第三章消毒與滅菌...ppt

1、第三章,消毒與滅菌,基本概念 滅菌 指殺滅物體表面和內(nèi)部的一切微生物，包括細(xì)菌的芽孢和真菌的孢子。 消毒 指殺滅物體中的病原微生物 ，它只要求達(dá)到消除傳染性的目的，而對(duì)非病原微生物及芽孢、孢子并不嚴(yán)格要求殺死。 用來(lái)消毒的化學(xué)藥品稱(chēng)消毒劑。,防腐 指抑制物品中微生物繁殖的方法。 用來(lái)防腐的化學(xué)藥品稱(chēng)防腐劑，它與消毒劑無(wú)嚴(yán)格的界限，同種化學(xué)藥品高濃度時(shí)為消毒劑，低濃度時(shí)為防腐劑。 無(wú)菌 是指沒(méi)有活微生物的狀態(tài)。 防止微生物進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體或其他物體的操作技術(shù)稱(chēng)無(wú)菌操作。,殺菌-即滅菌。 抑菌-即防腐。 抗菌-包括防腐和殺菌。,第一節(jié),物理性滅菌、消毒及抑菌方法,一、熱力消毒、滅菌法,高溫殺菌的機(jī)理

2、高溫對(duì)微生物有明顯的致死作用，高溫可直接破壞菌體蛋白、核酸及酶系統(tǒng)，導(dǎo)致菌體死亡。 高溫滅菌 干熱滅菌 濕熱滅菌,（一）干熱滅菌法 1、火焰滅菌法 用火直接燒死物體中的微生物，是一種最徹底的滅菌法。 燒灼 接種環(huán)、試管口、瓶口等 焚燒 動(dòng)物尸體、污染廢棄物等,酒精燈（左） 電子火焰滅菌器（右）,火焰滅菌轉(zhuǎn)盤(pán)（左） 無(wú)火焰高溫滅菌器（右）,滅菌操作,2、熱空氣滅菌法 又稱(chēng)干烤滅菌，是在干烤箱中用熱空氣滅菌。該法以輻射傳導(dǎo)熱，穿透性差，需用較高溫度及較長(zhǎng)時(shí)間。 主要用于玻璃器皿、瓷器、金屬器械等的滅菌。 通常用160170維持2h，能殺死一切微生物及芽孢。,（二）濕熱滅菌（消毒）法 包括以下5種

3、煮沸 高壓蒸汽滅菌法 巴氏消毒法 間歇滅菌法 流通蒸汽滅菌法,1、煮沸 煮沸1520min可殺死細(xì)菌的繁殖體、真菌和病毒，但殺不死芽孢。 此法常用于刀剪、注射器、針頭及橡膠制品的消毒。,煮沸消毒盒 煮沸消毒器,2、高壓蒸汽滅菌法 即利用高壓蒸汽滅菌器（高壓鍋）滅菌，是應(yīng)用最廣、最有效的滅菌法。用15磅的壓力（溫度為121.3）維持1520min，可殺死一切微生物及芽孢。一切耐高溫的物品均可用此法滅菌。,高壓蒸汽滅菌器,3、巴氏消毒法 用于液態(tài)食品的一種消毒法，常用于牛奶、啤酒、果酒、葡萄酒和一些飲料。 特點(diǎn): 利用盡可能的低溫和短的時(shí)間，最大限度的殺死食品中的病原菌和一般 雜菌，同時(shí)最大限度地

4、保持食品的營(yíng)養(yǎng)成分和風(fēng)味不發(fā)生改變,巴氏消毒的三種方法： 低溫維持法 6265維持30min 高溫瞬時(shí)法 7172保持15s 超高溫法 132保持12s,巴氏消毒裝置,二、輻射滅菌法,（一）非電離輻射 包括： 紫外線 日光 可見(jiàn)光 紅外線 微波,1、紫外線 波長(zhǎng)200300nm的紫外線具有殺菌作用，其中253265nm段殺菌力最強(qiáng)。 殺菌機(jī)理： 主要破壞菌體細(xì)胞DNA的構(gòu)型，使DNA分子中間形成胸腺嘧啶二聚體，干擾DNA的復(fù)制，造成菌體的死亡，此外，紫外線也能破壞菌體蛋白和酶。,缺點(diǎn)： 穿透力差，普通玻璃、塵埃等均可阻擋紫外線，所以，紫外線只適合空間及物體表面的消毒，如無(wú)菌室、手術(shù)室等空間、墻

5、壁及實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面的消毒。,（二）電離輻射 包括放射性同位素的射線（、射線）、X射線等。 小計(jì)量可誘發(fā)微生物變易，大計(jì)量具有抑菌及殺菌作用。 在實(shí)際工作中主要是用X、射線，用于消毒、食品保鮮和微生物育種等方面。,三、超聲波,殺菌機(jī)理 超聲波幾乎對(duì)所有的微生物都有殺滅作用，主要是以機(jī)械作用和氧化作用破壞菌體細(xì)胞壁、細(xì)胞膜，使內(nèi)容物逸出。 用途 可用超聲波裂解菌體細(xì)胞，研究菌體的構(gòu)造、化學(xué)組成、核酸、抗原、酶等。也可用超聲波從組織中提取病毒。,四、濾過(guò)除菌,濾過(guò)除菌 是通過(guò)機(jī)械阻留作用除去液體及氣體中的細(xì)菌，所用裝置叫濾器。濾器上含有很多微細(xì)小孔，可使液體及氣體通過(guò)，細(xì)菌等大于孔徑的物體不能通過(guò)，借以

6、獲得無(wú)菌液體及氣體。,用途 主要用于不耐高溫的物體，如血清、毒素、抗毒素、酶、抗生素、維生素、氨基酸及特殊培養(yǎng)基等的除菌。 濾器不能除去病毒、霉形體和L型細(xì)菌。,濾器的種類(lèi)與型號(hào) 濾器的種類(lèi)很多，每種又有許多不同的型號(hào)，型號(hào)的區(qū)別主要是濾膜孔徑大小不同。除菌濾器孔徑通常為0.20.22m。 實(shí)驗(yàn)室常用濾器 耐酸玻璃濾器 蔡氏濾器 微孔濾膜,玻璃耐酸濾器,五、低溫抑菌法,低溫抑菌的機(jī)理 大多數(shù)微生物對(duì)低溫抵抗力很強(qiáng)，在低溫條件下微生物的代謝活動(dòng)降低到最低水平，生長(zhǎng)繁殖停止，但仍可長(zhǎng)時(shí)間保持生命。 低溫在微生物學(xué)工作中的用途 主要用于保存微生物，如： 04保存細(xì)菌 -20以下保存病毒,低溫保存微生

7、物注意事項(xiàng) 有少數(shù)細(xì)菌和病毒對(duì)低溫特別敏感，如淋球菌、巴氏桿菌在4保存比室溫保存死亡更快，皰疹病毒在-20保存比4死亡更快。 反復(fù)凍融容易引起微生物死亡。 冷凍保存細(xì)菌時(shí)，溫度必須迅速降低，以免菌體內(nèi)的水分形成結(jié)晶冰而損傷細(xì)胞膜。,冷凍真空干燥法（凍干法） 保存微生物及生物制品最好的方法 方法： 先將要保存的菌種加上保護(hù)劑（如甘油、蔗糖、脫脂乳、血清、二甲基亞楓等），裝到安瓿中，在凍干機(jī)中迅速冷凍、抽真空、干燥、封口。這樣保存的菌種經(jīng)多年不失去活性。,第二節(jié),化學(xué)消毒滅菌法,一、化學(xué)消毒劑及防腐劑 消毒劑 用于殺滅病原微生物的化學(xué)藥物。 防腐劑 也稱(chēng)抑菌劑，是用于抑制微生物生長(zhǎng)繁殖的化學(xué)藥物。

8、 二者統(tǒng)稱(chēng)消毒防腐劑,化學(xué)消毒防腐劑的種類(lèi)： 根據(jù)對(duì)菌體的作用分為： 使菌體蛋白變性或凝固的，如酚類(lèi)（高濃度）、醇類(lèi)、重金屬鹽類(lèi)（高濃度）、酸堿類(lèi)、醛類(lèi) 損傷胞漿膜的，如酚類(lèi)（低濃度）、表面活性劑、醇類(lèi)等脂溶劑 干擾細(xì)菌酶系統(tǒng)和代謝的，如某些氧化劑、重金屬鹽類(lèi)（低濃度） 改變核酸功能的，如染料、烷化劑等,使用方法 化學(xué)消毒劑與防腐劑不僅可殺死病原菌，同時(shí)對(duì)動(dòng)物的組織細(xì)胞也有損害作用，所以它只能外用，用于體表、環(huán)境及物體的消毒。 浸泡 擦拭 氣體熏蒸 噴霧及噴灑等,選藥原則 在實(shí)際工作中應(yīng)根據(jù)用途與消毒劑的特點(diǎn)來(lái)選擇藥品、使用方法和濃度。最理想的消毒劑應(yīng)是殺菌力強(qiáng)、價(jià)格低、無(wú)腐蝕性、能長(zhǎng)期保存、

9、對(duì)動(dòng)物無(wú)毒性或毒性較小、無(wú)殘留或?qū)Νh(huán)境無(wú)污染的化學(xué)藥品。,二、影響消毒劑作用的因素 1、消毒劑的性質(zhì) 2、消毒劑的濃度 3、作用時(shí)間與其他環(huán)境條件 4、微生物的種類(lèi),三、化學(xué)治療劑 用于消除動(dòng)物體內(nèi)病原微生物或其他寄生物的化學(xué)藥品稱(chēng)化學(xué)治療劑（chemo-therapeutic agent）。如磺胺類(lèi)藥物、呋喃類(lèi)藥物和其他抗代謝藥物。 這些藥物的作用有較強(qiáng)的選擇性，主要作用于病原微生物，而對(duì)機(jī)體毒副作用較小，主要用于臨床治療。,第三節(jié),生物因素對(duì)微生物的作用,一、抗生素、細(xì)菌素和植物殺菌素的殺菌作用,（一）抗生素（antibiotics） 是某些微生物在代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一類(lèi)能殺死或抑制另一些微

10、生物的化學(xué)物質(zhì)。其主要來(lái)源于放線菌和霉菌，細(xì)菌產(chǎn)生的僅有多粘菌素、桿菌肽等少數(shù)幾種。 目前發(fā)現(xiàn)的抗生素有2500多種，但臨床常用的僅幾十種。分為廣譜抗生素和窄譜抗生素。抗生素可用于治療細(xì)菌感染和抑菌。,（二）細(xì)菌素（bacteriocin） 是某些細(xì)菌產(chǎn)生的一類(lèi)具有殺菌作用的蛋白質(zhì)，只能作用于同種細(xì)菌不同的菌株或與它有親緣關(guān)系的其他細(xì)菌。 例如： 大腸菌素 作用大腸桿菌其他菌株和與它有親緣關(guān)系的志賀氏菌、沙門(mén)氏菌、克雷伯氏菌等。 細(xì)菌素目前只用于細(xì)菌的分型和流行病學(xué)調(diào)查，對(duì)治療疾病意義不大。,（三）植物殺菌素（phytocide） 是某些植物中存在的殺菌物質(zhì)，如黃連、板藍(lán)根等都含有殺菌物質(zhì)。,

11、二、噬菌體,噬菌體（bacteriophage,phage） 是寄生于細(xì)菌、放線菌、霉形體、螺旋體、真菌等其他微生物的一類(lèi)病毒。在自然界分布及廣，凡是有上述微生物的地方，都有相應(yīng)種類(lèi)的噬菌體。,1、噬菌體的形態(tài)結(jié)構(gòu) 噬菌體有四種外形，即蝌蚪形、球形、絲狀和檸檬形。 典型的噬菌體呈蝌蚪形，由頭部和尾部組成。頭部由核酸和蛋白質(zhì)衣殼構(gòu)成，呈20面體對(duì)稱(chēng)；尾部主要含蛋白質(zhì)，呈螺旋形，分尾領(lǐng)、尾鞘、尾髓、尾板、尾刺和尾絲幾部分，尾部有的能收縮，有的不能收縮。,2、噬菌體的增殖 噬菌體只能在活的敏感菌細(xì)胞內(nèi)增殖，并將菌體細(xì)胞裂解。其寄生生活有嚴(yán)格的菌種及菌型的特異性，即一種噬菌體只能寄生及裂解一種和它相應(yīng)

12、的細(xì)菌，或僅作用于該種細(xì)菌的某一型。 噬菌體的增殖分4個(gè)階段 吸附侵入生物合成成熟和釋放,吸 附,侵 入,生物合成（復(fù)制和成熟）,釋 放,噬菌體生長(zhǎng)跡象的觀察： 噬菌體可使混濁的細(xì)菌液體培養(yǎng)物變清朗，在固體培養(yǎng)基上可形成噬菌斑。 一個(gè)噬菌斑由一個(gè)噬菌體繁殖而成，不同噬菌體產(chǎn)生的噬菌斑大小、形態(tài)、邊緣和透明度均不同，所以，噬菌斑可用于噬菌體的鑒定、純種分離和計(jì)數(shù)。,3、噬菌體與寄主的關(guān)系 有些噬菌體在菌體細(xì)胞增殖后，迅速導(dǎo)致菌體裂解，此種噬菌體稱(chēng)毒性噬菌體或烈性噬菌體。,烈性噬菌體的溶解周期,有些噬菌體感染細(xì)菌后，并不馬上裂解細(xì)菌，而是將其基因整合到細(xì)菌的基因組中，與細(xì)菌的DNA一道復(fù)制，并隨細(xì)

13、菌的分裂而傳給后代，此種噬菌體叫溫和噬菌體，整合到細(xì)菌DNA上的噬菌體基因叫前噬菌體，帶有前噬菌體的細(xì)菌叫溶原性細(xì)菌。溫和噬菌體可能會(huì)在某個(gè)世代自發(fā)地從菌體DNA上脫離并復(fù)制 ，引起菌體裂解而釋放出噬菌體。,溫和噬菌體的增殖,噬菌體的應(yīng)用 由于噬菌體感染具有菌種或菌型的特異性，故可用噬菌體進(jìn)行細(xì)菌的鑒定和分型、檢測(cè)未知細(xì)菌、進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。 此外，噬菌體也是分子生物學(xué)及基因工程研究的工具。,第四節(jié),微生物實(shí)驗(yàn)室的生物安全,一、生物安全的概念和一般要求,（一）生物安全 是指與生物有關(guān)的各種因素對(duì)社會(huì)、經(jīng)濟(jì)、人類(lèi)健康可能產(chǎn)生的潛在的有害影響。而獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)室的生物安全是指在轉(zhuǎn)移、檢查和處理病料

14、、污染材料等過(guò)程中，避免污染環(huán)境及對(duì)人員造成危害。,微生物實(shí)驗(yàn)室的生物安全有三層含義 是指防止病原微生物等及其他有害生物或物質(zhì)傳入實(shí)驗(yàn)室（防止實(shí)驗(yàn)室污染） 是指防止病原微生物等傳出實(shí)驗(yàn)室（防止散播傳染） 是指實(shí)驗(yàn)室人員的自身安全防護(hù)（防止自身感染）,（二）實(shí)驗(yàn)室生物安全的一般要求 安全要點(diǎn)主要包括： 1、生物安全的潛在危險(xiǎn)在于處理臨床樣本，樣本的氣溶膠往往最容易污染實(shí)驗(yàn)室并造成人員感染。所有送檢樣本都應(yīng)視為有傳染性并做相應(yīng)處理。不允許用嘴吸取液體，應(yīng)采用相應(yīng)器械,2、涉及有害物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)具備防范生物危害的知識(shí)，人員的數(shù)量及流動(dòng)應(yīng)控制。實(shí)驗(yàn)室人員必須穿戴全套防護(hù)服，甚至面罩、防護(hù)眼鏡等。這

15、些用品用后應(yīng)做滅菌處理。要有良好的衛(wèi)生習(xí)慣，尤其要注意洗手。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不允許吃、喝、涂抹化妝品及裝隱形眼鏡。實(shí)驗(yàn)室工作人員必須接種有關(guān)疫苗。,3、對(duì)所有污染材料及水，包括樣本、試驗(yàn)器材、動(dòng)物等必須規(guī)定明確的消毒程序，并予實(shí)施。推薦使用含氯5.25%的消毒劑或其他消毒劑。 4、最主要的防護(hù)并非設(shè)施，而是工作人員本身，造成事故的最常見(jiàn)原因主要是由于工作人員缺乏有關(guān)知識(shí)、訓(xùn)練和粗心大意。,5、只有經(jīng)培訓(xùn)的人員才能處理動(dòng)物，操作時(shí)動(dòng)物應(yīng)予麻醉或鎮(zhèn)靜，避免傷害人及動(dòng)物。 6、實(shí)驗(yàn)室中處理的微生物提取物，特別是DNA，亦可造成污染，必須注意。,二、獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)室 的生物安全分類(lèi),目前國(guó)際公認(rèn)的微生物實(shí)驗(yàn)室分為生物安全（biosafety level ,BSL）1至4級(jí)。 即： BSL-1實(shí)驗(yàn)室 俗稱(chēng) P1實(shí)驗(yàn)室 BSL-4實(shí)驗(yàn)室 P2實(shí)驗(yàn)室 BSL-