EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用培訓(xùn)課件

EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用兒童EBV感染診治中存在的問題? EBV實驗室診斷方法的選擇和結(jié)果解讀存在誤區(qū)? IM的抗病毒治療較為混亂重癥EBV相關(guān)疾病（CAEBV、EBV-HLH）等診斷和治療缺乏經(jīng)驗2EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用Epstein–Barrvirus(EBV)?1964年發(fā)現(xiàn)，DNA病毒，

皰疹病毒?人群感染率高，終身潛伏感染，具有感染-潛伏-活化的特性?腫瘤相關(guān)病毒，每年EBV相關(guān)腫瘤死亡病例達15-20萬?與很多疾病相關(guān)，幾乎可引起所有臟器和組織的相關(guān)疾病?細胞免疫非常重要KhanGetal.InfectiousAgentsandCancer,2014,9:38.3EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用EB病毒持續(xù)感染示意圖? 原發(fā)感染后，EBV在人體B淋巴細胞建立潛伏感染，只表達潛伏抗原，受感染者成為終生病毒攜帶者? EBV健康攜帶者咽部不定時排毒?在機體免疫功能下降和某些因素觸發(fā)下，潛伏的EBV可以被再激活，引起病毒復(fù)制及臨床癥狀Rev.Med.Virol.2008;18:305–3194EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用EBV感染的流行病學(xué)? 在我國，EBV的原發(fā)感染的高峰年齡在兒童，10歲時90%以上血清陽性轉(zhuǎn)化0.200.60.4EBV血清抗體陽性轉(zhuǎn)化率10.80-3m≥10y3m-1y 1y-3y 3y-6y6y-10y年齡百分率CA-IgGNA-IgG

CA-IgM中華實驗和臨床病毒雜志，2008,22（1）：30-32北京兒童醫(yī)院資料5EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用傳染性單核細胞增多癥（Infectiousmononucleosis，IM）慢性活動性EB病毒感染（ChronicactiveEBVinfection，CAEBV）EB病毒相關(guān)性嗜血細胞綜合征（EBV-associatedhemophagocyticsyndrome,EBVAHS)? 伴性淋巴增殖綜合征（X-linkedlymphoproliferativesyndrom）鼻咽癌（Nasopharyngealcarcinoma）Burkitt’s淋巴瘤（Burkitt’slymphoma）何奇金淋巴瘤（Hodgkin’slymphoma）? 其他：腦炎，腎炎，間質(zhì)性肺炎，肝炎，多發(fā)性硬化…6EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用臨床實踐診斷EBV感染時需要回答的問題?是否感染EBV??EBV感染的時相？?是否EBV活動性感染？?組織或器官中EBV感染的細胞定位如何？7EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用EBV感染相關(guān)的實驗室指標(biāo)? 血常規(guī)：淋巴細胞比例＞50%（學(xué)齡以上兒童）? 嗜異凝集抗體? 異型淋巴細胞? EBV特異性抗體? 熒光定量PCR檢測EBV核酸? EBERs原位雜交實驗：EBV感染受累的組織學(xué)證據(jù)特異性指標(biāo)非特異性指標(biāo)8EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用實驗室指標(biāo)一：嗜異凝集抗體? 血清嗜異凝集抗體檢測也稱“Monospot”試驗，1932年引入臨床實踐診斷傳染性單核細胞增多癥該為IgM抗體，在病程第1～2周出現(xiàn)，持續(xù)約6個月在青少年原發(fā)性EBV感染中其陽性率可達80％-90％，約10％的青少年缺乏對嗜異性抗體的陽性反應(yīng)小于12歲者，EBV感染IM患者該試驗的陽性率為25%-50%JApplClinPediatr,2007,22(22)NEnglJMed.2010;362:1993-20009EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用實驗室指標(biāo)二：異型淋巴細胞? 外周血異型淋巴細胞比例≥10%1、在西方國家，其診斷IM的敏感性為75%，特異性為92%2、學(xué)齡前兒童異型淋巴細胞比例較低。外周血異型淋巴細胞比例≥10%的病例在學(xué)齡前兒童EBV-IM中只有41.8%；對于較大年齡兒童異型淋巴細胞的診斷意義更大NEnglJMed.2010;362:1993-2000WorldJPediatr,2011,7(1):45-4910EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用實驗室指標(biāo)三:EBV特異性抗體EBV-CA-IgM檢測1、近期EBV感染的指標(biāo)，廣泛應(yīng)用于臨床2、EBV感染的血清學(xué)反應(yīng)復(fù)雜多樣，有的病例抗EBV-CA-IgM產(chǎn)生延遲，有的持續(xù)缺失或長時間存在3、12%-17%大于16歲的青少年原發(fā)EBV感染后不能檢測到CA-IgM抗體，且4歲以下幼兒CA-IgM抗體水平低，持續(xù)時間短，易見假陰性結(jié)果GaoLiwei,etal.ChinJEvidBasedPediatr,2011,6(6):467-470.RobertsonP,JMedVirol,2003,70(4):617-62311EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用單份血清VCA-IgM在診斷

小年齡兒童原發(fā)性EBV感染IM的局限性PediatricsInternational(2010)52,536–54012EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用原發(fā)EBV感染的體液免疫? 原發(fā)性EBV感染過程中首先產(chǎn)生針對衣殼抗原（capsidantigen，CA）IgG和IgM（抗CA-IgG/IgM）?在急性感染的晚期，抗早期抗原（earlyangtigen，EA）抗體出現(xiàn)? 在恢復(fù)期晚期，抗核抗原（nuclearantigen，NA）抗體產(chǎn)生抗CA-IgG和抗NA-IgG可持續(xù)終身JMD,2008,10(4):279-292不同時間段的抗體譜不同13EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用5%的EBV新近感染抗CA抗（IgM）陰性在罕見的病例中抗CA抗體(IgM)會持續(xù)陽性20-30%的EBV新近感染抗EA抗體（IgG）陰性抗EBNA抗體(IgG)陰性體液免疫的特殊情況14EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用實驗室指標(biāo)四：EBV病毒核酸檢測? Real-timePCR是目前最主要的監(jiān)測EBV載量的方法，可以指導(dǎo)治療和判斷療效，如PTLD/EBV-HLH/CAEBV等? 樣本：血樣本（包括全血、單個核細胞、或血清/血漿），非鼻咽拭子或鼻咽吸取液，不同疾病所需的適宜樣本不同注意：Real-timePCR陽性，只能提示機體存在活動性EBV感染或病毒活動性復(fù)制，不能鑒別是原發(fā)EBV感染還是既往EBV感染再激活，如淋巴瘤患者、免疫抑制患者、HIV感染者，因此，單純Real-timePCR陽性在IM診斷中價值有限15EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用實驗室指標(biāo)五：EBERS原位雜交試驗?EBV潛伏感染的細胞含有大量的EBER1/EBER2（EBERS）轉(zhuǎn)錄子?每個EBV潛伏感染的細胞含有大約106拷貝EBERS，被認為EBV潛伏感染的最好標(biāo)志物?原位雜交試驗檢測腫瘤細胞中EBERS是診斷腫瘤是否EBV相關(guān)的金標(biāo)準(zhǔn)16EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用陽性對照陰性對照EBV-EBERS陽性樣本陰性樣本17EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用不同EB病毒相關(guān)腫瘤中EBERS的檢出情況Rev.Med.Virol.2008;18:305–319.18EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用?是否感染EBV??EBV感染的時相？臨床實踐需要回答的問題（一）EBV血清抗體譜檢測19EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用HHBalfour,etal.Clinical&TranslationalImmunology,2015,4(2),e33.EBV抗體譜檢測，可以初步判斷是否感染EBV，以及感染的大致時間

如EBNA-IgG陽性，提示機體至少已感染EBV近2-3個月20EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用免疫功能正?；颊逧BV血清學(xué)特點抗EBV抗體VCA-IgMVCA-IgGEBNA-IgG解釋陰性陰性陰性無免疫反應(yīng)陽性陰性陰性急性感染或非特異反應(yīng)1陽性陽性陰性急性感染陰性陽性陽性既往感染陰性陽性陰性急性感染或既往感染1陽性陽性陽性原發(fā)感染晚期或再激活1陰性陰性陽性既往感染或非特異反應(yīng)注：1有待進一步確定WorldJVirol,2012,1(1):31-43.21EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用EBV-HLH患者的EBV抗體檢測ChinMedJ.2010;123(11):1426-1430.23EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用臨床實踐需要回答的問題（二）?機體是否存在EBV活動性感染？——EBV核酸檢測?何種標(biāo)本送檢？血清/血漿？全血？PBMC?——不同疾病需要的送檢標(biāo)本不同24EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用JMolDiagn.2008,10(4):279-92.EBV既往感染的健康人群，血清/低血漿中檢測不到EBV-DNA；但全血/PBMC標(biāo)本中常有拷貝的EBV-DNA25EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用Rev.Med.Virol.2008;18:305–319不同EBV相關(guān)疾病中，EBV核酸在外周血中存在區(qū)間不同26EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用ExpertRev.Clin.Immunol.2013,9(2),139–151.27EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用?IM患者外周血中EBV載量在2周內(nèi)達到峰值，至病程14天，多數(shù)IM患者血清中已檢測不到病毒核酸，病程22天后，所有IM血清中均檢測不到EBV核酸JMedVirol,2003,70(4):617-623? 但外周血單個核細胞中EBV核酸陽性可持續(xù)6個月以上，需要1年或更長時間達到EBV健康攜帶者的全血EBV-DNA水平（1-50拷貝EBV-DNA/106個WBC）JInfectDis,2013,207:80-88JMolDiagn.2008,10(4):279-92? 標(biāo)本：血清或血漿，不建議使用全血或PBMC標(biāo)本? 重癥病例監(jiān)測EBV載量有助于鑒別EBV-HLH28EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用? 絕大多數(shù)CAEBV患者PBMC中EBV-DNA水平高于102.5拷貝/

gDNA，CAEBV患者血漿/血清中EBV-DNA水平與病情嚴(yán)重程度和預(yù)后有關(guān)? CAEBV患者血漿和PBMC中EBV核酸載量存線性關(guān)系CAEBV患者EBV-DNA檢測Blood,2001,98:280-28629EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用? EBV-HLH患者外周血單個核細胞（PBMC）和血漿/血清均含有很高的EBV-DNA載量，監(jiān)測EBV-HLH患者血清中EBV-DNA載量有助于評估療效EBV-HLH患者EBV-DNA檢測Leukemia&Lymphoma,2002,43:173-17930EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用臨床實踐需要回答的問題（三）?組織或器官中EBV感染的細胞定位如何？——EBERs檢測31EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用JHepatol.2006,44(5):879-85.EBER–RISH顯示，EBERs陽性的細胞為浸潤的淋巴細胞（如箭頭所示），而肝細胞、膽管上皮細胞和內(nèi)皮細胞中未見EBV相關(guān)肝損害中，EBV感染的細胞為淋巴細胞32EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用臨床實踐診斷EBV感染時需要回答的問題?是否感染EBV??EBV感染的時相？?是否EBV活動性感染？?組織或器官中EBV感染的細胞定位如何？33EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用小 結(jié)?外周血異型淋巴細胞比例及嗜異凝集抗體對于我國兒童IM診斷的敏感性較低?EBV血清學(xué)抗體譜檢測比單純IgM檢測具有更大的診斷價值?EBV-DNA定量檢測有助于判斷是否存在活動性感染和指導(dǎo)治療,不同疾病所適用的標(biāo)本不同?EBERS是器官組織EBV感染細胞定位的金標(biāo)準(zhǔn)34EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用35EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用兒童EBV感染診治中存在的問題? EBV實驗室診斷方法的選擇和結(jié)果解讀存在誤區(qū)? IM的抗病毒治療較為混亂重癥EBV相關(guān)疾?。–AEBV、EBV-HLH）等診斷和治療缺乏經(jīng)驗37EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用Epstein–Barrvirus(EBV)?1964年發(fā)現(xiàn)，DNA病毒，

皰疹病毒?人群感染率高，終身潛伏感染，具有感染-潛伏-活化的特性?腫瘤相關(guān)病毒，每年EBV相關(guān)腫瘤死亡病例達15-20萬?與很多疾病相關(guān)，幾乎可引起所有臟器和組織的相關(guān)疾病?細胞免疫非常重要KhanGetal.InfectiousAgentsandCancer,2014,9:38.38EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用EB病毒持續(xù)感染示意圖? 原發(fā)感染后，EBV在人體B淋巴細胞建立潛伏感染，只表達潛伏抗原，受感染者成為終生病毒攜帶者? EBV健康攜帶者咽部不定時排毒?在機體免疫功能下降和某些因素觸發(fā)下，潛伏的EBV可以被再激活，引起病毒復(fù)制及臨床癥狀Rev.Med.Virol.2008;18:305–31939EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用EBV感染的流行病學(xué)? 在我國，EBV的原發(fā)感染的高峰年齡在兒童，10歲時90%以上血清陽性轉(zhuǎn)化0.200.60.4EBV血清抗體陽性轉(zhuǎn)化率10.80-3m≥10y3m-1y 1y-3y 3y-6y6y-10y年齡百分率CA-IgGNA-IgG

CA-IgM中華實驗和臨床病毒雜志，2008,22（1）：30-32北京兒童醫(yī)院資料40EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用傳染性單核細胞增多癥（Infectiousmononucleosis，IM）慢性活動性EB病毒感染（ChronicactiveEBVinfection，CAEBV）EB病毒相關(guān)性嗜血細胞綜合征（EBV-associatedhemophagocyticsyndrome,EBVAHS)? 伴性淋巴增殖綜合征（X-linkedlymphoproliferativesyndrom）鼻咽癌（Nasopharyngealcarcinoma）Burkitt’s淋巴瘤（Burkitt’slymphoma）何奇金淋巴瘤（Hodgkin’slymphoma）? 其他：腦炎，腎炎，間質(zhì)性肺炎，肝炎，多發(fā)性硬化…41EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用臨床實踐診斷EBV感染時需要回答的問題?是否感染EBV??EBV感染的時相？?是否EBV活動性感染？?組織或器官中EBV感染的細胞定位如何？42EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用EBV感染相關(guān)的實驗室指標(biāo)? 血常規(guī)：淋巴細胞比例＞50%（學(xué)齡以上兒童）? 嗜異凝集抗體? 異型淋巴細胞? EBV特異性抗體? 熒光定量PCR檢測EBV核酸? EBERs原位雜交實驗：EBV感染受累的組織學(xué)證據(jù)特異性指標(biāo)非特異性指標(biāo)43EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用實驗室指標(biāo)一：嗜異凝集抗體? 血清嗜異凝集抗體檢測也稱“Monospot”試驗，1932年引入臨床實踐診斷傳染性單核細胞增多癥該為IgM抗體，在病程第1～2周出現(xiàn)，持續(xù)約6個月在青少年原發(fā)性EBV感染中其陽性率可達80％-90％，約10％的青少年缺乏對嗜異性抗體的陽性反應(yīng)小于12歲者，EBV感染IM患者該試驗的陽性率為25%-50%JApplClinPediatr,2007,22(22)NEnglJMed.2010;362:1993-200044EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用實驗室指標(biāo)二：異型淋巴細胞? 外周血異型淋巴細胞比例≥10%1、在西方國家，其診斷IM的敏感性為75%，特異性為92%2、學(xué)齡前兒童異型淋巴細胞比例較低。外周血異型淋巴細胞比例≥10%的病例在學(xué)齡前兒童EBV-IM中只有41.8%；對于較大年齡兒童異型淋巴細胞的診斷意義更大NEnglJMed.2010;362:1993-2000WorldJPediatr,2011,7(1):45-4945EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用實驗室指標(biāo)三:EBV特異性抗體EBV-CA-IgM檢測1、近期EBV感染的指標(biāo)，廣泛應(yīng)用于臨床2、EBV感染的血清學(xué)反應(yīng)復(fù)雜多樣，有的病例抗EBV-CA-IgM產(chǎn)生延遲，有的持續(xù)缺失或長時間存在3、12%-17%大于16歲的青少年原發(fā)EBV感染后不能檢測到CA-IgM抗體，且4歲以下幼兒CA-IgM抗體水平低，持續(xù)時間短，易見假陰性結(jié)果GaoLiwei,etal.ChinJEvidBasedPediatr,2011,6(6):467-470.RobertsonP,JMedVirol,2003,70(4):617-62346EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用單份血清VCA-IgM在診斷

小年齡兒童原發(fā)性EBV感染IM的局限性PediatricsInternational(2010)52,536–54047EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用原發(fā)EBV感染的體液免疫? 原發(fā)性EBV感染過程中首先產(chǎn)生針對衣殼抗原（capsidantigen，CA）IgG和IgM（抗CA-IgG/IgM）?在急性感染的晚期，抗早期抗原（earlyangtigen，EA）抗體出現(xiàn)? 在恢復(fù)期晚期，抗核抗原（nuclearantigen，NA）抗體產(chǎn)生抗CA-IgG和抗NA-IgG可持續(xù)終身JMD,2008,10(4):279-292不同時間段的抗體譜不同48EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用5%的EBV新近感染抗CA抗（IgM）陰性在罕見的病例中抗CA抗體(IgM)會持續(xù)陽性20-30%的EBV新近感染抗EA抗體（IgG）陰性抗EBNA抗體(IgG)陰性體液免疫的特殊情況49EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用實驗室指標(biāo)四：EBV病毒核酸檢測? Real-timePCR是目前最主要的監(jiān)測EBV載量的方法，可以指導(dǎo)治療和判斷療效，如PTLD/EBV-HLH/CAEBV等? 樣本：血樣本（包括全血、單個核細胞、或血清/血漿），非鼻咽拭子或鼻咽吸取液，不同疾病所需的適宜樣本不同注意：Real-timePCR陽性，只能提示機體存在活動性EBV感染或病毒活動性復(fù)制，不能鑒別是原發(fā)EBV感染還是既往EBV感染再激活，如淋巴瘤患者、免疫抑制患者、HIV感染者，因此，單純Real-timePCR陽性在IM診斷中價值有限50EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用實驗室指標(biāo)五：EBERS原位雜交試驗?EBV潛伏感染的細胞含有大量的EBER1/EBER2（EBERS）轉(zhuǎn)錄子?每個EBV潛伏感染的細胞含有大約106拷貝EBERS，被認為EBV潛伏感染的最好標(biāo)志物?原位雜交試驗檢測腫瘤細胞中EBERS是診斷腫瘤是否EBV相關(guān)的金標(biāo)準(zhǔn)51EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用陽性對照陰性對照EBV-EBERS陽性樣本陰性樣本52EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用不同EB病毒相關(guān)腫瘤中EBERS的檢出情況Rev.Med.Virol.2008;18:305–319.53EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用?是否感染EBV??EBV感染的時相？臨床實踐需要回答的問題（一）EBV血清抗體譜檢測54EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用HHBalfour,etal.Clinical&TranslationalImmunology,2015,4(2),e33.EBV抗體譜檢測，可以初步判斷是否感染EBV，以及感染的大致時間

如EBNA-IgG陽性，提示機體至少已感染EBV近2-3個月55EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用免疫功能正?；颊逧BV血清學(xué)特點抗EBV抗體VCA-IgMVCA-IgGEBNA-IgG解釋陰性陰性陰性無免疫反應(yīng)陽性陰性陰性急性感染或非特異反應(yīng)1陽性陽性陰性急性感染陰性陽性陽性既往感染陰性陽性陰性急性感染或既往感染1陽性陽性陽性原發(fā)感染晚期或再激活1陰性陰性陽性既往感染或非特異反應(yīng)注：1有待進一步確定WorldJVirol,2012,1(1):31-43.56EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用EBV-HLH患者的EBV抗體檢測ChinMedJ.2010;123(11):1426-1430.58EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用臨床實踐需要回答的問題（二）?機體是否存在EBV活動性感染？——EBV核酸檢測?何種標(biāo)本送檢？血清/血漿？全血？PBMC?——不同疾病需要的送檢標(biāo)本不同59EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用JMolDiagn.2008,10(4):279-92.EBV既往感染的健康人群，血清/低血漿中檢測不到EBV-DNA；但全血/PBMC標(biāo)本中常有拷貝的EBV-DNA60EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用Rev.Med.Virol.2008;18:305–319不同EBV相關(guān)疾病中，EBV核酸在外周血中存在區(qū)間不同61EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用ExpertRev.Clin.Immunol.2013,9(2),139–151.62EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運用?IM患者外周血中EBV載量在2周內(nèi)達到峰值，至病程14天，多數(shù)IM患者血清中已檢測不到病毒核酸，病程22天后，所有IM血清中均檢測不到EBV核酸JMedVirol,2003,70(4):617-623? 但外周血單個核細胞中