T-CIRA 59-2023 白紋伊蚊雄蚊規(guī)模化生產(chǎn)技術(shù)要求

白紋伊蚊雄蚊規(guī)模化生產(chǎn)技術(shù)要求Technicalrequirementsformass-rearingofAedesalbopictusmalemosquitoes2023-12-28發(fā)布2024-02-01實(shí)施IT/CIRA59—2023 Ⅲ 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定 14蚊品系建立 25蚊卵規(guī)?；趸?26幼蟲規(guī)模化飼養(yǎng) 27化蛹及蛹幼分離 28蚊蛹雌雄分離 29雄蚊羽化與喂食 310關(guān)鍵指標(biāo) 311注意事項 3附錄A(資料性)白紋伊蚊幼蟲飼養(yǎng)每日投食參考量 4附錄B(資料性)關(guān)鍵指標(biāo)的計算方法 5Ⅲ本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由中國同位素與輻射行業(yè)協(xié)會提出并歸口。本文件起草單位：中山大學(xué)、中大核昆生物技術(shù)(東莞)有限公司。本文件主要起草人：張東京、鄭小英、吳忠道、潘文杰、孫艷、何少斌。1T/CIRA59—2023白紋伊蚊雄蚊規(guī)?；a(chǎn)技術(shù)要求1范圍本文件規(guī)定了白紋伊蚊(Aedesalbopictus)雄蚊規(guī)模化生產(chǎn)技術(shù)要求，包括蚊品系建立、蚊卵規(guī)?；趸?、幼蟲規(guī)模化飼養(yǎng)、化蛹及蛹幼分離、蚊蛹雌雄分離、雄蚊羽化與喂食、關(guān)鍵指標(biāo)等。本文件適用于在工廠條件下規(guī)?；a(chǎn)白紋伊蚊雄蚊。對規(guī)模化生產(chǎn)埃及伊蚊(Aedesaegypti)雄蚊和致倦庫蚊(Culexquinquefasciatus)雄蚊，參照使用。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。NY/T1964.3—2010農(nóng)藥登記用衛(wèi)生殺蟲劑室內(nèi)試驗(yàn)試蟲養(yǎng)殖方法第3部分：白紋伊蚊3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。白紋伊蚊Aedesalbopictus孵化率hatchrate孵化出幼蟲的數(shù)量與孵化蚊卵初始總數(shù)量的比值。蚊蛹雌雄分離sexseparat利用雌、雄蚊蛹的體形特征對雌蛹、雄蛹進(jìn)行分離。蚊蛹雌雄分離器pupalsexsorter利用兩塊大小一致的分離玻璃板并排放置，之間形成一個距離可調(diào)的間距，該間距與雌蛹、雄蛹的在30min內(nèi)自由飛離直徑12cm、高度60cm測試筒的樣品雄蚊數(shù)量占測試蚊蟲總量的比值?；齑坡蔲emalecontaminationrate蚊蛹雌雄分離后，羽化雄蚊樣品中雌蚊所占的比值。24蚊品系建立4.1從野外采集蚊幼蟲，實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)至成蚊，經(jīng)形態(tài)學(xué)與基因型(線粒體細(xì)胞色素氧化酶I基因)鑒定4.2蚊品系應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室穩(wěn)定傳代6代以上，所產(chǎn)蚊卵轉(zhuǎn)移至工廠進(jìn)行規(guī)模化孵化。5蚊卵規(guī)?；趸?.1.2配制0.09%酵母蛋白胨溶液，在(28±2)℃靜置發(fā)酵24h,得到蚊卵孵化液。5.2確定孵化率5.2.1稱取10mg蚊卵(1mg約有131個蚊卵)于15mL的離心管中，加入8mL蚊卵孵化液，放置在(29±1)℃的恒溫培養(yǎng)箱中孵化1.5h。5.2.2將離心管從恒溫培養(yǎng)箱取出轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，人工計數(shù)新孵化出的幼蟲，按照孵化出的幼蟲數(shù)量與蚊卵數(shù)量的比值，計算每管的孵化率。5.3.1根據(jù)幼蟲飼養(yǎng)盤的表面積與孵化率之積計算所需的蚊卵質(zhì)量，控制幼蟲密度(2～3)條/cm2。5.3.2將稱重后蚊卵轉(zhuǎn)移到離心管中，加入孵化液，然后將管放置在恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行孵化。6幼蟲規(guī)?；曫B(yǎng)6.1在幼蟲飼養(yǎng)盤中加入去氯水(自來水，放置12h~16h后使用),水深約1.3cm～1.5cm。6.2將孵化出的幼蟲轉(zhuǎn)移至幼蟲飼養(yǎng)盤，幼蟲飼養(yǎng)盤放置在幼蟲飼養(yǎng)架上，每千條幼蟲飼養(yǎng)每日投食參考量見附錄A。6.3幼蟲飼養(yǎng)條件設(shè)定溫度(27±2)℃,相對濕度(75±10)%,光照周期12L:12D(L表示光照，D表示黑暗)。7化蛹及蛹幼分離7.1以蚊卵孵化當(dāng)天作為第1天，飼養(yǎng)至第8天左右，或觀察約50%幼蟲形成蚊蛹時，可開始蛹幼分離。7.2將幼蟲飼養(yǎng)盤蚊蛹、幼蟲和飼養(yǎng)水倒經(jīng)60目的過濾網(wǎng)篩，收集蚊蛹及幼蟲。7.3將蚊蛹及幼蟲轉(zhuǎn)移至含有15%鹽水(氯化鈉)溶液中，浸泡1h至幼蟲全部死亡并沉底。7.4收集上層的蚊蛹，轉(zhuǎn)移至干凈8蚊蛹雌雄分離8.1根據(jù)雌雄蚊蛹的大小差異利用雌雄分離器進(jìn)行分離。8.2雄蛹平均獲得率，即實(shí)際獲得的雄蛹數(shù)量與理論雄蛹數(shù)量的比值應(yīng)≥65%。3T/CIRA59—20238.3用適宜的容器收集分離后的雄蛹，放入羽化籠中。9雄蚊羽化與喂食9.1把羽化籠轉(zhuǎn)移至溫度(26±2)℃,相對濕度(75±10)%的羽化間。9.2約24h后，在羽化籠上放置經(jīng)10%葡萄糖溶液浸泡的棉球，供羽化的雄蚊吸食。9.3雄蚊平均羽化率，即經(jīng)雌雄分離后，雄蛹能夠羽化為雄蚊數(shù)量與測試雄蛹數(shù)量的比值應(yīng)≥80%。9.4約48h,將收集容器從羽化籠中取出，存余的1日齡～2日齡雄蚊在羽化籠中繼續(xù)飼養(yǎng)24h。10關(guān)鍵指標(biāo)規(guī)?；a(chǎn)的產(chǎn)能應(yīng)具有每天生產(chǎn)不低于50萬只雄蚊的能力。單只雄蚊平均質(zhì)量應(yīng)達(dá)到1.0mg~1.4mg,計算方法見附錄B的B.1。10.3飛行率飛離測試筒的樣品雄蚊數(shù)量占測試雄蚊數(shù)量的比值應(yīng)≥85%,計算方法見B.2。10.4混雌率羽化雄蚊樣品中雌蚊所占的比值應(yīng)≤0.3%,計算方法見B.3。11注意事項11.1幼蟲飼料可用魚飼料等進(jìn)行飼養(yǎng)，蛋白質(zhì)含量應(yīng)達(dá)到20%～40%。11.2蚊蟲規(guī)?；a(chǎn)車間應(yīng)防止蜘蛛、螞蟻、壁虎等天敵進(jìn)入，防止蚊蟲逃逸。11.3生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)按照生物安全和環(huán)保要求進(jìn)行。11.4操作人員應(yīng)遵守工廠安全生產(chǎn)制度，進(jìn)入車間應(yīng)做好防護(hù)。4(資料性)白紋伊蚊幼蟲飼養(yǎng)每日投食參考量白紋伊蚊幼蟲飼養(yǎng)每日投食參考量見表A.1。表A.1白紋伊蚊幼蟲飼養(yǎng)每日投食參考量天數(shù)/d1234567食物量/g注：該投食量是根據(jù)每千條幼蟲計算所得。5T/CIRA59—2023(資料性)關(guān)鍵指標(biāo)的計算方法將9.4羽化籠中雄蚊，轉(zhuǎn)移至(10±2)℃的冷庫進(jìn)行凍麻。隨機(jī)挑選雄蚊并稱重，記錄總質(zhì)量M。然后將雄蚊轉(zhuǎn)移于-20℃冰箱，放置30min~60min直至雄蚊全部死亡，再進(jìn)行計數(shù)，記錄雄蚊數(shù)量n。單只雄蚊平均質(zhì)量m,按公式(B.1)計算：B.2飛行率將9.4羽化籠中雄蚊，轉(zhuǎn)移至(10±2)℃的冷庫進(jìn)行凍麻。隨機(jī)挑選部分雄蚊，記錄雄蚊總數(shù)N?。將雄蚊轉(zhuǎn)移至室溫，立即放在直徑12cm和高度60cm的測試筒底部。約30min,用蓋子蓋住測試筒，記錄仍停留在測試筒的雄蚊數(shù)量n1。雄蚊飛行率Fb(%),按公式(B.2)計算：