致病菌檢驗方法((cly)ppt課件

1、.,1,致病菌檢測方法,福建省疾病預(yù)防控制中心 陳路瑤,2,.,需要檢測的致病菌,乙型溶血鏈球菌 大腸桿菌 綠膿桿菌 金黃色葡萄球菌 志賀氏菌 沙門氏菌,3,.,溶血性鏈球菌,檢測依據(jù)：GB/T 4789.11-2003 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 溶血性鏈球菌檢驗,4,.,檢驗程序,檢 樣,葡萄糖肉湯,血平板,血平板（分純培養(yǎng)）,鏈激酶試驗,桿菌肽敏感試驗,觀察溶血,革蘭氏染色,報 告,361 24h,361,361,24h,24h,5,.,1、菌落特征：,溶血性鏈球菌菌落 特征：灰白色細(xì)小 針尖樣。菌落周圍 形成一個2-4mm寬、 界限分明、完全透 明的無色溶血環(huán)。,6,.,2、革蘭氏染色：,乙

2、型溶血性鏈球菌 為革蘭氏陽性球菌， 在鏡下呈現(xiàn)為藍紫 色，圓形，鏈狀排 列。,7,.,3、桿菌肽敏感試驗,乙型溶血性鏈球菌 對桿菌肽敏感，在 涂布了該菌菌液的 血平板上貼上桿菌 肽，36培養(yǎng)18 24h，如果有大于 10mm的抑菌帶出 現(xiàn)即為陽性。,8,.,4、鏈激酶試驗,乙型溶血性鏈球菌能產(chǎn)生 鏈激酶，能激活正常人體 血液中的血漿蛋白酶原， 凝固 形成血漿蛋白酶，而后溶 解纖維蛋白。試驗中，能 使凝固的血漿完全溶解為 溶解 鏈激酶試驗陽性。,9,.,大腸桿菌,依據(jù)：GB15979-2002 一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 附錄B3 大腸菌群檢測方法,10,.,1、發(fā)酵試驗,取樣液5ml接種50m

3、l乳糖 膽鹽發(fā)酵管，置37培養(yǎng) 24h，如不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣， 則報告為陰性，如產(chǎn)酸產(chǎn) 氣，則進行下一步試驗。,11,.,2、接種平板,乳糖膽鹽發(fā)酵試驗陽性的管， 劃線接種伊紅美藍平板。典 型的大腸桿菌菌落為黑紫色 或紅紫色，圓形，邊緣整齊， 表面光滑濕潤，有金屬光澤， 也有的呈紫黑色，不帶或略 帶金屬光澤，或粉紅色，中 心較深的菌落。,12,.,3、革蘭氏染色,取疑似菌落作革蘭氏 染色鏡檢，大腸桿菌 為革蘭氏陰性桿菌， 鏡下呈紅色桿狀。,13,.,5、復(fù)發(fā)酵,伊紅美藍平板上的 疑似菌落在染色鏡 檢的同時接種乳糖 發(fā)酵管，如有產(chǎn)酸 產(chǎn)氣，則可報告檢 出大腸桿菌。,14,.,綠膿桿菌,依據(jù)：GB791

4、8.4-87 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法 綠 膿 桿 菌,15,.,檢驗程序：,增 菌 培 養(yǎng),分 離 培 養(yǎng),染 色 鏡 檢,氧化酶試驗,綠膿菌素試驗,硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗,明膠液化試驗,42生長試驗,報 告,37培養(yǎng)1824h,37培養(yǎng)1824h,16,.,1、增菌培養(yǎng),如有綠膿桿菌生長， 培養(yǎng)表面多有一層 薄菌膜，培養(yǎng)液常 呈黃綠色或藍綠色,17,.,2、分離培養(yǎng),綠膿桿菌菌落扁平無定型，向周邊擴散或略有蔓延，表面濕 潤，菌落呈灰白色，菌落周圍培養(yǎng)基常擴散有水溶性色素。,18,.,3、染色鏡檢,取疑似菌落作革蘭氏 染色鏡檢，綠膿桿菌 為革蘭氏陰性桿菌， 鏡下呈紅色短桿狀。,19,.,4、氧化

5、酶試驗,挑取綠膿桿菌可疑菌落 涂在白色濾紙上，加一 滴新配制的1%二甲基對 苯二胺試液，在1530s 內(nèi)，出現(xiàn)粉紅色或紫紅 色，為陽性，無色或淡 黃色為陰性。,20,.,5、綠膿菌素試驗,取可疑菌落接種綠膿菌素鑒 定用培養(yǎng)基，37培養(yǎng)24h, 加入氯仿35 mL，充分振蕩 使培養(yǎng)物中的綠膿菌素溶解 于氯仿液中，等氯仿提取液 呈藍色時，用吸管將氯仿移 到另一試管內(nèi)并加入1mol/L 的鹽酸1 mL，振蕩，靜置片 刻，如上層鹽酸內(nèi)出現(xiàn)粉紅 到紫紅色時，為陽性，表示 有綠膿菌素存在。,21,.,6、硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗,接種被檢純培養(yǎng)物于 硝酸鹽胨水培養(yǎng)基中， 37培養(yǎng) 24h。小倒 管中有氣體者，為

6、陽 性，表明該菌能還原 硝酸鹽，產(chǎn)生氮氣。,22,.,7、明膠液化試驗,將可疑菌落穿刺接種在明膠 培養(yǎng)基內(nèi)，37培養(yǎng)24h,取 出放冰箱1030min，如何呈 溶解狀態(tài)，即為明膠液化試 驗陽性，如凝固不溶者為陰 性。,23,.,8、42生長試驗,挑取純培養(yǎng)物，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基 上，放在4142培養(yǎng)箱中24h48h，綠膿 菌能生長，為陽性。不能生長為陰性。,24,.,25,.,金黃色葡萄球菌,依據(jù)：GB7918.5-87 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法 金黃色葡萄球菌,26,.,檢驗程序,增 菌,分 離,染色鏡檢,甘露醇發(fā)酵試驗,血漿凝固酶試驗,報 告,37 1824h,37 2448h,27

7、,.,1、增菌：,取樣液按1：10比例接 種到SCDLP液體培養(yǎng)基 中，或者可用7.5 %氯 化鈉肉湯，置 37培 養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h。,28,.,2、分離,將增菌培養(yǎng)液劃線接種 于血瓊脂平板置37培 養(yǎng)2448h，菌落呈金黃 色，大而突起，圓形， 不透明，表面光滑，周 圍有溶血圈。,29,.,3、染色鏡檢,挑取可疑菌落涂片 染色鏡檢，該菌為 革蘭氏陽性球菌， 排列成葡萄狀，藍 紫色。,30,.,4、甘露醇發(fā)酵試驗,取上述分純菌落接種 到甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基 中，置 37培養(yǎng)箱， 培養(yǎng)24h。金黃色葡 萄球菌應(yīng)能發(fā)酵甘露 醇產(chǎn)酸。,31,.,5、血漿凝固酶試驗,玻片法：取清潔干燥載玻片上，一端加一滴

8、滅菌生理鹽水，另一端滴加一滴血漿，用接種環(huán)挑取菌落，分別在生鹽及血漿中充分研磨混合。血漿與菌在5min內(nèi)出現(xiàn)團塊或顆粒狀凝塊時，而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固現(xiàn)象都為陽性，如兩者均無凝固現(xiàn)象則為陰性。凡玻片試驗陰性或鹽水滴與血漿滴均有凝固現(xiàn)象，再進行試管凝固酶試驗。,32,.,5、血漿凝固酶試驗,試管法：吸取1：4新鮮血漿0.5ml，加入待檢菌24h肉湯培養(yǎng)物0.5ml?；靹?，于37水浴或恒溫箱中，半小時觀察一次，24h 內(nèi)呈現(xiàn)凝塊為陽性。,33,.,5、血漿凝固酶試驗,乳膠凝集法金黃色葡萄球菌鑒定試劑盒,34,.,志賀氏菌,依據(jù)：GB 4789.5-2012 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢

9、驗 志賀氏菌檢驗,35,.,檢驗程序,36,.,沙門氏菌,依據(jù)：GB 4789.4-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 沙門氏菌檢驗,37,.,38,.,基本操作步驟,1、前增菌：BPW(緩沖蛋白胨水） 2、增菌： TTB（四硫磺酸鈉煌綠增菌液） SC （亞硒酸鹽胱氨酸增菌液） 3、分離： BS（亞硫酸鉍瓊脂） XLD（木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂） HE瓊脂 沙門氏菌顯色培養(yǎng)基,39,.,基本操作步驟,4、生化試驗：TSI（三糖鐵） 賴氨酸 靛基質(zhì) 尿素瓊脂 氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基 蛋白胨水 或直接用生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng) 5、血清學(xué)鑒定：O抗原、H抗原、Vi抗原、菌型鑒定,40,.,謝謝！,41,.,后面內(nèi)容直接刪除就行 資料可以編輯修改使用 資料可以編輯修改使用,42,.,主要經(jīng)營：網(wǎng)絡(luò)軟件設(shè)計、圖文設(shè)計制作、發(fā)布廣告等 公司秉著以優(yōu)質(zhì)的服務(wù)對待每一位客戶，做到讓客戶滿意！,43,.,致力于數(shù)據(jù)挖掘，合同簡歷、論文寫作、PPT設(shè)計、計劃書、策劃案、學(xué)習(xí)課件、各類模板等方方面面，打造全網(wǎng)一站