輸血后丙型肝炎病毒感染的血清病毒定量研究

1、    輸血后丙型肝炎病毒感染的血清病毒定量研究         【摘要】目的研究血清丙型肝炎病毒(HCV)含量與HCV致病的關(guān)系及HCV含量與抗-HCV和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT )的相關(guān)性。方法以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法對(duì)HCV感染的受血及相關(guān)供血 系列血清進(jìn)行HCV RNA定量分析，同時(shí)檢測(cè)ALT與抗-HCV。結(jié)果致輸血后HCV感染的供血中，HCV RNA平均含量為108.6 拷貝/ L；抗-HCV及ALT的異常檢出率隨HCV RNA滴度升高而增加。結(jié)論低含量

2、HCV供血即可導(dǎo)致輸血后感染，病毒含量與抗-HCV(+)及ALT 水平有顯著正相關(guān)，采用ALT加抗-HCV聯(lián)合篩檢供血可明顯降低輸血后HCV感染。【關(guān)鍵詞】丙型肝炎病毒；供血者；丙型肝炎病毒定量；丙型肝炎病毒抗體Quantitative study of hepatitis C virus RNA in sera of patien ts with posttransfusion hepatitis C virus infection.WANG ZhimingTAN FumingCHEN Weihuaet al.（Department of Infectious Diseases, 260th

3、 Hospital of PLA, Hebei Shijiazhuang, 050041, China）【Abstract】ObjectiveTo study the relationship betw een the hepatitis C virus (HCV) RNA level the level of alanine aminotransferas e (ALT) as well as anti-HCV in the sera of HCV-infected blood recepients and t heir related blood donors. MethodsThe se

4、rum HCV RNA was detected by neverse transcripti on-polymetase chain reaction (RT-PCR) quantitatively and the levels of ALT and anti-HCV were simultaneously detected. ResultsIn the sera of donors which caused posttransfusion HCV in fection, the mean level of HCV RNA were 108.6 copies/L. The positive

5、rate of anti-HCV in serum was increased in the patients with higher HCV RNA level. T here was a strong correlaton between the HCV RNA level and ALT value. ConclusionThe results suggested that posttransfusion HCV infection could be caused by transfusing blood with low HCV RNA level and exclusion of d

6、o nated blood for elevated ALT or positive anti-HCV could reduce the incidence o f posttransfusion hepatitis C infection.【Key words】Hepatitis C virus; Blood donor; Quantity of hepatitis C virus RNA; Antibody to hepatitis C virus丙型肝炎病毒(HCV)是輸血后感染的主要病原。HCV在感染者血清中水平很低，尚無靈敏的HC V抗原檢測(cè)法。隨著HCV RNA定量檢測(cè)的開展，為研

7、究輸血后HCV感染的流行病學(xué)及臨床特點(diǎn) 提 供了新途徑。我們對(duì)輸血后HCV感染者及相關(guān)供血員連續(xù)隨訪5年，將采集血清統(tǒng)一檢測(cè)HCV RNA定量，并與其它指標(biāo)對(duì)比，分析臨床意義。材料與方法一、標(biāo)本采集對(duì)1992年確診的7例輸血后HCV感染者及5例相關(guān)供血員隨訪采血5年，采集的41份標(biāo)本于24 h 內(nèi)測(cè)丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，剩余血清存于低溫冰箱中，統(tǒng)一待檢其它項(xiàng)目。二、檢測(cè)方法(一) HCV RNA定性檢測(cè)方法為逆轉(zhuǎn)錄-套式-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-nested-PCR)，試劑由 華美生物公程公司生產(chǎn)提供。(二) HCV RNA定量檢測(cè)按照李伯安等2的方法進(jìn)行，由美國AcuGen公司提供試 劑，解放

8、軍第302醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室協(xié)助檢測(cè)，提供結(jié)果。(三) 抗-HCV檢測(cè)為酶聯(lián)免疫法，試劑由上海實(shí)業(yè)科華生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)提供。(四) ALT檢測(cè)采用賴氏法檢測(cè)。三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法2檢驗(yàn)，相關(guān)系數(shù)，t檢驗(yàn)。結(jié)果一、供血中HCV RNA含量與致病關(guān)系對(duì)引起輸血后HCV感染的10份供血測(cè)定HCV RNA含量，結(jié)果為107.9108.9 拷 貝/L，平均108.6拷貝/L。二、定性與定量檢測(cè)結(jié)果比較兩種檢測(cè)結(jié)果見表1。以定量實(shí)驗(yàn)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，定性實(shí)驗(yàn)的陽性漏檢率為0，陰性漏檢率為 22.2%，兩者相對(duì)符合率為92.9%。表1HCV RNA定性與定量結(jié)果比較HCV RNA(拷貝/L)<1071071081

9、09合計(jì)RT-nested-PCR定性(+)21416234Rt-nested-PCR定性(-)70007合計(jì)91416241     三、HCV RNA定量與抗-HCV結(jié)果比較檢測(cè)結(jié)果見表2。表2HCV RNA含量與抗-HCV檢出率的關(guān)系HCV RNA(拷貝/L)標(biāo)本數(shù)抗-HCV(+)檢出數(shù)陽性率(%)<1079222.210714964.3108181688.9合計(jì)412765.9     注：107組與<107組比較P<0.05，108組與<107組比較P<0.01 四、HCV

10、RNA含量與ALT異常的關(guān)系表3顯示，隨著血清HCV RNA滴度的增高，ALT的異常率及平均值也隨之增加。表3HCV RNA定量變化與ALT異常的關(guān)系HCV(拷貝/L)標(biāo)本數(shù)ALT異常例數(shù)%平均值(U/L)<1079333.357.010714750.0100.0108181372.2283.6     各組間比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 五、血清HCV RNA含量變化與ALT水平的相關(guān)性對(duì)12例供血及受血者的36份隨訪血清檢測(cè)表明，HCV RNA含量變化與ALT水平高低比較呈正相 關(guān)(r=0,52,t=3.79,P<0.001)，相關(guān)有非常顯著性，

11、見表4。表4隨訪血清HCV RNA含量與ALT值的比較編號(hào)第1年第2年第3年HAHAHA供血1<107.004<107.0010107.52602107.1262107.6188108.021793108.347108.7535108.70194107.121107.3020107.36265<107.007107.5512<107.00206<107.0010<107.0047108.7059受血7<107.0024107.1257108.452028108.62286107.7339<107.00239107.581107.6836108.5

12、117910108.17180107.13120108.711211107.078<107.0013107.301212108.3673108.6884109.6526     注：H代表HCV RNA(拷貝/L)，A代表ALT(U/L)，表中107.68的表達(dá)形式是根據(jù)對(duì)數(shù)公式N=10lgN計(jì)算出來的。例如檢查結(jié)果為4.79×107.00(拷貝/L)，將其中 系數(shù)4.79變換成10lgN形式，則4.79=10lg4.79，查對(duì)數(shù)表lg4.790.68，所以 原結(jié)果可寫為100.68×107.00=107.68 討論據(jù)史宣玲等1

13、報(bào)道，HCV的感染水平很低，感染人群血循環(huán)中HCV RNA含量波動(dòng)在107.0拷貝/L1012.5拷貝/L，本文研究結(jié)果提示，HCV感染的獻(xiàn)血及受血 者，病毒量在107.01010.9拷貝/L間，與文獻(xiàn)報(bào)道大致相同。我們對(duì)10例輸血后HCV感染的相關(guān)供血進(jìn)行HCV RNA定量分析，發(fā)現(xiàn)其滴度在107.91 08.9拷貝/L間，平均值為108.6拷貝/L，提示低含量的HCV RNA即能引起輸血后 HCV感染。由于定量檢測(cè)操作條件要求高，不加注意可使結(jié)果出現(xiàn)偏差。為慎重起見，我們對(duì)大部分標(biāo) 本進(jìn)行了2次定量分析，加以認(rèn)定，并與定性檢測(cè)結(jié)果相比較，兩者的相對(duì)符合率為92.9%， 與李伯安的結(jié)果類似2

14、。說明檢測(cè)結(jié)果有相對(duì)可信性。機(jī)體感染HCV后其血清一般在115個(gè)月內(nèi)產(chǎn)生抗-HCV。抗-HCV的產(chǎn)生是否與HCV RNA含量 有關(guān) ，本組標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果顯示，隨著病毒含量的增加，抗-HCV的陽性率也相應(yīng)提高?？梢酝茢?兩者呈正相關(guān)。國內(nèi)外均有報(bào)告3，急性丙肝抗-HCV陽性率較低，滴度也較低， 易轉(zhuǎn)陰。而慢性丙型肝炎抗-HCV陽性率高，且呈持續(xù)高滴度。對(duì)本組9例抗-HCV陽性(+)者 隨訪5年，結(jié)果無1例陰轉(zhuǎn)，說明他們處于持續(xù)感染狀態(tài)。經(jīng)檢測(cè)其抗-HCV滴度均高于陰性 對(duì)照值上限3倍以上，與HCV RNA高含量正好相對(duì)應(yīng)。HCV RNA含量與ALT水平是否正相關(guān)，文獻(xiàn)中報(bào)道是不一致的。本文41例檢

15、測(cè)表明，病毒含量 增加后，ALT的異常率及平均異常值均升高。經(jīng)相關(guān)系數(shù)顯著性處理后顯示，兩者間相關(guān)有 非常顯著性。由于ALT升高還可受合并HBV感染，飲酒，藥物等因素影響，故在今后的研究中 應(yīng)盡量排除這些因素干擾，使結(jié)論更加客觀。目前血液HCV的篩檢指標(biāo)主要是抗-HCV，定性或定量PCR法檢測(cè)HCV RNA雖較可靠，但操作復(fù) 雜，價(jià)格昂貴而不能作為普查手段。本研究印證了血清ALT水平與HCV RNA含量的正相關(guān)性， 為HCV感染的供血篩檢提供了參考。本組41例標(biāo)本若以定量結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，則有32例為HCV感染 ，其中抗-HCV的陽性檢出率為78.0%(25/32)，ALT異常的檢出率為62.6%(20/32)，兩者聯(lián)合 的檢出率為87.5%(28/32)。因此把ALT(>正常值)作為指標(biāo)與抗-HCV聯(lián)合篩檢可提高供血HCV 感染的檢出率，進(jìn)而有效地減少輸血后HCV感染。本課題受全軍95醫(yī)藥攻關(guān)課題基金資助(96L049)作者單位：王志明（050041河北省石家莊，解放軍第260醫(yī)院傳染科）譚復(fù)明（050041河北省石家莊，解放軍第260醫(yī)院傳染科）陳偉華（050041河北省石家莊，解放軍第260醫(yī)院傳染科）李明山（05004