《微量分光光度計》PPT課件.ppt

1、NanoDrop 2000超微量分光光度計,內(nèi)容簡介,一. NanoDrop 2000超微量分光光度計 (1)儀器描述及規(guī)格 (2)檢測原理及優(yōu)點 二.軟件 (1)使用前準(zhǔn)備工作及軟件操作界面介紹 三.應(yīng)用,NanoDrop 2000分光光度計可以檢測0.5-2ul 的樣本，而且檢測是非常高的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。樣本保留系統(tǒng)應(yīng)用了表面張力來把樣本保留在兩根檢測光纖中間，這使得儀器可以檢測較高濃度的樣本而不用稀釋。應(yīng)用這個技術(shù)，NanoDrop 2000分光光度計檢測樣本的最高濃度是標(biāo)準(zhǔn)比色皿的200 倍。,樣品臂,檢測基座,一. NanoDrop 2000超微量分光光度計,(1)儀器描述,儀器類型

2、： 分光光度計 最小樣品量： 0.5ul 波長： 1mm（可以自動調(diào)整到0.05mm） 光源： 氙閃爍燈 檢測器類型： 2048象素線型硅CCD陣列 波長范圍： 190840nm 波長準(zhǔn)確性： 1 nm 光譜分辨率： 1.8nm 吸收光精確性： 0.002吸光值（1mm光程） 吸收光準(zhǔn)確性： 2（257nm波長下，0.76個吸光值） 吸光值范圍： 0.02300（等同于10mm光程時） 檢測極限： 2ng/ul dsDNA 最大檢測濃度： 15,000ng/ul（dsDNA） 檢測時間： 5秒 儀器占地面積; 14cm20cm 重量： 2kg 樣本基座材料： 303不銹鋼以及石英光纖 工作電壓

3、; 12V 工作功率; 1218W（最大30W） 軟件兼容性; Windows XP 和Vista（32bit,儀器規(guī)格,(2)檢測原理,利用表面張力保持樣本形態(tài)的專利技術(shù)進(jìn)行檢測。只需使用加樣器將1ul的樣品直接加在檢測表面上，而無需其他容器或檢測裝置。使用兩根光纖將樣本拉開，形成固定光程的檢測通路，自動進(jìn)行檢測。,優(yōu)點,1.檢測所需樣微量，0.5-2ul，可以節(jié)省辛苦得到的樣品 2.檢測范圍寬，比傳統(tǒng)的分光光度計的上限高200倍，吸光度0.02-300，對于多數(shù)樣品而言，無需稀釋 3.無需檢測容器，日常消耗低，直接將樣品加在檢測面上，檢測完以后把檢測表面擦干凈即可，保證樣品間無交叉污染，也

4、不干擾后續(xù)檢測 4.全波長190-840nm，分辨率1nm，對于任何一個樣品的測量，儀器都自動給出全波長的掃描結(jié)果190-840nm 5.使用方便快速，1個樣品只需5秒 6.無需預(yù)熱，直接測量,二.軟件,(1)在使用儀器進(jìn)行樣品檢測前，需要使用USB連接線把儀器和電腦相連，把12V的電源線接到儀器背面的插口上，并連接電源。,任務(wù)欄,工具欄,功能選擇,使用NanoDrop 2000/2000c分光光度計可以方便的使用微量樣品進(jìn)行紫外可見分光檢測。NanoDrop 2000可以應(yīng)用于如下檢測：,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,1.核酸的濃度和質(zhì)量 2.篩選有效的熒光標(biāo)記雜交探針 3

5、.功能同普通的紫外-可見分光光度計 4.檢測細(xì)胞懸液的光散射 5.蛋白定量 6.蛋白定量(主要檢測還有還原劑或去污劑的總蛋白含量) 7.檢測非純蛋白的濃度 8.蛋白的濃度和熒光染料的濃度 9.蛋白A280檢測 10.編輯新程序 11.蛋白定量(區(qū)別于5，測試濃度較低),例：核酸,Sample ID-輸出樣品名稱 Type-DNA-50做dsDNA檢測，RNA-40做RNA檢測，ssDNA-33做單鏈DNA Conc-結(jié)果 A260顯示10mm光程下的260nm處的吸光值 A280顯示10mm光程下的280nm處的吸光值。 260/280260nm和280nm處的吸光值的比值（DNA1.8RNA

6、2.0）,核酸濃度檢測 1 在主菜單中選擇核酸模式，如果顯示波長校準(zhǔn)窗口，放 下基座臂點擊OK。 2 選擇檢測的樣品類型，默認(rèn)的設(shè)定為DNA-50。 3 選擇濃度單位，默認(rèn)的為ng/ul。 4 默認(rèn)的校準(zhǔn)波長為340nm，重新選擇一個校準(zhǔn)波長或者 去選擇Baseline來不選擇校準(zhǔn)波長。 5 選擇Add to Report自動把檢測結(jié)果添加到當(dāng)前報告中 去，默認(rèn)設(shè)置是把每個樣品都添加到報告中。要把樣 品數(shù)據(jù)保存到工作薄中，在檢測前必須選上Add to report。 6選擇Overlay spectra可以在同一時間顯示多個光譜。 7使用合適的液體建立空白對照，空白對照液體是溶解目標(biāo)分子的液體?？瞻讓φ找后w的pH值和離子濃度應(yīng)和檢測樣品一樣。,注意： 1.每次檢測的樣品都必須是新加的。 2.使用干凈的無塵紙擦干凈上下基座，這樣儀器就可以進(jìn)行下一個樣品檢測了。,Oligo Calc 用來計算特定核酸序列的分子量，消光系數(shù)，濃度因子 要使用Oligo Calc： 1.使用如下方法來輸入一個堿基序列： 使用堿基序列顯示框下的按鍵。鍵盤（僅僅能使用A，C，G，T，和U來輸入堿基）復(fù)制和粘貼一個序列到顯示框（僅僅能使用A，C，G，T，和U來輸入堿基）清除堿基序列框中的序列，點擊序列框右側(cè)的Clear鍵，單個可以手動來刪除。 2.選擇磷酸化程度，可以選擇：DNA單磷酸化，RN