么此評(píng)估值接下來(lái)需經(jīng)由分析一定數(shù)量的近檢測(cè)限的已知濃度樣品來(lái)驗(yàn)證。7.2.1.6 定量限A. 根據(jù)目測(cè)評(píng)估目測(cè)評(píng)估一般用于非

26、儀器方法，但也可用于儀器方法。通過(guò)分析含已知被測(cè)物濃度的樣品，來(lái)確定被測(cè)物在可接受的準(zhǔn)確度和精密度下能被定量測(cè)試的最低水平。B. 基于信噪比此方法僅適用于能產(chǎn)生噪音基線的分析規(guī)程。信噪比的確定，是將測(cè)得的含已知低濃度被測(cè)物的樣品的信號(hào)與其空白樣品的信號(hào)比較，并建立能可靠地檢測(cè)到被測(cè)物的最低水平。典型的信噪比為10：1。信噪比可通過(guò)人工或采用色譜軟件的方法，通過(guò)比較樣品產(chǎn)生的信號(hào)和基線噪聲來(lái)確定。C. 根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差和斜率定量限可表示成：QL = 10/S說(shuō)明： =響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差S =校驗(yàn)曲線的斜率斜率S可從被測(cè)物的校正曲線中估計(jì)。標(biāo)準(zhǔn)偏差可通過(guò)多種途徑獲得包括： 根據(jù)空白樣品的標(biāo)準(zhǔn)偏差：

27、通過(guò)分析適宜數(shù)量的空白樣品進(jìn)行分析背景響應(yīng)值的測(cè)量，計(jì)算這些響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。 根據(jù)校正曲線：測(cè)試含QL范圍的被測(cè)物樣品，研究其校正曲線?；貧w方程的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差或Y軸截距的標(biāo)準(zhǔn)偏差可用來(lái)作為響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。D. 推薦數(shù)據(jù)定量限和用于確定定量限的方法必須得到描述。此限度應(yīng)通過(guò)分析一定數(shù)量的近定量限的已知濃度的樣品來(lái)驗(yàn)證。7.2.1.7線性和范圍A. 線性線性關(guān)系的評(píng)估應(yīng)涵蓋分析規(guī)程的范圍，采用建議的測(cè)試規(guī)程直接用活性物質(zhì)（稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液）和/或產(chǎn)品組分的合成混合物的稱量。應(yīng)觀測(cè)相當(dāng)于被測(cè)物的濃度或含量的信號(hào)圖來(lái)評(píng)估線性。如果呈現(xiàn)線性關(guān)系，使用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法來(lái)評(píng)估測(cè)試結(jié)果，例如：通過(guò)最小平方法計(jì)

28、算線性回歸。應(yīng)報(bào)告相關(guān)系數(shù)、Y截距、回歸線斜率和殘差平方和，并包含數(shù)據(jù)圖。另外，分析實(shí)際數(shù)據(jù)點(diǎn)與回歸線的偏差同樣有助于評(píng)估線性。步驟 為建立線性分析，推薦使用至少5個(gè)濃度。其它模式應(yīng)作評(píng)價(jià)。 每個(gè)濃度水平峰面積對(duì)濃度作圖。 當(dāng)響應(yīng)值與濃度的關(guān)系呈線性時(shí)可使用線性回歸分析，計(jì)算相關(guān)系數(shù)、Y截距、斜率和殘差平方和，并用數(shù)據(jù)圖表示。 如果響應(yīng)值和濃度關(guān)系不是直接線性，在進(jìn)行線性回歸分析之前可先進(jìn)行數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換。接受標(biāo)準(zhǔn)：參見(jiàn)附件2。B. 范圍特定的范圍通常得自線性研究，并基于規(guī)程的應(yīng)用。分析規(guī)程的范圍是通過(guò)測(cè)試含有分析規(guī)程特定范圍內(nèi)或極端處被測(cè)物量的樣品時(shí)，分析規(guī)程能提供可接受的線性、準(zhǔn)確度和精密度來(lái)確

29、認(rèn)。步驟應(yīng)考慮以下最小的特定范圍： 活性物質(zhì)或成品的含量測(cè)定：一般為測(cè)試濃度的80 120； 含量均勻度：覆蓋至少是測(cè)試濃度的70至130，除非基于制劑的性質(zhì)（如：有定量裝置的吸入劑）使用更寬的適用范圍。 溶出度測(cè)試：指定范圍的20%。例如：一個(gè)控釋產(chǎn)品的規(guī)格為1小時(shí)后的20到24小時(shí)后的90，驗(yàn)證的范圍為標(biāo)示量的0 110%。 雜質(zhì)測(cè)定：從雜質(zhì)報(bào)告水平至規(guī)格的120。對(duì)于那些已知有顯著作用或能產(chǎn)生有毒或非預(yù)期的藥理作用的雜質(zhì)，檢測(cè)/定量限應(yīng)與雜質(zhì)的控制水平相當(dāng)。 如果含量和純度測(cè)定在一個(gè)測(cè)試進(jìn)行，且只有100標(biāo)準(zhǔn)品被使用，則線性應(yīng)該覆蓋從雜質(zhì)報(bào)告水平至120含量規(guī)格的范圍。線性范圍可通過(guò)研究

30、在線性、準(zhǔn)確度和精密度上的符合接受標(biāo)準(zhǔn)來(lái)確定。7.2.1.8 耐用性耐用性是衡量分析規(guī)程保持不受設(shè)計(jì)的小的變化影響的能力。這些變化通常是保持其它參數(shù)不變的單個(gè)變化。耐用性應(yīng)能體現(xiàn)在分析參數(shù)有變化的情況下分析方法的可靠性。如果測(cè)量易受分析條件的影響，則應(yīng)適當(dāng)控制分析條件，或在規(guī)程中作預(yù)先聲明。典型的變化例子有： 分析溶液的穩(wěn)定性 萃取時(shí)間在液相色譜的情況下，典型的變化例子有： 流動(dòng)相中pH變化的影響 流動(dòng)相組分變化的影響 不同的色譜柱（不同批號(hào)和/或供應(yīng)商） 溫度 流速在氣相色譜的情況下，典型的變化例子有： 不同的色譜柱（不同批號(hào)和/或供應(yīng)商） 溫度 流速A. 溶液穩(wěn)定性（推薦）a) 被評(píng)估的溶

31、液標(biāo)準(zhǔn)液、樣品液、檢測(cè)限溶液、定量限溶液、雜質(zhì)類似物溶液和分離度溶液b) 研究條件實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件和冰箱應(yīng)考慮額外的被測(cè)物儲(chǔ)存條件，如光敏性c) 建議的研究周期樣品溶液：12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)標(biāo)準(zhǔn)溶液：12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)d) 步驟 雙份制備考察溶液，然后立刻進(jìn)行雙份的含量測(cè)定。 在考察的條件下儲(chǔ)存制備液。 在經(jīng)過(guò)每個(gè)考察周期后對(duì)儲(chǔ)備溶液進(jìn)行含量測(cè)定。 每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的結(jié)果應(yīng)以新鮮制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液評(píng)估。分析結(jié)果的平均值將與接受標(biāo)準(zhǔn)比較。e) 接受標(biāo)準(zhǔn) 見(jiàn)附件2檢測(cè)限、定量限、雜質(zhì)類似物以及分離度溶液也需評(píng)估穩(wěn)定性。但這些溶液的接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)基于能提供認(rèn)可的系統(tǒng)適用性的要求

32、來(lái)制定。接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)在方法驗(yàn)證計(jì)劃中得到規(guī)定。B. 藥品耐用性的樣品制備a) 萃取參數(shù)用制劑為關(guān)鍵區(qū)域的可變性評(píng)估樣品制備步驟。典型的變化例子有：攪拌的時(shí)間、速度和溫度及萃取體積。i. 可變性 攪拌的時(shí)間、速度和溫度：建議參數(shù)值的上下25。 萃取體積：規(guī)程水平的一半和兩倍。ii. 步驟雙份測(cè)定每個(gè)指定參數(shù)下的考察樣品的含量，評(píng)估所感興趣的被測(cè)物的回收率，分析結(jié)果的平均值用于與接受標(biāo)準(zhǔn)作比較。注意 對(duì)于雜質(zhì)含量評(píng)估，采用加入了預(yù)定規(guī)格水平的代表性雜質(zhì)的樣品。 如果可行，耐用性實(shí)驗(yàn)采用同一檢測(cè)儀器、柱和/或流動(dòng)相。樣品分析前應(yīng)首先測(cè)試系統(tǒng)適用性，樣品必須和標(biāo)準(zhǔn)制備一起進(jìn)行測(cè)試。樣品必須被標(biāo)準(zhǔn)制備所包

33、圍。b) 過(guò)濾如果使用過(guò)濾，則評(píng)價(jià)回收率和干擾值。 回收率 根據(jù)規(guī)程，分析過(guò)濾后的藥品制備液，測(cè)定平均值。 干擾 過(guò)濾稀釋劑并根據(jù)定量方法測(cè)試。接受標(biāo)準(zhǔn)：回收率不得少于98%。干擾值不得大于1%。如果被評(píng)估參數(shù)的范圍不能符合接受標(biāo)準(zhǔn)，但能提供評(píng)價(jià)并且實(shí)驗(yàn)被重復(fù)，則可減少參數(shù)。c) 溶出度/釋放率的樣品制備i. 參數(shù)溶出度/釋放率步驟中典型的變化，參見(jiàn)附件3接受標(biāo)準(zhǔn)6份樣品的平均百分溶出度或釋放度，應(yīng)在建議的規(guī)格時(shí)間點(diǎn)使用程序參數(shù)所獲得的平均結(jié)果的5%內(nèi)。ii. 過(guò)濾如果采用了過(guò)濾，則評(píng)估回收率和干擾值。 回收率 根據(jù)規(guī)程，分析過(guò)濾后的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。 干擾 過(guò)濾稀釋劑，根據(jù)定量方法測(cè)定。接受標(biāo)準(zhǔn)

34、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得過(guò)2.0%。干擾值不得大于1%。注意：如果評(píng)估的變化范圍不能滿足接受標(biāo)準(zhǔn)，則在有說(shuō)明并有記錄的情況下可減少范圍，并在另一范圍重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。d) 色譜系統(tǒng)-HPLC/GCi. 色譜分析規(guī)程中的典型變化，參見(jiàn)附件3ii. 步驟采用規(guī)程的參數(shù)值及所列的范圍值，評(píng)估每個(gè)變化點(diǎn)，同時(shí)保持其它參數(shù)在程序值。所研究樣品包括： 藥品樣品 要求的標(biāo)準(zhǔn)溶液 分離度溶液注意：可運(yùn)行系統(tǒng)適用性精密度，但評(píng)估耐用性時(shí)不作要求。對(duì)于雜質(zhì)分析，如果樣品中沒(méi)有一個(gè)可定量的雜質(zhì)，必須在樣品中加入藥品中預(yù)期的主要雜質(zhì)，其值為規(guī)格水平，所得結(jié)果應(yīng)和采用擬定參數(shù)獲得的結(jié)果相比較。如果決定不研究某一參數(shù)，則需在方法驗(yàn)證

35、計(jì)劃或驗(yàn)證方案中得到說(shuō)明。標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液可在已建立的穩(wěn)定性期限內(nèi)使用。如果需要新的制備液，此溶液需要在程序條件下經(jīng)過(guò)測(cè)試。iii. 接受標(biāo)準(zhǔn) 每一個(gè)被評(píng)估的變化范圍應(yīng)有符合要求的系統(tǒng)適用性參數(shù)，最終的系統(tǒng)適用性標(biāo)準(zhǔn)在耐用性實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)建立/確認(rèn)。 分離度1.5 拖尾 2 QL溶液的信噪比10 樣品含量的平均結(jié)果的精密度應(yīng)在采用規(guī)程參數(shù)獲得的結(jié)果的RSD%的2倍范圍以內(nèi)。比如，程序參數(shù)的RSD%為0.30，接受范圍可以小于0.60。采用程序參數(shù)獲得的平均結(jié)果的%RSD應(yīng)在精密度范圍內(nèi)。 加入的雜質(zhì)或恒定存在的雜質(zhì)的平均結(jié)果應(yīng)在采用規(guī)程參數(shù)獲得平均值的0.1%內(nèi)（絕對(duì)值）。比如，程序參數(shù)值為0.

36、40%，接受范圍可以是0.30%0.50%之間。 殘留溶劑的含量平均值應(yīng)在使用規(guī)程參數(shù)獲得平均值的10%內(nèi)。e) 其它程序評(píng)估每個(gè)分析規(guī)程人為設(shè)計(jì)的步驟/參數(shù)的變化。記錄此方案以表明參數(shù)/步驟變化時(shí)分析程序是可靠的。接受標(biāo)準(zhǔn)變化不能超過(guò)程序相對(duì)于采用程序參數(shù)獲得的平均結(jié)果的精密度。7.2.2 微生物測(cè)試方法本規(guī)程不對(duì)微生物檢驗(yàn)替代方法的驗(yàn)證做規(guī)定。如需采用此類方法時(shí)，應(yīng)由微生物技術(shù)人員指出驗(yàn)證策略，并經(jīng)QC經(jīng)理和QA經(jīng)理的批準(zhǔn)。藥典通用方法必須通過(guò)方法適用性確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)在此檢測(cè)條件下，所采用的方法適合于供試品的微生物檢測(cè)。微生物限度檢測(cè)方法需進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，每次試驗(yàn)應(yīng)盡可能使用不同批號(hào)的樣品。方法驗(yàn)證試驗(yàn)應(yīng)在陽(yáng)性室進(jìn)行。7.2.2.1 菌液的制備驗(yàn)證用菌種傳代次數(shù)不得超過(guò)5代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0 代），菌懸液在室溫下放置應(yīng)在2 小時(shí)內(nèi)使用，若于28保存，不得超過(guò)24小時(shí)。黑曲霉孢子懸液可保存在28，在規(guī)定的或驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)使用。取不大于100cfu的試驗(yàn)菌進(jìn)行測(cè)定。7.