DB50-T1367-2023-水質磺胺類抗生素的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法-重慶市VIP

ICS13.060.01CCSZ10DB50重慶市地方標準DB50/T1367—2023水質磺胺類抗生素的測定液相色譜—串聯(lián)質譜法重慶市市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB50/T1367—2023目??次前??言.............................................................................................................................................................II1范圍.................................................................................................................................................................12規(guī)范性引用文件.............................................................................................................................................13術語和定義.....................................................................................................................................................14方法原理.........................................................................................................................................................15干擾與消除.....................................................................................................................................................16試劑和材料.....................................................................................................................................................17儀器和設備.....................................................................................................................................................28樣品.................................................................................................................................................................29分析步驟.........................................................................................................................................................310結果計算與表示...........................................................................................................................................7111213精密度和正確度...........................................................................................................................................8質量保證和質量控制...................................................................................................................................8廢棄物的處理...............................................................................................................................................9方法的檢出限和測定下限.........................................................................................10附錄B（資料性）方法的精密度和正確度.............................................................................................11IDB50/T1367—2023前??言本文件按照GB/T1.1－2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由重慶市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心提出。本文件由重慶市生態(tài)環(huán)境局歸口并組織實施。本文件主要起草單位：重慶市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心。本文件主要起草人：鄭璇、田雋、李新宇、張文斌、李莉、鄒家素、張曉嶺、蹇川、張芹、趙麗、張君、鄒素蘭、孫靜、郭志順、唐思雨。IIDB50/T1367—2023水質磺胺類抗生素的測定液相色譜—串聯(lián)質譜法1范圍本文件規(guī)定了液相色譜－串聯(lián)質譜法對水中18種磺胺類抗生素進行測定的方法。本文件適用于地表水、地下水、生活污水和工業(yè)廢水中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、甲氧卞氨嘧啶、磺胺對甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、奧美普林、磺胺氯噠嗪;磺胺甲惡唑、磺胺-6-（間）甲氧嘧啶、磺胺二甲氧噠嗪、磺胺異惡唑、磺胺苯吡唑、磺胺多辛、磺胺喹惡啉等18種磺胺類抗生素的測定。若通過驗證，本文件也可適用于其他磺胺類抗生素的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。HJ91.1污水監(jiān)測技術規(guī)范HJ91.2地表水環(huán)境質量監(jiān)測技術規(guī)范HJ164地下水環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)范本文件沒有需要界定的術語和定義。4方法原理水中的磺胺類抗生素經固相萃取柱富集，用液相色譜－串聯(lián)質譜分離檢測。根據保留時間和特征離子峰定性，內標法定量。金屬離子與目標化合物能形成絡合物，使固相萃取效率降低，可向水樣中加入乙二胺四乙酸二鈉抑制絡合物的形成。警告：本方法所使用的有機試劑對人體健康有害，試劑配制和樣品前處理過程應在通風櫥內進行，操作時應按規(guī)定要求佩帶防護器具，避免接觸皮膚和衣服。1DB50/T1367—20236.2氫氧化鈉（NaOH）：分析純。6.3鹽酸（HCl）：1mol/L，分析純。6.4甲醇（CH3OH）：農殘級或等同規(guī)格。6.5甲酸（HCOOH）：色譜純。6.6甲酸溶液（0.05%）：取50μl甲酸（6.5）溶于100ml實驗用水中。6.7甲酸/甲醇溶液：取90ml甲酸溶液（6.5）和10ml甲醇（6.4）混合，搖勻。6.8乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA）：分析純。6.9標準貯備液：ρ=1.00g/L可直接購買有證標準溶液，也可用標準物質配制，標準物質純度大于99.0%，用甲醇（6.4）溶解，貯備液在-10℃以下冷凍、避光保存不超過6個月或參照制造商的產品說明。6.10混合標準中間液：ρ=100μg/ml移取適量標準貯備液（6.9）按需要用甲醇（6.4）稀釋，中間液應于-10℃以下冷凍、避光保存不超過3個月。6.11混合標準使用液：ρ=1.00μg/ml（參考濃度）將磺胺類抗生素混合標準中間液（6.10）按需要用甲醇（6.4）稀釋，-10℃以下冷凍，避光保存不超過7天。6.12內標貯備液1：ρ=1.00g/L內標1為磺胺二甲嘧啶-13C6半水合物（Sulfadimidine-13C6），可直接購買有證標準溶液，也可用標準物質溶于甲醇（6.4）。貯備液在-10℃以下冷凍、避光保存不超過6個月或參照制造商的產品說明。6.13內標貯備液2：ρ=1.00g/L內標2為磺胺甲噁唑-13C6（Sulfamethoxazole-13C6）,可直接購買有證標準溶液，也可用標準物質溶于甲醇（6.4）。貯備液在-10℃以下冷凍、避光保存不超過6個月或參照制造商的產品說明。6.14內標混合中間液：ρ=100μg/ml（參考濃度）移取適量內標貯備液1（6.12）和內標貯備液2（6.13）按需要用甲醇（6.4）稀釋成。內標混合中間液在-10℃以下冷凍、避光保存不超過3個月或參照制造商的產品說明。6.15內標混合使用液：ρ=10.0μg/ml（參考濃度）將內標混合中間液（6.14）按需要用甲醇（6.4）稀釋，-10℃以下冷凍，避光保存不超過7天。6.16固相萃取柱：填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB）或同等柱效的萃取柱，規(guī)格為6ml/150mg。72DB50/T1367—20238.1采集與保存參照HJ91.1、HJ91.2和HJ164的相關規(guī)定采集樣品于4000ml磨口棕色玻璃瓶中，水樣應充滿采樣瓶，不留液上空間。樣品采集后應盡快進行分析。如暫不能分析，應在0℃～4℃避光保存，14天內完成萃取。8.2樣品制備將固相萃取柱（6.15）固定在固相萃取裝置(7.4)上，分別用10ml甲醇（6.4）和10ml實驗用水活化固相萃取柱（6.15），保證小柱柱頭浸潤。水樣經0.45μm濾膜（6.16）過濾，取1000ml水樣，加入1gNa2EDTA（6.8），用氫氧化鈉（6.2）和鹽酸（6.3）調節(jié)pH值為至6.0，水樣以低于10ml/min（約3滴/秒～4滴/秒）的流速通過小柱，用10ml實驗用水洗滌小柱，用氮氣（6.17）吹干小柱，再用10ml甲醇（6.4）洗脫，收集洗脫液于潔凈試管中，洗脫液經濃縮裝置（7.3）濃縮至干，加入內標混合使用液（6.14）5.00μl，用甲酸/甲醇溶液（6.7）定容至1ml，經0.22μm濾膜（6.16）過濾，置于樣品瓶中，待測。當樣品體積為1000ml，濃縮后定容體積為1.0ml，進樣體積為10μl，18種磺胺類抗生素的檢出限為1ng/L～2ng/L，測定下限為4ng/L～8ng/L，詳見附錄A。8.3空白樣品的制備以實驗用水代替樣品，應按照樣品制備（8.2）相同操作步驟，制備空白樣品。9分析步驟流動相A：甲酸溶液(6.5)，流動相B：甲醇（6.4），梯度洗脫程序見表1，流速：200.0μl/min；柱溫：35℃；進樣量：10μL；具體參數(shù)見表1。表1液相色譜流動相梯度洗脫程序噴霧電壓(Sprayvoltage)：3000V毛細管溫度：350℃3DB50/T1367—2023鞘氣(N2)流速:45L/min輔助氣(N2)流速:15L/min碰撞氣(Ar)壓力:200mPa選擇反應監(jiān)測(SRM)，具體參數(shù)見表2。表2目標化合物的選擇反應監(jiān)測條件母離子m/z子離子m/z碰撞能量eV錐孔電壓V序號1目標物磺胺嘧啶156.0a1422162715151524222416241423152217191624252514231525142316241826131471717878787870709191666678786666757566668686757579798181666669696969251.0256.1250.1265.0291.2281.3271.1279.3285.06281.3275.1285.07254.1260.0281.3311.3268.2108.1156.1a2磺胺噻唑108.2156.1a3磺胺吡啶184.2156.0a4磺胺甲基嘧啶甲氧卞氨嘧啶磺胺對甲氧嘧啶磺胺甲噻二唑磺胺二甲嘧啶108.1230.2a5261.1156.1a6108.2124.14DB50/T1367—2023表2(續(xù))母離子子離子m/z碰撞能量錐孔電壓V序號18目標物m/zeV158.1a27818169696969磺胺苯吡唑磺胺多辛315.1160.11918261720156.1a19311.3301.1108.2156.0a20磺胺喹惡啉108.1注：為定量子離子a9.1.3儀器調諧按照儀器使用說明書在規(guī)定時間和頻次內對液相色譜-串聯(lián)質譜儀進行儀器質量數(shù)和靈敏度校正，以確保儀器處于最佳測試狀態(tài)。在儀器使用過程中，如發(fā)現(xiàn)儀器質量數(shù)出現(xiàn)明顯偏差或靈敏度大幅度下降時，應立即對儀器重新進行質量數(shù)和靈敏度校正。9.2校準9.2.1標準曲線的繪制取一定量磺胺類抗生素混合標準使用液（6.11）于甲酸/甲醇混合溶液（6.7）中，制備至少5個濃度點的標準系列，18種磺胺類抗生素的質量濃度均分別為2.00μg/L、5.00μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L（此為參考濃度），于每毫升標準系列中加入5.00μl內標混合使用液（6.15），使內標的質量濃度為50.0μg/L，貯存在棕色進樣小瓶中，待測。由低濃度到高濃度依次對標準系列溶液進樣，以標準系列溶液中目標組分的濃度為橫坐標，以其對應的峰面積（或峰高）與內標物峰面積(或峰高)的比值和內標物濃度的乘積為縱坐標，建立校準曲線。如式（1）：yaxb..................................................................................(1)b——校準曲線截距的數(shù)值。在本標準推薦的儀器參考條件下，目標化合物的提取離子流色譜圖見圖1。5DB50/T1367—20236DB50/T1367—2023按照與繪制校準曲線相同的儀器分析條件進行測定。9.3.2空白試驗按與樣品測定相同的儀器分析條件進行空白樣品的測定。10結果計算與表示10.1定性分析每種被測組分選擇1個母離子和2個子離子進行監(jiān)測。在相同的實驗條件下，樣品中待測組分的保留時間與標準樣品中目標組分的保留時間比較，相對標準偏差的絕對值應小于2.5%；且待測樣品譜圖中，各組分定性離子的相對豐度（Ksam,見式2）與濃度接近的標準溶液譜圖中對應的定性離子相對豐度（Kstd,見式3）進行比較，偏差在表3規(guī)定的最大允許偏差范圍內，則可判定為樣品中存在對應的待測物。KsamA2100................................................................................(2)A1式中：Ksam——樣品中某組分定性子離子的相對豐度的數(shù)值，單位為百分比（%）；A2——樣品中某組分二級質譜定性子離子的峰面積（或峰高）；A1——樣品中某組分二級質譜定量子離子的峰面積(或峰高)。KstdAstd2100..............................................................................(3)Astd1——標準樣品中某組分二級質譜定量子離子的峰面積(或峰高)。定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差11f....................................................................................(4)ρ——樣品中目標物的質量濃度的數(shù)值，單位為納克每升（ng/L）；7DB50/T1367—2023ρ1——從標準曲線上查得的樣品中目標物的濃度的數(shù)值，單位為微克每升(μg/L)；f——稀釋倍數(shù)。10.3結果表示測定結果小數(shù)位數(shù)的保留與方法檢出限一致，最多保留三位有效數(shù)字。11精密度和正確度精密度11.111.1.16家實驗室對含18種磺胺類抗生素濃度為5.00ng/L、10.0ng/L和20.0ng/L的統(tǒng)一空白加標樣進行了6次重復測定：實驗室內相對標準偏差分別為：4.0%～12.2%，1.3%～13.8%，0.8%～10.4%;實驗室間相對標準偏差分別為：5.3%～16.3%，4.4%～9.3%，3.9%～9.8%;重復性限范圍為：0.71ng/L～0.88ng/L，1.38ng/L～2.64ng/L，2.13ng/L～4.30ng/L;再現(xiàn)性范圍為：0.94ng/L～1.79ng/L，1.78ng/L～3.53ng/L，2.54ng/L～6.30ng/L。11.1.26家實驗室統(tǒng)一對地表水樣品進行重復6次加標測定，抗生素加標濃度為5.00ng/L和10.0ng/L：實驗室內相對標準偏差分別為：3.9%～29.5%和4.1%～29.5%；實驗室間相對標準偏差分別為：12.5%～22.4%和10.9%～19.9%；重復性限范圍為：2.27ng/L～3.75ng/L和3.09ng/L～5.57ng/L；再現(xiàn)性范圍為：2.27ng/L～3.78ng/L和3.32ng/L～6.55ng/L。11.1.36家實驗室統(tǒng)一對廢水樣品進行重復6次加標測定，抗生素加標濃度為10.0ng/L和20.0ng/L：實驗室內相對標準偏差分別為：4.0%～12.2%和4.5%～28.5%；實驗室間相對標準偏差分別為：5.7%～16.3%和12.1%～19.7%；重復性限范圍為：4.49ng/L～7.21ng/L和6.46ng/L～12.0ng/L；再現(xiàn)性范圍為：5.21ng/L～7.77ng/L和7.30ng/L～12.9ng/L。11.2.16家實驗室對地表水進行加標回收實驗，加標濃度為分別為5.00ng/L、10.0ng/L，加標回收率分別為：70.6%～132%，69.5%～131%。11.2.26家實驗室對廢水進行加標回收實驗，加標濃度為分別為10.0ng/L、20.0ng/L，加標回收率11.2.3精密度和正確度結果統(tǒng)計見附表B。12.2校準每批樣品應建立標準曲線，相關系數(shù)應≥0.99。8DB50/T1367—2023每20個樣品或每批次（≤20個樣品/批）應測定一個校準曲線中間濃度點標準溶液，其測定結果與該點濃度的相對誤差應在±20%以內。12.3平行樣的測定每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）應分析一個平行樣品。平行樣的相對標準偏差應控制在25%以內。12.4基體加標每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）應做1個基體加標，加標回收率應在50%～150%。13廢棄物的處理實驗中產生的廢物應分類收集、統(tǒng)一保管，并做好相應標識，依法委托有資質的單位進行處理。9DB50/T1367—2023附錄A（規(guī)范性）方法的檢出限和測定下限本方法中目標化合物的檢出限、測定下限和保留時間見表A.1。表A.1方法的檢出限、測定下限和保留時間檢出限測定下限保留時間序號化合物名稱磺胺嘧啶英文名稱CAS號ng/Lng/Lmin1Sulfadiazine68-35-9284.7823磺胺噻唑磺胺吡啶sulfathiazolesulfapyridinesulfamerazinetrimethoprimsulfameter72-14-0144-83-2127-79-7738-70-5651-06-9144-82-157-68-122221222222222222888848888888888884.985.085.235.485.545.605.635.785.875.656.146.266.326.366.666.796.874磺胺甲基嘧啶甲氧卞氨嘧啶磺胺對甲氧嘧啶磺胺甲噻二唑磺胺二甲基嘧啶磺胺甲氧噠嗪奧美普林567sulfamethizolesulfadimidine89Sulfamethoxypridazineormetoprim80-35-3磺胺-6-（間）甲氧嘧啶磺胺二甲氧噠嗪磺胺異惡唑10DB50/T1367—2023附錄B（資料性）方法的精密度和正確度B.1本方法的重復性、再現(xiàn)性等精密度指標見表B.1～表B.3。表B.1方法的精密度(空白加標）精密度統(tǒng)計結果實驗室內相對標準偏差%實驗室間相序號化合物名稱加標濃度總均值重復性限r再現(xiàn)性限R對標準偏差ng/Lng/Lng/Lng/L%5.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.03.7310.623.93.559.5821.03.5811.214.83.6111.120.93.6110.822.23.658.4216.93.688.7322.03.8411.423.33.4811.220.66.3～11.21.3～8.20.8～9.24.9～10.75.5～11.43.5～8.25.2～10.72.5～10.93.0～6.46.3～9.92.4～9.62.0～5.96.3～9.96.1～12.83.0～8.74.0～8.93.8～10.12.8～8.76.0～8.83.5～11.51.9～7.07.0～9.34.1～7.83.1～4.84.9～12.25.4～10.12.5～7.910.07.30.882.013.910.822.063.450.772.202.130.802.012.480.802.544.300.721.532.900.781.662.680.861.992.550.732.202.741.322.845.361.162.795.891.383.102.541.253.185.161.252.825.891.471.784.201.332.745.311.002.525.801.263.535.01123456789磺胺嘧啶磺胺噻唑6.09.07.78.511.97.5磺胺吡啶10.05.4DB50/T1367—2023表B.1(續(xù)）精密度統(tǒng)計結果實驗室內相實驗室間相序號化合物名稱加標濃度總均值重復性限r再現(xiàn)性限R對標準偏差對標準偏差ng/Lng/Lng/Lng/L%%5.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.05.0010.020.03.6111.818.93.6711.116.43.6110.115.13.7411.018.63.668.6216.63.5411.217.03.4011.417.73.368.6422.53.778.5218.55.8～10.05.3～12.62.7～9.96.8～9.83.8～13.84.4～9.65.2～9.02.0～8.63.7～8.66.5～9.52.5～9.73.2～7.76.5～11.42.8～8.92.5～7.97.7～10.73.6～8.82.9～8.55.4～8.65.2～10.33.2～10.47.3～10.34.8～7.42.2～7.15.8～10.45.0～6.84.6～8.413.87.29.87.06.86.310.17.46.68.14.67.49.68.33.916.34.44.411.85.84.511.07.75.014.26.94.80.852.643.940.802.603.260.731.813.070.821.933.100.841.552.790.861.843.330.712.463.550.801.453.460.761.383.561.603.396.301.033.194.131.222.663.971.132.264.801.252.453.121.792.183.691.292.913.851.272.284.551.652.074.10101112131415161718奧美普林磺胺氯噠嗪磺胺甲惡唑磺胺-6-（間）甲氧嘧啶磺胺二甲氧噠嗪磺胺異惡唑磺胺苯吡唑磺胺多辛12DB50/T1367—2023表B.2方法的精密度(地表水樣品加標）精密度統(tǒng)計結果實驗室內相對標準偏差%實驗室間相序號化合物名稱加標濃度總均值重復性限r再現(xiàn)性限R對標準偏差ng/Lng/Lng/Lng/L%5.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.05.0010.04.317.994.748.954.418.486.1411.65.7212.14.7910.15.369.274.328.374.618.855.449.825.5011.55.3311.05.339.884.388.555.3110.04.648.735.208.605.5211.45.7～25.34.7～23.710.9～28.96.6～19.96.3～28.65.8～24.118.2～27.25.9～25.77.6～29.36.4～15.67.3～22.96.2～26.74.3～26.64.1～27.518.1～28.69.2～20.48.5～29.83.9～26.13.9～24.96.1～27.48.9～22.35.2～23.87.4～29.311.4～29.54.3～29.14.1～29.420.4～29.59.2～24.73.9～26.26.2～26.67.4～18.04.3～22.55.6～20.74.1～23.98.5～27.45.0～23.913.919.919.514.318.411.521.613.315.711.215.612.416.616.722.116.317.411.215.313.914.611.916.513.218.317.622.416.919.616.316.110.912.511.817.211.92.273.242.824.172.543.223.754.912.793.812.383.972.845.232.724.112.573.942.474.082.354.422.924.722.835.573.324.302.975.121.603.092.083.232.924.352.273.652.825.052.543.323.755.292.794.512.914.932.846.052.724.392.575.403.156.082.354.763.784.752.836.553.324.502.976.432.354.452.494.092.974.7612磺胺嘧啶磺胺噻唑3磺胺吡啶4磺胺甲基嘧啶甲氧卞氨嘧啶磺胺對甲氧嘧啶磺胺甲噻二唑磺胺二甲基嘧啶磺胺甲氧噠嗪奧美普林56713DB50/T1367—2023表B.3方法的精密度(廢水樣品加標）精密度統(tǒng)計結果實驗室內相對標準偏差%實驗室間相序號化合物名稱加標濃度總均值重復性限r再現(xiàn)性限R對標準偏差ng/Lng/Lng/Lng/L%10.020.010.020.010.020.010.020.010.020.010.020.010.020.010.020.010.020.010.020.010.020.010.020.010.020.010.020.010.020.010.020.010.020.010.020.011.722.810.121.410.621.99.7119.810.222.310.420.610.217.89.0717.09.0217.58.2218.28.7117.610.521.99.8921.69.4717.310.721.69.2518.810.221.010.622.26.3～11.212.2～18.54.9～10.78.3～22.85.2～10.77.2～17.56.3～9.910.015.09.07.219.767.019.726.988.376.5012.06.248.355.089.794.627.895.216.464.969.196.169.315.1410.35.4510.45.809.585.977.016.447.884.498.296.668.196.458.197.219.767.0112.77.248.636.8313.07.079.646.9611.65.869.275.467.305.479.197.279.816.3010.36.341