E花環(huán)實驗報告

1、 E花環(huán)實驗一.實驗原理 人外周血T淋巴細胞表面具有綿羊紅細胞(SRBC)受體，能夠與SRBC結(jié)合形成花環(huán)樣細胞團(即E花環(huán))。已證實E 受體是人類T 細胞所特有的表面標志。當T 細胞與SRBC 混合后，SRBC 便粘附于T 細胞表面，呈現(xiàn)花環(huán)狀。通過花環(huán)形成檢查T 細胞的方法，稱為 E 花環(huán)形成試驗。根據(jù) 花環(huán)形成的多少，可測知 T 細胞的數(shù)目，從而間接了解機體細胞免疫功能狀態(tài)，判斷疾病的預(yù)后，考核藥物療效等。由于T細胞的異質(zhì)性，其對SRBC的親和力亦不同，因而T細胞可形成不同類型的E花環(huán)，其中在4放置1 h以上，所形成的花環(huán)數(shù)代表T細胞總數(shù)，稱為總花環(huán)(Et花環(huán))，而淋巴細胞與SRBC混合

2、后不經(jīng)4作用立即反應(yīng)形成的花環(huán)稱為活性花環(huán)(Ea花環(huán))。二.實驗結(jié)果（用圖示法表示）三.討論 .有的細胞能形成玫瑰花環(huán)的原因：人T細胞膜上具有CD2分子，能夠與SRBC上的LFA-3結(jié)合，從而形成以人T細胞為中心，SRBC環(huán)繞四周，形狀如玫瑰花環(huán)的細胞集團，即E玫瑰花環(huán)。此外，NK細胞膜上也有CD2分子，也能形成玫瑰花環(huán)，但是NK細胞的量非常少，形成玫瑰花環(huán)的數(shù)量也少。 . 有的細胞不能形成玫瑰花環(huán)的原因：a.人血液中含有單核巨噬細胞，其表面沒有CD2分子，不能與SRBC表面的LFA-3結(jié)合，因此不能形成玫瑰花環(huán)。b.實驗中所用血液不夠新鮮，也可能導致不能夠形成玫瑰花環(huán)。c. 時間不夠長，導致

3、T細胞表面的CD2分子不能夠與SRBC上的LFA-3充分結(jié)合，因此只有一部分SRBC與人T細胞結(jié)合，其余SRBC沒能夠與人T細胞結(jié)合形成玫瑰花環(huán)。2.SRBC與淋巴細胞混合后離心速度不能過高，在Et花環(huán)試驗中，置4應(yīng)至少1h以上或過夜。3.綿羊紅細胞以保存1周內(nèi)最好，超過2周則與淋巴細胞結(jié)合力下降，超過56周則不能再用。實驗室的綿羊紅細胞保存的時間太長，導致其與淋巴細胞的結(jié)合能力下降，所以有的細胞可以形成E花環(huán)，而有的細胞不可以形成E花環(huán)。4.Et花環(huán)試驗SRBC與淋巴細胞混合比例以10012001為宜，Ea花環(huán)試驗中以101201為宜；淋巴細胞離體后不能超過6h，否則會影響花環(huán)形成率。5.溫度對實驗結(jié)果影響較大，故實驗溫度條件應(yīng)保持一致，從4取出后應(yīng)立即計數(shù)