第三章實(shí)驗(yàn)室生物安全幻燈片

1、,微生物學(xué)檢驗(yàn),第三章 實(shí)驗(yàn)室生物安全,3,本 章 內(nèi) 容,4,學(xué)習(xí)目標(biāo),學(xué)習(xí)目標(biāo)： 1.掌握：實(shí)驗(yàn)室生物安全和實(shí)驗(yàn)室生物安全保障的概念； BSL-2實(shí)驗(yàn)室安全操作技術(shù)規(guī)范； BSL-1、BSL-2在安全設(shè)備、個(gè)體防護(hù)方面的不同。 2.熟悉：病原微生物危害程度分類(lèi)等級(jí)和實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平分級(jí)；感染性物質(zhì)的操作與處理。 3.了解：臨床微生物實(shí)驗(yàn)室布局及設(shè)計(jì)和建造要求。,本章重點(diǎn)： 實(shí)驗(yàn)室生物安全的概念，BSL-2實(shí)驗(yàn)室生物安全設(shè)備要求、實(shí)驗(yàn)室分布及安全防護(hù)措施。 實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平分級(jí)。感染性物質(zhì)的操作與處理。,5,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室生物安全概述,一、實(shí)驗(yàn)室生物安全與保障,（一）實(shí)驗(yàn)室生物安

2、全的概念和防護(hù)措施,1實(shí)驗(yàn)室生物安全的概念 ：實(shí)驗(yàn)室生物安全是指用以防止實(shí)驗(yàn)室發(fā)生病原體或毒素意外暴露及釋放的防護(hù)原則、技術(shù)及實(shí)踐。,6,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室生物安全概述,安全設(shè)備和個(gè)人防護(hù),（一）實(shí)驗(yàn)室生物安全的概念和防護(hù)措施,2實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)措施,實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)與建造,實(shí)驗(yàn)室生物安全管理規(guī)章制度,安全操作規(guī)程,生物安全柜,7,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室生物安全概述,1.概念：即單位和個(gè)人為防止病原體或毒素丟失、被竊、濫用、轉(zhuǎn)移或有意釋放而采取的安全措施。 2.措施： 病原體和毒素的貯存位置、接觸人員資料、使用記錄、運(yùn)送記錄、對(duì)材料進(jìn)行滅活和（或）丟棄等情況的最新調(diào)查結(jié)果； 相關(guān)人員的作用和責(zé)任； 必要時(shí)公共

3、衛(wèi)生和安全保障管理部門(mén)在發(fā)生違反安全保障事件時(shí)的介入程度、作用和責(zé)任等； 調(diào)查并糾正違規(guī)行為。,（二）實(shí)驗(yàn)室生物安全保障的概念和措施,8,二、微生物危害評(píng)估 進(jìn)行微生物危害度評(píng)估最有用的工具之一就是列出微生物的危險(xiǎn)度等級(jí)。適當(dāng)時(shí)還應(yīng)考慮以下因素： 病原微生物的致病性和感染量； 暴露的潛在后果； 自然傳播途徑； 實(shí)驗(yàn)室操作所致的其他感染途徑； 病原微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性；,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室生物安全概述,9,所操作病原微生物的濃度； 病原微生物的宿主； 從動(dòng)物研究和實(shí)驗(yàn)室感染報(bào)告或臨床報(bào)告中得到的信息； 擬進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)操作（如超聲處理、離心等）； 可能會(huì)擴(kuò)大微生物的宿主范圍或改變病原微生物對(duì)于已知有效

4、治療方案敏感性的所有基因技術(shù)； 當(dāng)?shù)厥欠衲苓M(jìn)行有效的預(yù)防或治療。,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室生物安全概述,10,三、病原微生物的分類(lèi)管理,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室生物安全概述,國(guó)內(nèi)外病原微生物危害程度分類(lèi)比較,11,管理?xiàng)l例 通用要求 WHO安全手冊(cè),第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室生物安全概述,12,管理?xiàng)l例 通用要求 WHO安全手冊(cè),第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室生物安全概述,13,管理?xiàng)l例 通用要求 WHO安全手冊(cè),第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室生物安全概述,14,四 、實(shí)驗(yàn)室生物安全的重要意義,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室生物安全概述,是建立病原微生物研究安全平臺(tái)的需要 是生物防護(hù)（國(guó)防）的需要 是出入境檢驗(yàn)檢疫的需要 是動(dòng)物防疫的需要 是傳染病的預(yù)防與控制的需要 是醫(yī)

5、院感染控制的需要 GOARN監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)離不開(kāi)生物安全實(shí)驗(yàn)室,15,第二節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備要求,一、實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平分級(jí) 實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求（GB19489-2008）根據(jù)生物安全實(shí)驗(yàn)室所操作的生物因子的危害程度及采取的防護(hù)措施，將生物安全實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)水平分為4級(jí)。,16,第二節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備要求,一、實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平分級(jí),與病原微生物危害等級(jí)相對(duì)應(yīng)的生物安全水平、實(shí)驗(yàn)室類(lèi)型、 實(shí)驗(yàn)室操作以及主要安全設(shè)備的要求。,17,第二節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備要求,1.清潔區(qū)：為未被病原微生物污染的區(qū)域，包括辦公室、休息室、培養(yǎng)基配制室與試劑儲(chǔ)藏室等，此區(qū)域禁止帶入細(xì)菌檢

6、驗(yàn)標(biāo)本。 2.半污染區(qū)：為可能被病原微生物污染的區(qū)域如緩沖間、工作服放置室、走廊等。 3.污染區(qū)（操作區(qū)）：為已被病原微生物污染的區(qū)域，用于接收臨床標(biāo)本，進(jìn)一步接種、分離培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗(yàn)及結(jié)果報(bào)告等工作。,（一）臨床微生物實(shí)驗(yàn)室布局,二、臨床微生物實(shí)驗(yàn)室布局與基本要求,18,第二節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備要求,1BSL-1和BSL-2實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的安全原則 在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)室時(shí)應(yīng)考慮可能造成實(shí)驗(yàn)室安全問(wèn)題的情況，主要包括： 氣溶膠形成 處理高濃度微生物 節(jié)肢動(dòng)物和嚙齒動(dòng)物的侵?jǐn)_ 儀器設(shè)備過(guò)多和過(guò)度擁擠 無(wú)關(guān)人員未經(jīng)允許進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室 一些特殊樣品和試劑使用的工作流程,（二）實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)和建造的特殊要求,1

7、9,第二節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備要求,2BSL-1設(shè)計(jì)和建造要求 無(wú)需特殊選址 每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)洗手池，宜設(shè)置在靠近出口處 實(shí)驗(yàn)室的墻壁、天花板和地面應(yīng)平整 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面應(yīng)防水，耐腐蝕、耐熱 實(shí)驗(yàn)室中的櫥柜和實(shí)驗(yàn)臺(tái)應(yīng)牢固 實(shí)驗(yàn)室如有可開(kāi)啟的窗戶(hù)，應(yīng)設(shè)置紗窗 在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)外應(yīng)有存放外衣和私人物品的設(shè)施 實(shí)驗(yàn)室門(mén)應(yīng)設(shè)有門(mén)禁系統(tǒng)，能控制進(jìn)入 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保證工作照明，避免不必要的反光和強(qiáng)光 應(yīng)有適當(dāng)?shù)南驹O(shè)備,（二）實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)和建造的特殊要求,20,第二節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備要求,3BSL-2設(shè)計(jì)和建造要求 除了具備BSL-1實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)和建造要求之外，還有如下要求： 應(yīng)設(shè)置實(shí)施各種消毒方法的設(shè)施，如高

8、壓滅菌器 安全系統(tǒng)應(yīng)當(dāng)包括消防、應(yīng)急供電、洗眼器以及應(yīng)急噴淋裝置 實(shí)驗(yàn)室門(mén)宜帶鎖、可自動(dòng)關(guān)閉。實(shí)驗(yàn)室的門(mén)應(yīng)有可視窗 實(shí)驗(yàn)室出口應(yīng)有發(fā)光指示標(biāo)志 不需特殊的通風(fēng)設(shè)備，可采取窗戶(hù)自然通風(fēng)，同時(shí)安裝紗窗 應(yīng)有足夠的儲(chǔ)存空間擺放物品以方便使用 有可靠和充足的電力供應(yīng)和應(yīng)急照明,（二）實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)和建造的特殊要求,21,第二節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備要求,一級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室示意圖,二級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室示意圖,22,BSL-1實(shí)驗(yàn)室與BSL-2實(shí)驗(yàn)室安全設(shè)備和個(gè)體防護(hù)的要求區(qū)別：,三、安全設(shè)備和個(gè)體防護(hù),第二節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備要求,23,第三節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范,一、實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)入要求 1.

9、禁止非工作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。參觀(guān)實(shí)驗(yàn)室等特殊情況須經(jīng)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)后方可進(jìn)入。 2.實(shí)驗(yàn)室的門(mén)應(yīng)保持關(guān)閉。 3.BSL-2實(shí)驗(yàn)室入口處應(yīng)貼有國(guó)際通用的生物危害警告標(biāo)志，其下部應(yīng)注明實(shí)驗(yàn)室的生物安全等級(jí)、實(shí)驗(yàn)室名稱(chēng)、負(fù)責(zé)人姓名和聯(lián)系電話(huà)等有關(guān)信息 4.進(jìn)入動(dòng)物房應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)特殊批準(zhǔn)，禁止將無(wú)關(guān)動(dòng)物帶入實(shí)驗(yàn)室。,24,第三節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范,二、實(shí)驗(yàn)室操作要求 1.所有實(shí)驗(yàn)操作要按盡量減少微小液滴和氣溶膠產(chǎn)生的方式來(lái)進(jìn)行。 2.以移液器吸取液體，禁止舔標(biāo)簽。 3.應(yīng)限制使用皮下注射針頭和注射器。 4.盡可能應(yīng)用一次性注射器，用過(guò)的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽，禁止用手從注射器上取下針

10、頭。用過(guò)的針頭必須放入防穿透的銳器盒中。非一次性利器必須放入銳器盒中并運(yùn)送到特定區(qū)域進(jìn)行高壓滅菌。 5.禁止用手處理破碎的玻璃器具。裝有污染針、利器及破碎玻璃的容器在丟棄之前必須高壓滅菌。,25,第三節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范,二、實(shí)驗(yàn)室操作要求 6.實(shí)驗(yàn)室必須制定并嚴(yán)格執(zhí)行處理溢出物的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。 7.在處理完感染性實(shí)驗(yàn)材料和動(dòng)物以及其他有害物質(zhì)后，脫掉手套后及離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前，都必須洗手。 8.禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)進(jìn)食、飲水、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲(chǔ)存食物。 9.每天工作結(jié)束后應(yīng)消毒工作臺(tái)面，具有潛在危害性的材料濺出后要隨時(shí)消毒。,26,第三節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范,二、實(shí)驗(yàn)室操

11、作要求 10.所有培養(yǎng)物、廢棄物在運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室之前必須進(jìn)行高壓滅菌。需運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室滅菌的物品必須放在專(zhuān)用密閉防漏的容器內(nèi)儲(chǔ)存、運(yùn)輸。 11.實(shí)驗(yàn)室的文件紙張只有保證未受到污染才可帶出。 12.將生物安全程序納入標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范或生物安全手冊(cè)，由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人專(zhuān)門(mén)保管，工作人員在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之前要閱讀規(guī)范并按照規(guī)范要求操作。 13.工作人員要接受有關(guān)的潛在危險(xiǎn)知識(shí)的培訓(xùn)，掌握預(yù)防暴露以及暴露后的處理程序。每年要接受一次最新的培訓(xùn)。,27,第三節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范,三、感染性物質(zhì)的操作與處理 （一）感染性物質(zhì)的操作 1.標(biāo)本采集：必須有掌握相關(guān)職業(yè)知識(shí)和操作技能的工作人員進(jìn)行采集，并根據(jù)采集的標(biāo)本中

12、可能含有病原微生物的危害程度而采取相應(yīng)的個(gè)人防護(hù)。 2.標(biāo)本運(yùn)送：采集的標(biāo)本應(yīng)采取防止污染工作人員、患者及環(huán)境的方式在醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)運(yùn)送。,28,第三節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范,（一）感染性物質(zhì)的操作 3.標(biāo)本接收和打開(kāi)：需要接收大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)設(shè)專(zhuān)門(mén)的房間或空間。標(biāo)本的內(nèi)層容器應(yīng)在生物安全柜內(nèi)打開(kāi)，并備好消毒劑。,29,第三節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范,（一）感染性物質(zhì)的操作 4.血清分離：操作時(shí)應(yīng)戴手套并注意眼睛和黏膜的防護(hù)。 5.感染性物質(zhì)凍干管的開(kāi)啟和儲(chǔ)存： 凍干管的開(kāi)啟應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行。 首先清潔外表面，在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡，用一團(tuán)酒精浸泡的棉花將管包起來(lái)以

13、保護(hù)雙手，然后從銼痕處打開(kāi)。將頂部小心移去并按污染材料處理。 緩慢向管中加入液體重懸凍干物，避免出現(xiàn)泡沫。,30,第三節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范,（二）暴露的處理 1銳器傷及其他損傷： 受傷人員應(yīng)立即停止工作，脫防護(hù)服； 清洗雙手和受傷部位，如有傷口，應(yīng)當(dāng)在傷口旁端輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，再用洗手液和流動(dòng)水沖洗，禁止進(jìn)行傷口的局部擠壓； 受傷部位的傷口沖洗后，使用皮膚消毒劑，如75%乙醇或者0.5%碘伏進(jìn)行消毒，必要時(shí)進(jìn)行醫(yī)學(xué)處理； 應(yīng)記錄受傷原因及相關(guān)微生物，并保留完整的醫(yī)療記錄。,31,第三節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范,（二）暴露的處理 2潛在感染性物質(zhì)的食入 ：應(yīng)立即脫防

14、護(hù)服并進(jìn)行醫(yī)學(xué)處理，要報(bào)告食入材料的特性和暴露細(xì)節(jié)，并保留完整的醫(yī)療記錄。 3潛在危險(xiǎn)性氣溶膠釋放：所有人員必須立即撤離現(xiàn)場(chǎng)，并及時(shí)通知實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和生物安全負(fù)責(zé)人，暴露者接受醫(yī)學(xué)咨詢(xún)。應(yīng)張貼“禁止進(jìn)入”的標(biāo)志，待氣溶膠排出、粒子沉降（約1小時(shí)）后方可入內(nèi)。清除污染時(shí)應(yīng)穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)裝備。,32,第三節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范,（二）暴露的處理 4. 潛在感染性物質(zhì)溢出： 處理溢出的人員必須穿防護(hù)服，戴手套，必要時(shí)需對(duì)面部和眼睛進(jìn)行保護(hù)。 首先用布或紙巾覆蓋，由外圍向中心傾倒消毒劑，作用一定時(shí)間（約30分鐘）后，將布、紙巾以及破損物品清理掉，玻璃碎片應(yīng)用鑷子或硬的厚紙板等工具清理并置于銳器

15、盒中，切勿直接用手，以免刺破皮膚。 再用消毒劑擦拭污染區(qū)域。 用于清理的布、紙巾、抹布及厚紙板應(yīng)放在盛放污染性廢棄物的容器內(nèi)，污染的文件（包括記錄）復(fù)制后，將原件丟入放污染物廢棄物的容器。,33,第三節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范,（二）暴露的處理 5離心管破碎： 如果正在運(yùn)行時(shí)非封閉離心桶的離心機(jī)內(nèi)盛有潛在感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂，應(yīng)關(guān)閉機(jī)器電源，停止后密閉離心桶約30分鐘，待氣溶膠沉降后開(kāi)蓋。 若離心機(jī)停止時(shí)發(fā)現(xiàn)離心管破碎，應(yīng)立即蓋上離心機(jī)，密閉30分鐘。隨后操作都應(yīng)戴結(jié)實(shí)手套。 玻璃碎片用鑷子等工具清除，所有破碎的離心管、玻璃碎片、離心桶、十字軸和轉(zhuǎn)子都應(yīng)放在無(wú)腐蝕性、已知對(duì)相關(guān)微生物具有殺滅活性的消毒劑內(nèi)，消毒30分鐘。 未破損的帶蓋離心管應(yīng)放在另一裝有消毒劑的容器內(nèi)，然后回收。離心機(jī)內(nèi)腔應(yīng)用適當(dāng)濃度的同種消毒劑反復(fù)擦拭，然后用水沖洗并干燥。,34,第三節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范,（三）感染性物質(zhì)的運(yùn)輸,感染性物質(zhì)運(yùn)輸要求按內(nèi)層、中層、外層三層進(jìn)行包裝。,35,第三節(jié) 生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范,（四）感染性廢棄物的處理,感染性廢棄物處理的首要原則是必須在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)清除污染后丟棄。高壓蒸汽滅菌是清除污染時(shí)首選的方法。所有感染性廢棄物都應(yīng)裝入可高壓滅菌的黃色塑料袋，并置于防滲