DB62T 4031-2019 馬鈴薯黑痣病抗性室內鑒定技術規(guī)程

馬鈴薯黑痣病抗性室內鑒定技術規(guī)程2019-09-30實施2019-09-30實施甘肅省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I本標準按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標準由甘肅省農業(yè)農村廳提出并監(jiān)督實施。本標準由甘肅省糧食作物栽培標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：定西市植保植檢站、定西市種子管理站、甘肅省農業(yè)科學院植物保護研究所、蘭州市農業(yè)科技研究推廣中心、岷縣農業(yè)技術推廣站。本標準主要起草人：陳愛昌、席旭東、魏周全、李繼平、劉小娟、李錦龍、牛旭東、袁保東、張廷義、韓相鵬、何克菊、李燕芳、李建德、鄧成貴。1本標準規(guī)定了馬鈴薯黑痣病抗性室內鑒定方法和評價方法。本標準適用于馬鈴薯黑痣病抗性室內鑒定及抗性評價。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB18133馬鈴薯種薯3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。馬鈴薯黑痣病由立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)所致為害幼芽、莖基部及塊莖，幼芽染病有的出土前腐爛形成芽腐，造成缺苗。出土后染病初期植株下部葉子發(fā)黃，莖基形成褐色凹陷斑。塊莖上生出大小不等形狀各異的塊狀或片狀、散生或聚生的小菌核，重病株可形成立枯或頂部萎蔫或葉片卷曲。4試劑與耗材4.1PSA培養(yǎng)液馬鈴薯去皮切片，稱取馬鈴薯200g,瓊脂20g,蔗糖20g,蒸餾水定容止1000mL,煮沸10min～20min,用紗布過濾，補加蒸餾水至1000mL,加入乳糖20g,溶化后于121℃高壓滅菌20min。4.2PDA培養(yǎng)基馬鈴薯去皮切片，稱取200g,加1000mL蒸餾水，煮沸10min～20min,用紗布過濾，補加蒸餾水至1000mL,加20g瓊脂粉，加熱溶化后，再加入葡萄糖20g,攪拌均勻并溶化后，于121℃高壓滅菌20min。4.31%的次氯酸鈉(NaClO)溶液取1mL次氯酸鈉于99mL滅菌水中，搖勻。培養(yǎng)皿、錐形瓶、紗布、酒精燈、塑料花盆(直徑21cm、高13cm)等。2從馬鈴薯黑痣病發(fā)病薯塊用常規(guī)組織分離法分離黑痣病病原物(參見附錄A)。確認為立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)后取菌落末端菌絲于PSA培養(yǎng)基中培養(yǎng)純化，經柯赫氏(koch)法則驗證后，保存?zhèn)浞N在PSA平板上培養(yǎng)4d的待測菌株菌餅10片(直徑0.8將馬鈴薯黑痣病接種于PDA斜面培養(yǎng)基上，在20℃~25℃的恒溫箱中培養(yǎng)7d,置4℃~8℃冰箱內保存；或在斜面上加一層滅菌礦物油(超過斜面頂部1cm)后置冰箱冷藏空或室溫下保存。將馬鈴薯黑痣病菌接種于液體石蠟管，置2℃~8℃冰箱中保存。選取未感病的馬鈴薯種薯在直徑21cm,高13cm的塑料花盆中播種。播種基質為草炭、蛭石和菜田土(2:1:1)。經高溫蒸汽滅菌(134℃,30min)。在日光溫室里育苗，室內溫度白天為20℃~25℃,夜播種期將馬鈴薯種薯用1%NaClO溶液滅菌20min,單株接種量為6g,均勻混于花盆內。3期間鑒定室溫度控制在20℃~25℃范圍內。病情級別及其對應的癥狀描述見表1。病情級別1級3級5級病情指數(DI)按公式(1)計算。式中：s——各病情級別的代表數值；n——各病情級別的植株數；N——調查總植株數；S最高病情級別的代表數值。計算結果取3次重復平均值。依據鑒定材料的病情指數(DI)評價值確定其抗性水平，劃分標準見表2。4病情指數(DI)免疫(I)高抗(HR)中抗(MR)中感(MS)高感(HS)當感病對照材料達到其相應感病程度(DI>50),抗病對照材料與實際抗性程度相符，該批次抗黑5(資料性附錄)鑒定結果原始記載表鑒定結果記載表格式見圖A.1。編號品種/品質名稱重復區(qū)號病情級別平均病