腸桿菌科鑒定(全)

1、腸桿菌科鑒定流程,主講人：王曦暉,9版伯杰鑒定細菌手冊分為24個屬， 108個種現(xiàn)增加到31個屬,常見的15個屬 1.占臨床分離菌總數(shù)50% 2.占G-桿菌總數(shù)80%3.占敗血癥50%4.占尿路感染70,一.分布,二.臨床意義,有些菌屬對人類有明顯的致病作用 1、鼠疫耶耳森菌-引起烈性傳染病 2、 埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、 耶耳森菌屬可導致腹瀉、食物中毒.傷寒 多數(shù)菌屬是腸道正常菌群，也是條件致病菌,與人類感染有關(guān)的腸桿菌科細菌有31個菌屬，其中臨床標本中常見的菌屬有15種 克雷伯菌屬 愛德華菌屬 鄰單胞菌屬 變形桿菌屬 普羅威登斯菌屬 沙門菌屬 耶爾森菌屬 志賀菌屬 沙雷菌屬 腸桿菌屬

2、 埃希菌屬 哈夫尼亞菌屬 枸櫞酸桿菌屬 摩根菌屬 多源菌屬,三.微生物特性,1.G-桿菌 ， 多數(shù)有鞭毛、菌毛 2.發(fā)酵葡萄糖，兼性厭氧 3. 氧化酶陰性 4.還原硝酸鹽為亞硝酸鹽 5.觸酶（） 6.營養(yǎng)條件不高，,涂片：G-b,氧化酶試驗,非發(fā)酵菌、弧菌,+,腸桿菌科細菌、不動、嗜麥芽菌,雙糖試驗,F,O,不動、嗜麥芽,腸桿菌科細菌,苯丙，葡鹽, 枸, 硝, 賴, 鳥, 氨對, 山, 肌, 側(cè), 吲哚,硝酸鹽還原,+,嗜麥芽,不動,四、鑒定流程圖,種屬鑒定,科的特征,硝酸鹽還原,葡萄糖發(fā)酵,氧化酶 ,觸酶,屬間鑒定特征,種間鑒定特征,血清學分型,報告細菌種名,報告細菌血清型,概述,五、腸桿菌

3、科的初步分群,可用苯丙氨酸和葡萄糖酸鹽試驗將腸桿菌科分為四大組,菌 屬 名 苯丙氨酸 葡萄糖酸鹽 變形桿菌屬 + 普魯維登斯菌屬 + 摩根氏菌屬 + 克雷伯菌屬 + 腸桿菌屬 + 沙雷菌屬 + 哈夫尼亞菌 + 埃希菌屬 志賀菌屬 沙門菌屬 枸櫞酸桿菌屬 愛德華菌屬 耶爾森菌屬 ,六.苯丙氨酸陽性組的各屬鑒別,試 驗 變形桿菌屬 普魯維登菌屬 摩根氏菌屬 塔特姆屬 H2S + - - - 枸櫞酸鹽 +/- + - - 靛基質(zhì) +/- + + -,1.變形桿菌屬內(nèi)各種的鑒別,試 驗 普通變形桿菌 奇異變形桿菌 潘氏變形桿菌 產(chǎn)粘液變形桿菌 靛基質(zhì) + - - - 鳥基酸 - + - - 木糖 +

4、+ + -,2.普魯維登菌屬各種的鑒別,試 驗 產(chǎn)堿 斯圖 雷極 普魯維登斯菌 普魯維登斯菌 普魯維登斯菌 側(cè)金盞花醇 + - + 甘露醇 + - -,生化反應雷氏斯氏產(chǎn)堿拉氏海氏 吲哚產(chǎn)生+- 肌醇 + + - - V 海藻糖-+ - 戊五醇 + - + -+,3.摩根菌屬種的鑒定,試驗 摩根摩根菌 摩根菌(生物1群) 賴氨酸 - + 動力 + -,.苯丙氨酸陽性組菌屬鑒別索引圖,4,-,七.葡萄糖酸鹽陽性組各屬鑒別,原克雷伯菌屬（klebsiella）有5個種，2個亞種 肺炎克雷伯菌 產(chǎn)酸克雷伯菌 解鳥氨酸克雷伯菌,分 類,克雷伯菌屬,臭鼻亞種 鼻硬結(jié)亞種,培養(yǎng)特征,血瓊脂上菌落較大，呈黏

5、液狀，以接種環(huán)挑取時易拉成絲 在腸道培養(yǎng)基上呈發(fā)酵乳糖小菌落 在液體培養(yǎng)基內(nèi)生長混濁、濃厚、可見菌膜，管底有粘性沉淀物,K. pneumoniae 菌落（血平板）,克雷伯菌屬,1.克雷伯菌屬各種的鑒別,沙雷菌屬（普通營養(yǎng)平板）,2.沙雷菌屬各種的鑒別,分類：現(xiàn)有13個種2個生物型,原有7個種2個生物型 產(chǎn)氣腸桿菌(E. aerogenes) 陰溝腸桿菌(E. cloacae) 杰高維腸桿菌 坂崎腸桿菌 泰洛腸桿菌 中間腸桿菌 聚團腸桿菌 河生腸桿菌生物群1,河生腸桿菌生物群2 后增加7個菌 阿氏腸桿菌 何氏腸桿菌 溶解腸桿菌 超壓腸桿菌 克沃尼腸桿菌 考伯腸桿菌 帕瑞勒腸桿菌,腸桿菌屬,3.腸

6、桿菌屬各種的鑒別,本菌屬的細菌生化反應不典型，常用的商品化鑒定系統(tǒng) 很難達到90以上的鑒定正確率,4.哈夫尼亞菌屬鑒定,葡萄糖酸鹽 枸櫞酸鹽 棉子 糖 + ,5.葡萄糖酸鹽陽性菌屬鑒別雙岐索引圖,八.苯丙氨酸葡萄糖酸鹽陰性組的各屬鑒別,枸櫞酸桿菌屬,分 類,枸櫞酸桿菌屬（Citrobacter）包括11個種,弗勞地枸櫞酸桿菌 (C. freundii) 差異枸櫞酸桿菌（C. diversus） 庫斯枸櫞酸桿菌 無丙二酸鹽枸櫞酸桿菌 (C. amalonaticus) （C. koseri） 布拉吉枸櫞酸桿菌 （C. braakii） 雷登枸櫞酸桿菌 （C. rodentium） 塞拉克枸櫞酸桿

7、菌 （C. sedlakii） 魏克曼枸櫞酸桿菌 （C. werkmanii） 揚哥枸櫞酸桿菌 （C. youngae） 吉樂枸櫞酸桿菌 （C. gillenii） 穆利枸櫞酸桿菌 （C. murliniae） 法瑪麗枸櫞酸桿菌 （C. farmeri）,1.枸櫞酸桿菌屬各種的鑒別,注意：很多鑒定系統(tǒng)的數(shù)據(jù)庫中不包括枸櫞酸桿菌屬新種名稱和分類資料,2.愛德華菌屬各種的鑒別,3.埃希菌屬種的鑒別,致瀉性E.coli分為5類： 腸毒素型大腸埃希菌 (ETEC) 腸致病性大腸埃希菌 (EPEC) 腸侵襲型大腸埃希菌 (EIEC) 腸出血型大腸埃希菌 (EHEC) 腸凝聚型大腸埃希菌 (EAggEC)

8、,埃希菌屬,臨床意義 (Clinical Significance),E.coli以腸道外感染多見，主要有泌尿系統(tǒng)感染,E.coli中的致病菌株能引起各種類型的腹瀉，根據(jù)其不同的血清型別、毒力和臨床癥狀,鑒定要點,不活躍大腸埃希菌與志賀菌易混淆，需相互鑒別,埃希菌屬,大腸埃希菌 在中國蘭平板上為藍色菌落 大腸埃希菌 在伊紅美藍平板上為紫黑色菌落 大腸埃希菌 在麥康凱和SS平板上為紅色菌落,培養(yǎng)特征,兼性厭氧菌 營養(yǎng)要求不高 菌落呈中等大小、無色、半透明、光滑 在SS平板上，因產(chǎn)生H2S可形成黑色中心的菌落,傷寒沙門菌菌落形態(tài)（SS平板）,四沙門菌屬,常用血清：O多價血清（含AF群） O、H、V

9、i抗原因子血清 方法：從臨床標本中分離到菌株經(jīng)純培養(yǎng)后，符合沙門 菌屬生物學特性，則 采用A-F多價血清初步確定是否為Salmonella 1. 如陽性，即用O因子血清分群；再用第一相H因子血清定型，也可用第二相輔助定型 2. 如陰性：應考慮是否有Vi抗原?,血清學分型,加熱或傳代,去除Vi抗原,凝集：做O多價和單價凝集,不凝集：可能為AF以外,沙門菌屬,如是雙相菌，進一步用復合血清1、2、5檢查第2相抗原。,兼性厭氧菌 營養(yǎng)要求不高 普通平板：中等大小、半透明、光滑 鑒別培養(yǎng)基：乳糖不發(fā)酵的菌落,培養(yǎng)特性,菌落形態(tài)（麥康凱平板）,志賀菌屬,種屬鑒定,菌屬特征 發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 賴氨酸（）

10、 H2S（） 尿素（） 動力（）,志賀菌屬,5.志賀菌屬的鑒定,先用志賀多價血清與菌種凝集，如多價血清凝集為志賀菌，多價里不包含鮑氏C16-20再進一步用因子血清凝集而定群。,6、苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽陰性組菌屬鑒別 雙歧索引圖,腸桿菌鑒定選用多少生化反應管為好,苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽、賴氨酸、鳥氨酸、氨基酸對照、枸櫞酸鹽、硝酸鹽、側(cè)金盞花醇、山梨醇、甘露醇、ONPG、靛基質(zhì)、雙糖（H2S）,九.API鑒定系統(tǒng)(20E),菌液制成0.5麥氏濁度,加入20E板條,1.變形桿菌菌落呈遷延性生長,十、腸桿菌科某些菌株的特殊性質(zhì),2.克雷伯菌自身菌落可拉出絲來,3.多源聚團菌在M-H平板上產(chǎn)生黃色,4.沙

11、雷菌M-H 平板上產(chǎn)生鐵銹紅色,6.能產(chǎn)生H2S的菌株,變形桿菌 愛德華菌 傷寒沙門菌 費勞地枸櫞酸桿菌 大腸桿菌,大腸桿菌的特點,對多種糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣,吲哚、甲基紅、VP 、枸櫞酸鹽(IMVC)+ + - - 五種致病性大腸桿菌要用特異性血清凝集加以鑒別,十一.沙門菌屬的特點,所有動物可分離到沙門菌,有2000多血清 可引起人類胃腸炎、敗血癥、傷寒,沙門菌屬的特點,肥達反應,十二.志賀菌屬的特點,急性菌痢-發(fā)燒,腹痛,膿血便,痢疾志賀菌引起的菌痢死亡率高達20% 慢性菌痢-反復發(fā)作二個月,志賀菌屬與大腸埃希菌區(qū)別:動力陰性,賴氨酸陰性,分解葡萄糖不分解乳糖 志賀菌屬與傷寒沙門菌區(qū)別:動力陰性H2S陰性,能于志賀菌因子血清凝集,志賀菌屬的特點,常用血清：O多價血清（含AF群） O、H、Vi抗原因子血清 方法：從臨床標