2025年上海市高考生物一模分類匯編：生物工程（含答案）

四，（2025松江一模）染料廢水的生物處理（26分）

活性黑5是一種低毒性，難褪色的含氮染料。欲利用生物酶處理染料廢水中的活性

黑5,具體操作流程如圖6o從染料廢水堆積池的污泥中獲得優(yōu)勢菌群，采用濃度梯度馴

化法,進(jìn)一步培養(yǎng)獲得具備強分解活性黑5能力的假單胞桿菌，并進(jìn)行基因表達(dá)分析。

污泥稀釋液

確定高表達(dá)的分解活

性黑5的氧化還原酶

BVU5蛋白

培養(yǎng)基I培養(yǎng)基U

多次轉(zhuǎn)接并逐漸提高

（培養(yǎng)基I和H的成分相同）

培養(yǎng)液中活性黑5濃度

圖6

24.（2分）培養(yǎng)基I中，除了活性黑5以外，還需添加的成分是。（多選）

A.葡萄糖B.抗生素C.水D.瓊脂

25.（2分）培養(yǎng)基I從用途上屬于。（編號選填）

①固體培養(yǎng)基②液體培養(yǎng)基③通用培養(yǎng)基

④選擇培養(yǎng)基⑤鑒別培養(yǎng)基

26.（2分）將細(xì)菌從培養(yǎng)基I轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基II的目的是。

27.（2分）濃度梯度馴化過程中，培養(yǎng)液中可能出現(xiàn)的變化有。（多選）

A.假單胞桿菌中BVU5蛋白的含量B.假單胞桿菌對活性黑5的分解速率

C.假單胞桿菌的菌落數(shù)目D.假單胞桿菌中BVU5蛋白的空間結(jié)構(gòu)

28.（2分）假單胞桿菌中,BVU5蛋白分解活性黑5的場所最可能為。（單選）

A.擬核B.細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)C.溶酶體D.核糖體

29.（2分）據(jù)圖6和所學(xué)知識推測,馴化后的假單胞桿菌增強了BVU5基因的。（多

選）

A.復(fù)制B.轉(zhuǎn)錄C.翻譯D.逆轉(zhuǎn)錄

科研人員為了實現(xiàn)在大腸桿菌中大量表達(dá)外源BVU5蛋白,首先需要利用PCR技術(shù)

獲得3VU5編碼基因。該基因編碼鏈?zhǔn)孜蔡幐?0個核甘酸的序列及相關(guān)信息如圖7o

5'-ATGTCGAGCAACTTCCTCAA……ACGTGGTCATCGACTACTAA-3'

起始密碼子：AUGAfcol識別序列：5'-CCATGG-3'

終止密碼子：UAA、UAG、UGASa/I識別序列：5'-GTCGAC-3'

圖7

30.（2分）已知基因編碼鏈總長為1098個核甘酸，據(jù)圖7及所學(xué)知識分析該基因編碼

的BVU5蛋白的氨基酸數(shù)目為=（編號選填）

①365②366③1095@1098⑤3285@3294

31.（4分）若要在基因的前后位置，分別添加Ncol及Sall限制性內(nèi)切核酸酶識別序列，并大

量擴(kuò)增出BVU5基因，則PCR實驗中所需的引物序列為0

（按方向填空,引物長度應(yīng)為26個核甘酸）

32.（3分）在利用基因工程表達(dá)BVU5蛋白的過程中,PCR實驗后應(yīng)進(jìn)行的步驟依次是

（選擇編號并排序）

①篩選和鑒定含BVU5基因的大腸桿菌②從細(xì)菌中提取DNA

③DNA連接酶拼接DNA片段④限制性內(nèi)切核酸酶切割

⑤PCR產(chǎn)物的凝膠電泳鑒定⑥BVU5基因?qū)胧荏w細(xì)胞

33.（2分）若想進(jìn)一步改良BVU5蛋白，但其結(jié)構(gòu)未知,欲通過蛋白質(zhì)工程迅速獲得BVU5蛋

白突變株，應(yīng)選用的策略是0（單選）

A.定點突變直接改變氨基酸序列B.定點突變直接改變基因序列

C.隨機突變直接改變氨基酸序列D.隨機突變直接改變基因序列

34.（3分）設(shè)計體外實驗，驗證BVU5蛋白催化反應(yīng)需要還原型輔酶,而非氧化型輔酶的輔

助。請選擇正確的編號補充表3信息。（編號選填）

表3

組別處理方式實驗結(jié)果（脫色率）

對照組(1)_____-

實驗組1⑵_____-

實驗組2⑶_____++++

注：代表脫色率低,“+”代表脫色率高

①最適溫度,pH②適宜濃度的BVU5蛋白

③活性黑5溶液④生理鹽水

⑤NADH或NADPH⑥NAD+或NADP+

四,印染廢水的生物處理（26分）

24.（2分）ACD25.（2分）④26.（2分）進(jìn)一步分離純化細(xì)菌

27.（2分）ABD28.（2分）B29.（2分）BC30.（2分）①

31.(4分)引物1：5'-CCATGGATGTCGAGCAACTTCCTCAA-3'

引物2：5'-GTCGACTTAGTAGTCGATGACCACGT-3'

32.（3分）⑤④③⑥①33.（2分）D34.（3分）①②③，①②③⑥，①②③⑤

四，（2025青浦一模）人鼠嵌合抗體的設(shè)計（25分）

人原癌基因erbB2編碼的pl85蛋白可存在于腫瘤細(xì)胞膜

上,e仍B2的過量表達(dá)與腫瘤細(xì)胞侵襲，轉(zhuǎn)移密切相關(guān),該過程中人體

自身免疫系統(tǒng)通常不會產(chǎn)生相應(yīng)抗體?？蒲腥藛T利用動物細(xì)胞融合

技術(shù)獲得相應(yīng)的鼠源單克隆抗體（圖7），以期治療腫瘤。

22.（2分）為獲得高度均一的抗體，需要先向小鼠體內(nèi)注射

o（單選）

A.e仍B2基因B.pl85蛋白注:抗體可變區(qū)為特異性結(jié)合抗原區(qū)

C.人腫瘤細(xì)胞D.鼠骨髓瘤細(xì)胞域，恒定區(qū)為氨基酸序列穩(wěn)定區(qū)域

23.（3分）為獲得鼠源單克隆抗體，請選擇正確的操作并排序。圖7

①促融②篩選③分離脾臟細(xì)胞

④細(xì)胞核移植⑤克隆培養(yǎng)

鼠源抗體的恒定區(qū)易被人體免疫系統(tǒng)識別而失去作用，科研人員研制人鼠嵌合抗體以期

降低免疫排斥，過程如圖8o圖中引物已按照退火時與模板鏈結(jié)合位置畫出，折線部分表示不

引物1SCaI

MboT然藍(lán)-

a鏈

b鏈Xba

融合基因終止子

引物2

步驟①

pBCI載體

重組pBCI載體

早理胚胎1步驟③

小鼠終止子

紅色熒光

受精卵

蛋白基因

代

胚

胎

孕

注：PI為山羊乳腺特異性表達(dá)啟動

發(fā)

母

育

鼠子,P2為四環(huán)素誘導(dǎo)啟動子,箭頭表示

變

子囊胚

轉(zhuǎn)錄方向,限制酶MboI,XbaI與Seal

化

宮

的識別序列均不相同

中

檢測乳汁中

LO抗體含量

早期胚胎2

與融合基因序列互補配對,轉(zhuǎn)錄時a鏈為編碼鏈。

24.（3分）根據(jù)以上信息和圖7推測融合基因應(yīng)包含o（多選）

A.人抗體可變區(qū)基因B.鼠抗體可變區(qū)基因C.人抗體恒定區(qū)基因D.鼠抗體恒定區(qū)

基因

25.（2分）下圖9為PCR擴(kuò)增融合基因時的參數(shù)設(shè)定。步驟丁稱為，步驟戊應(yīng)設(shè)定跳

轉(zhuǎn)到步驟—o

步驟甲步驟乙步驟丙步驟丁步驟戊步驟已

（起始變性）98℃56℃72℃72℃

\

\—

2min10s\圖9

/

7min

1

30s30s

26.（4分）為使融合基因正確連接到pBCI載體，圖8步驟①應(yīng)選用的限制酶為，引

物1折線部分為的識別序列。（編號選填）

①Mbol②Xbal③Seal

27.（2分）圖8步驟②常用的物理轉(zhuǎn)化方法為。加入四環(huán)素后選用發(fā)熒光

的受精卵用于后續(xù)操作。

28.（3分）關(guān)于圖8步驟③的相關(guān)敘述錯誤的有0（多選）

A.步驟③含體外受精，胚胎移植等操作

B.代孕母鼠需注射激素使之超數(shù)排卵

C.代孕母鼠子宮內(nèi)早期胚胎1為桑根胚

D.對早期胚胎2進(jìn)行胚胎分割，可提高轉(zhuǎn)基因小鼠數(shù)量

29.（2分）人鼠嵌合抗體的設(shè)計屬于o（編號選填）

①第二代基因工程②定點突變蛋白質(zhì)③定向進(jìn)化蛋白質(zhì)④設(shè)計制造全新蛋白

30.（4分）檢測小鼠乳汁中的人鼠嵌合抗體水平，發(fā)現(xiàn)其含量較低,結(jié)合圖8和所學(xué)知識推測

可能原因。（至少兩點）

四,人鼠嵌合抗體的設(shè)計（25分）

22.B（2分）23.③一①—②—⑤（3分）24.BC（3分）

25.聚合（1分），乙（1分）

26.②③（2分）②（2分）27.顯微注射法（1分）紅色（1分）

28.ABD（3分）29.①④（2分）

30.①山羊乳腺特異性表達(dá)啟動子在小鼠乳腺細(xì)胞中作用效果不理想，抗體表達(dá)量低,②融合

基因表達(dá)正常，但小鼠乳腺細(xì)胞無高效的針對其運輸及分泌機制,③融合基因被某些化學(xué)基團(tuán)

修飾，阻礙轉(zhuǎn)錄的發(fā)生,④融合基因正常轉(zhuǎn)錄，但融合基因mRNA因RNA干擾而被切割（每

點2分，其他合理答案酌情給分）

五，（2025寶山一模）小麥白粉病與生物工程（18分）

小麥白粉病是由白粉菌寄生引起的病害，為開展小麥抗白粉病研究，一般用離體葉片接種

法培養(yǎng)并保存白粉菌，包括配制培養(yǎng)基,消毒離體葉片，接種白粉菌，適宜條件培養(yǎng)等步驟。

29.（2分）據(jù)題意可知，配制的培養(yǎng)基應(yīng)是直接為（離體葉片/白粉菌）提供營

養(yǎng)物質(zhì)。

30.（3分）為確保獲得純種的白粉菌,需無菌操作的步驟有。（多選）

A.配制培養(yǎng)基

B.消毒離體葉片

C.接種白粉菌

D.適宜條件培養(yǎng)

31.（2分）若要探究適宜的培養(yǎng)條件,現(xiàn)設(shè)三種光照條件：無光照，光照12小時，光照16小時,

四種溫度條件：4℃,8℃,16℃,32℃,則實驗分組數(shù)為-（單選）

A.3組B.4組

C.7組D.12組

小麥因存在M基因易感白粉菌。gRNA和Cas9蛋白可以共同作用于DNA特定序列，

對其進(jìn)行剪切和修復(fù)，其中g(shù)RNA識別和剪切DNA,Cas9蛋白修復(fù)切口。科研人員將gRNA

和Cas9蛋白的基因?qū)氲叫←溨?，對M基因進(jìn)行改造，使其無法發(fā)揮作用。表達(dá)載體的構(gòu)建

及可能用到的限制性內(nèi)切核酸酶識別序列如圖9所示,啟動子是基因表達(dá)所必需。

SpelNtelSpelB臂1

,aRNyC啟動子1、卜啟動子2—Cas9一潮霉素抗性、

載體1載體2①5'......ACTAGT..…3,

匚氨葦青霉素抗性^----------卡那霉素抗性----------）

②5,......GGATCC.....3,

@5'……GCTAGC.....3,

「gRNA-啟動子1-啟動子2-Cas9-潮霉素抗性⑷5'……CCGG.....3'

最終載體

---------------------卡那霉素抗性-----------------）

圖9

32.（4分）據(jù)題意推測,gRNA,Cas9蛋白功能分別類似于,。（編號選

填）

①RNA聚合酶

②DNA連接酶

③DNA聚合酶

④限制性內(nèi)切核酸酶

33.（5分）在由載體1,載體2構(gòu)建最終載體時,所需使用的限制性內(nèi)切核酸酶的識別序列，最

有可能是圖9右側(cè)中的（圖9中編號選填），在最終載體上保留下來的酶切位點

有（編號選填）。

①5個②4個

③3個④2個

34.（2分）若要檢測M基因是否改造成功,可行的操作是o（單選）

A.用一定濃度的潮霉素溶液澆灌小麥

B.檢測小麥細(xì)胞中是否有Cas9蛋白

C.用白粉菌感染小麥植株

D.檢測小麥細(xì)胞中是否有啟動子1,2的序列

五，小麥白粉病與生物工程（18分）

29.（2分）離體葉片

30.（3分）ABCD

31.（2分）D

32.（4分）④②

33.（5分）①③③

34.（2分）C

五，（2025虹口一模）CAR-T細(xì)胞療法（19分）

腫瘤嚴(yán)重危害人類健康。為提高T淋巴細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷力,研究人員利用轉(zhuǎn)基因

技術(shù)在T淋巴細(xì)胞表面嵌合抗原受體（CAR），成功獲得CAR-T細(xì)胞,部分相關(guān)過程如圖所

示。其中，圖（b）中“十”表示促進(jìn)作用，“一”表示抑制作用,BCR為B淋巴細(xì)胞表面的抗原受

體,TCR為T淋巴細(xì)胞表面的抗原受體。

免疫細(xì)胞清除腫瘤細(xì)胞的部分過程

29.（3分）據(jù)圖及已學(xué)知識判斷，能發(fā)揮細(xì)胞免疫功能的是。（多選）

A.巨噬細(xì)胞B.B淋巴細(xì)胞

C.CAR-T細(xì)胞D.T淋巴細(xì)胞

30.（3分）CAR-T細(xì)胞表面的CAR主要由跨膜區(qū)，胞外區(qū)等部分組成，據(jù)圖推測，與天然的

T淋巴細(xì)胞相比,CAR-T細(xì)胞能高效殺滅腫瘤細(xì)胞的原因是它o（多選）

A.無需抗原呈遞細(xì)胞激活B.能釋放免疫活性物質(zhì)

C.能大量分泌特異性抗體D.能直接識別腫瘤抗原

31.（3分）腫瘤細(xì)胞會通過“免疫逃逸”機制，避開免疫系統(tǒng)的“監(jiān)視”，據(jù)圖及已學(xué)知識

推測,該機制可能包括腫瘤細(xì)胞的=（多選）

A.MHC表達(dá)量下降B.PD-1的數(shù)量增加

C.腫瘤抗原數(shù)量增加D.PD-L1的數(shù)量增加

臨床研究發(fā)現(xiàn)，快速增殖的腫瘤細(xì)胞會導(dǎo)致腎上腺素異常增多，抑制CAR-T細(xì)胞的功

能。2024年,研究人員利用RNA干擾（RNAi）技術(shù)影響CAR-T細(xì)胞表面腎上腺素受體相

關(guān)基因的表達(dá)，獲得改造后的CAR-T細(xì)胞.檢測相關(guān)細(xì)胞的指標(biāo)，如表所示。

每個細(xì)胞表面CFSE

分泌顆粒酶葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白含PD-1的

熒光強度

組另U

的細(xì)胞占比的相對表達(dá)量細(xì)胞占比

DayODay8

天然的T淋巴

1.00a0.015a0.21c1.10。0.12C

細(xì)胞組

未改造CAR-

b

0.98a0.016a0.43b1550.50a

T細(xì)胞組

改造后的

a

0.97a0.018a0.72a2110.18b

CAR-T細(xì)胞組

注：上述實驗僅在DayO加入等量CFSE,CFSE為活細(xì)胞熒光染料,可與質(zhì)膜表面蛋白結(jié)合，

是判斷細(xì)胞分裂能力的指標(biāo)之一,數(shù)字后小寫字母不同表示各組間的數(shù)據(jù)差異顯著。

32.（2分）據(jù)題干信息推測，腫瘤細(xì)胞快速增殖可能對人體造成的影響有o（多選）

A.心律失常B.體溫降低C.血糖偏高D,體重增

加

33.（3分）據(jù)表，圖推測,與未改造的CAR-T細(xì)胞相比,改造后的CAR-T細(xì)胞具有的優(yōu)勢可

能有。（編號選填）

①細(xì)胞分裂速率慢②NF-KB的功能強③細(xì)胞凋亡水平低④PI3K磷酸化水平低

34.（5分）據(jù)表及相關(guān)信息，對CAR-T細(xì)胞治療腫瘤的效果進(jìn)行估測，闡述分析過程—。

五,CAR-T細(xì)胞療法（19分）

29.ACD30.AD31.AD32.AC33.②③

34.無論是未改造還是改造的CAR-T,與天然T淋巴細(xì)胞相比，細(xì)胞分裂不受影響，分泌顆粒

酶細(xì)胞占比大，加大攻擊腫瘤細(xì)胞的力度;葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的數(shù)量增加，能為T細(xì)胞提供更多

能量來殺傷腫瘤細(xì)胞，且改造后的CAR-T細(xì)胞的上述優(yōu)勢不僅均比未改造的CAR-T細(xì)胞強,

而且兩種CAR-T細(xì)胞均提高了含PD-1的細(xì)胞占比，提高腫瘤逃逸的風(fēng)險但改造后的CAR-

T細(xì)胞腫瘤逃逸的風(fēng)險降低。

二，（2025楊浦一模）細(xì)胞器進(jìn)化理論指導(dǎo)光合酵母構(gòu)建（24分）

內(nèi)共生學(xué)說認(rèn)為，葉綠體的祖先可能是藍(lán)細(xì)菌，藍(lán)細(xì)菌被原始真核細(xì)胞攝入后在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)

繁殖，并在共生過程中逐漸演化為葉綠體。光合酵母的成功構(gòu)建為這一學(xué)說提供了支持。

8.（2分）大量證據(jù)表明，內(nèi)共生現(xiàn)象普遍存在。下列觀察中，可作為支持葉綠體內(nèi)共生證據(jù)

的有。（多選）

A.葉綠體和藍(lán)細(xì)菌都含有生物膜

B.葉綠體內(nèi)的DNA為環(huán)狀分子，與原核生物相似

C.葉綠體內(nèi)膜與細(xì)菌質(zhì)膜的蛋白質(zhì)與脂質(zhì)比值相似

D.葉綠體的蛋白質(zhì)合成機制更類似于細(xì)菌,而非真核生物

9.（2分）葉綠體已失去了其祖先藍(lán)細(xì)菌某些功能特性?；谶M(jìn)化理論分析，藍(lán)細(xì)菌的基

因組在共生后發(fā)生的變化是o（編號選填）

①淘汰全部不利于共生的基因

②有利于共生的基因頻率不斷提高

③朝著有利于共生的方向發(fā)生基因突變

為支持內(nèi)共生學(xué)說，研究者在酵母細(xì)胞內(nèi)構(gòu)建了光合藍(lán)細(xì)菌內(nèi)共生體。首先，基于ZS質(zhì)

粒構(gòu)建工程藍(lán)細(xì)菌——SynJEC菌株，過程如圖所示。重組ZS質(zhì)粒進(jìn)入籃細(xì)菌后，其內(nèi)的整

合區(qū)域會以一定的頻率插入藍(lán)細(xì)菌擬核DNA中,并隨著藍(lán)細(xì)菌DNA的復(fù)制而復(fù)制。

目的基因1目的基因2鏈霉素抗性基因瞅:壯觀霉素抗性基因

SynJEC菌株

工程藍(lán)細(xì)菌——SynJEC菌株的構(gòu)建流程

10.（2分）在使用黏性末端各異的限制酶將目的基因1和目的基因2先后插入ZS質(zhì)粒時,

下列限制酶選用方案中最佳的是o（編號選填）

酶1酶1酶1酶2酶I酶4酶3酶4

IQ1,KJ■KJ

1[1[______>[_>

目的基因1目的基因1目的基因2目的基因2

①②③④

11.（2分）在上圖中的“涂布平板”階段，正確的無菌操作流程是0（編號排序）

①灼燒涂布棒②在酒精燈火焰旁涂布③培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌④置于超凈工作臺操作

⑤在酒精燈火焰旁倒平板

12.（2分）已知ZS質(zhì)粒不能在藍(lán)細(xì)菌內(nèi)復(fù)制。據(jù)題干和圖3信息推斷，研究者選用ZS質(zhì)

粒而非其它載體的主要原因是。

A.ZS質(zhì)粒含有多種標(biāo)記基因

B.ZS質(zhì)?？赏ㄟ^轉(zhuǎn)化操作進(jìn)入藍(lán)細(xì)菌

C.在克隆中消除質(zhì)粒上無關(guān)的DNA區(qū)域

D.能減輕質(zhì)粒復(fù)制給受體細(xì)胞造成的負(fù)擔(dān)

13.（3分）根據(jù)題意和研究人員的設(shè)計思路,在使用選擇培養(yǎng)基篩選克隆菌株時，形成菌落

的藍(lán)細(xì)菌______o

A.僅抗鏈霉素B.僅抗壯觀霉素

C.既抗鏈霉素又抗壯觀霉素D.對鏈霉素和壯觀霉素均敏感

14.（2分）為進(jìn)一步檢測SynJEC菌株構(gòu)建是否成功,需對目標(biāo)DNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增和

凝膠電泳鑒定,PCR擴(kuò)增應(yīng)選擇下列引物中的。

①②③

-?-?-?

III>I>1:>??——SynJEC菌株擬核DNA

飛）

隨后,研究者再借助細(xì)胞融合技術(shù)構(gòu)建光合酵母，后者的工作原理如下圖所示。已知藍(lán)細(xì)

菌光合作用的主要產(chǎn)物是蔗糖，且留在細(xì)胞內(nèi),野生酵母幾乎不能利用蔗糖作為碳源。

內(nèi)共生SynJEC菌株在酵母中的工作原理內(nèi)共生的SynJEC菌株

15.（2分）據(jù)研究人員的設(shè)計意圖分析,ZS質(zhì)粒上攜帶的目的基因1和目的基因2應(yīng)是

。（編號選填）

①蔗糖分解酶基因②蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因③光合作用相關(guān)基因④糖酵解相關(guān)酶基因⑤葡萄糖

轉(zhuǎn)運蛋白基因

16.（4分）在判斷光合酵母是否構(gòu)建成功時，設(shè)計培養(yǎng)基配方時應(yīng)考慮____，在檢測構(gòu)建

成功的光合酵母的增殖速度時,設(shè)計培養(yǎng)基配方時應(yīng)考慮o（編號選填）

①不加瓊脂②不添加有機碳源③提高氮源的占比④增加生長因子的占比

17.（3分）檢測發(fā)現(xiàn),構(gòu)建的光合酵母生長速度比野生酵母慢。研究人員試圖提升關(guān)鍵酶單

個分子的活性以解決這一問題,為此下列策略合理的是o

A.導(dǎo)入關(guān)鍵酶的編碼基因

B.強化關(guān)鍵酶編碼基因的轉(zhuǎn)錄

C.對關(guān)鍵酶編碼基因進(jìn)行定向進(jìn)化

D.提高關(guān)鍵酶編碼mRNA的翻譯速率

二,細(xì)胞器進(jìn)化理論指導(dǎo)光合酵母構(gòu)建（24分）

8.BCD9.②

10.②④11.③④⑤①②或③④⑤④①②12.C13.A

14.①④或②⑤15.①⑤

16.②①②17.C

五，（2025閔行一模）腸道工程益生菌的構(gòu)建

HT1是一種因FAH酶缺陷引起的酪氨酸代謝異常產(chǎn)生有毒物質(zhì)引發(fā)肝損的疾病。研究

團(tuán)隊試圖基于益生大腸桿菌（氏N）設(shè)計一種能高效代謝酪氨酸的腸道工程益生菌（EcN-HT）

用于治療HT1模型小鼠，如圖所示。其中，酪氨酸轉(zhuǎn)運蛋白TyrP的基因TyrP和酪氨酸高效代

謝重要酶HpaBC的基因HpaBC均為目的基因。

26.EcN的H1型鞭毛通過單個菌之間的相互作用在腸道上皮形成緊密的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),像一層

防護(hù)網(wǎng),可以抑制病原菌對腸道上皮細(xì)胞的侵襲,這種防御屬于機體的o（編號選

填）

①第一道防線②第二道防線③第三道防線④特異性免疫⑤非特異性免疫

27.圖中,TyrP需要表達(dá)在EcN-HT的質(zhì)膜上，以促進(jìn)對酪氨酸的吸收。則EcN-HT中參與

TyrP的合成到定位的結(jié)構(gòu)有。（編號選填）

①內(nèi)質(zhì)網(wǎng)②核糖體③質(zhì)膜④高爾基體⑤線粒體

研究人員以質(zhì)粒pUC57-pfnr為載體，構(gòu)建pUC57-pfnr-T和pUC57-pfnr-H兩種重組質(zhì)粒。

下圖表示了質(zhì)粒pUC57-pfnr及相關(guān)限制性內(nèi)切核酸酶的識別序列和切割位點。

I

5'-GGATCC-3'

BamWI

3'-CCTAGG-5'注：加m厭氧啟動子：

個fer:終止子：

I

5'-AAGCTT3。比復(fù)制原點；

HindIII3'-TTCGAA-5'Kanrz卡那霉素抗性基因

個CW：氯霉素抗性基因；

5MATCT-3'/農(nóng)交表達(dá)的酶蛋白可將無

Bglll3'-TCTAGA-5'色的X-gal水解成藍(lán)色產(chǎn)物

t

I

5'-GAATTC-3'

EcoRI3'-CTTAAG-5,

5%ATC-3'

MboI

3'-CTAG-5'

t

5'?CcdbGG3

SmaI

3,-GGGCCC-5,

t

28.采用“2種重組質(zhì)粒分別構(gòu)建—pUC57-pfnr-T導(dǎo)入EcN并篩選得EcN-T—pUC57-pfnr-

H導(dǎo)入EcN-T并篩選得EcN-HT”的方法時,為實現(xiàn)高效構(gòu)建和篩選,從①-⑩中合理選擇編

號填入表1.

①BamHI②Hindi!!③BglII④EcoRI⑤MboI@SmaI⑦卡那霉素⑧氯霉素⑨X-gal⑩瓊脂

目的基選擇限制性內(nèi)構(gòu)建的重組重組質(zhì)粒導(dǎo)篩選時培養(yǎng)基篩選得受

因切核酸酶質(zhì)粒入情況應(yīng)加物質(zhì)體細(xì)胞

pUC57-pfnr-

TyrP④⑥導(dǎo)入EcN(1)_______EcN-T

T

pUC57-pfnr-

HpaBC(2)_______導(dǎo)入EcN-T(3)_______EcN-HT

H

29.目的基因TyrP存在于E.coliK12菌株中。根據(jù)表1方案，需在該目的基因兩側(cè)添加相應(yīng)

的限制性內(nèi)切核酸酶識別序列后才能與質(zhì)粒成功連接。下圖顯示了該目的基因兩端的序

列,PCR時設(shè)計的引物應(yīng)是o（單選）

轉(zhuǎn)錄方向

5'-AAGGCA-■ACAATG-3'

3'-TTCCGT-------------------------------------------TGTTAC-5'

TyrP

A.5'-GAATTCAAGGCA-3'和5'-CCCGGGCATTGT-3'

B.5'-AAGGCACCCGGG-3'和5'-CATTGTGAATTC-3'

C.5'-AAGGCACCCGGG-3'和5'-TGTTACGAATTC-3'

D.5'-CCCGGGAAGGCA-3'和5'-GAATTCTGTTAC-3'

30.下列屬于分子水平檢測EcN-HT是否構(gòu)建成功有o（編號選填）

①PCR后利用凝膠電泳鑒定HpaBC和TyrP是否存在于EcN-HT工程菌中

②檢測EcN-HT工程菌中是否存在HpaBC和TyrP轉(zhuǎn)錄出mRNA

③檢測EcN-HT工程菌中是否存在HpaBC和TyrP蛋白

④檢測EcN-HT工程菌是否同時具有抗氨革青霉素和氯霉素的能力

⑤檢測EcN-HT工程菌是否有更強的代謝酪氨酸的能力

31.經(jīng)體外和HT1模型小鼠的體內(nèi)檢測實驗,EcN-HT均表現(xiàn)出優(yōu)異的酪氨酸代謝能力。若要

將該菌用于臨床治療人類HT1,應(yīng)考慮哪些因素?（答1方面即可）

五,腸道工程益生菌的構(gòu)建

26.①⑤27.②③

28.①.⑦⑨⑩②.③④③.（⑦）⑧⑨⑩29.A

30.①②③31.是否會破壞腸道菌群的穩(wěn)定/是否會在人群中傳播從而導(dǎo)致健康人酪氨酸

缺乏/是否會轉(zhuǎn)移到其他器官導(dǎo)致其他器官致病/不能將實驗室HTI模型鼠的研究成果直接用

于人類患者的治療,而需要經(jīng)過多個復(fù)雜過程，以確保藥物的安全性和有效性。合理即可。

四，（2025浦東一模）轉(zhuǎn)基因斑馬魚（19分）

水體中的雌激素能使斑馬魚細(xì)胞產(chǎn)生E蛋白，激活卵黃蛋白原（vtg）基因（如圖14所

示）的表達(dá)，因此斑馬魚可用于監(jiān)測環(huán)境雌激素污染程度。為了實現(xiàn)可視化監(jiān)測，科學(xué)家將斑

馬魚的vtg基因，與人工構(gòu)建的含螢火蟲熒光素酶基因（無啟動子）的載體（如圖15所示）

連接，形成WgL/c基因重組載體，成功培育了轉(zhuǎn)基因斑馬魚。圖15中Lac表示螢火蟲熒光素

酶基因，可以催化熒光素氧化產(chǎn)生熒光，Ampr為氨羊青霉素抗性基因,。ri為復(fù)制起

點,BamHI,EcoRI,HindIII,BsrGI為限制酶,T表示轉(zhuǎn)錄方向。

引物2

后動f區(qū)域

3

??AACTATGCCTCT?

IIIIII

CGGAGA??

3'

V-

[nnnnnninnin]vtg店因

引物1

注：該DNA片段不含圖15所示限制酶的識別序列

24

載件可呼低~上軟「圖啤會。（獅虧磔

①BamHI②EcoRI

25.（3分）通過PCR技術(shù)獲取vfg基因時，需設(shè)計合適的引物。依據(jù)圖14,圖15信息,推測引

物1包含的堿基序列為-（單選）

A.55-AACTAT-3'B.55-GAATTCAACTAT-35

C.5'-TTGATA-3'D.5'-AAGCTTAACTAT-3'

26.（4分）將，/幾c基因重組載體”導(dǎo)入大腸桿菌中進(jìn)行擴(kuò)增，為便于篩選，應(yīng)將大腸桿菌

接種在含的培養(yǎng)基中（編號選填），若要判斷斑馬魚轉(zhuǎn)基因是否成功，可在水體中添

加進(jìn)行檢測。（編號選填）

①氨芳青霉素②雌激素③熒光素④卵黃蛋白原⑤熒光素酶

27.（3分）/uc基因載體上有一段P2A序列,其功能如圖16所示,下列對P2A序列描述合理

的是（多選）

A.能與丫飯基因，LMC基因一起轉(zhuǎn)錄

B.產(chǎn)生的2A肽能剪切P2A核酸序列

C.產(chǎn)生的2A肽能破壞蛋白1和蛋白2的結(jié)構(gòu)

D.有助于序列兩側(cè)的基因表達(dá)成獨立的蛋白質(zhì)

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),E蛋白能與vfg基因啟動子中的基因1P2Al基麗

特定序列結(jié)合，啟動該基因的表達(dá)。圖16

28.（2分）E蛋白與啟動子結(jié)合后，啟動轉(zhuǎn)錄過程還需要的酶是o（單選）

A.RNA聚合酶B.DNA聚合酶C.DNA連接酶D.限制性內(nèi)切核酸酶

29.（5分）已知vfg基因啟動子長度約為1000堿基對，為了找到E蛋白在啟動子上的結(jié)合位

點，請運用本題研究成果提出設(shè)計思路并闡述基本操作步驟。

四,轉(zhuǎn)基因斑馬魚（19分）

24.（2分）②③

25.（3分）B（選D得2分，選A得1分）

26.（4分）①②③

27.（3分）AD

28.（2分）A

29.（5分）用限制酶將啟動子切割成多個長度的DNA片段，將酶切片段分別與Luc基因載體

連接，連接位點在Luc基因的上游（或ori與P2A序列之間），形成多種重組載體。將每種重

組載體分別導(dǎo)入斑馬魚受精卵，待發(fā)育成熟后添加雌激素和熒光素后進(jìn)行檢測，能發(fā)出熒光的

說明導(dǎo)入的酶切片段中含有能與E蛋白結(jié)合的序列。將該片段繼續(xù)切割成多個長度,重復(fù)上

述操作，可進(jìn)一步縮小該特定序列的位點區(qū)域。

一'（2025靜安一模）轉(zhuǎn)基因水稻（21分）

培育抗蟲耐除草劑轉(zhuǎn)基因水稻是應(yīng)對病蟲草害導(dǎo)致水稻減產(chǎn)的一種防治方式,CrylAb

蛋白和Vip3Af2蛋白分別對水稻螟蛾科害蟲和夜蛾科害蟲有較強的殺傷效果,科研人員構(gòu)建

了cMAb-v力34/2抗蟲融合基因（簡稱c-v基因），并從某種細(xì)菌中分離得到了對常用除草劑

草甘瞬有高度耐受能力的他4基因，培育了一種新型抗蟲耐除草劑轉(zhuǎn)基因水稻。

以下為主要研究過程：

I:利用工具酶,目的基因等構(gòu)建表達(dá)載體.

II:將構(gòu)建的表達(dá)載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌，將此農(nóng)桿菌接種到1號培養(yǎng)基.

III:從1號培養(yǎng)基選取合適的單菌落接種到2號培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng).

IV：將利用水稻種子形成的愈傷組織與第III步獲得的菌種共同培養(yǎng).

V：將第IV步獲得的愈傷組織轉(zhuǎn)移到3號培養(yǎng)基促進(jìn)愈傷組織的生長.

VI：將第V步獲得的愈傷組織轉(zhuǎn)移到4號培養(yǎng)基，誘導(dǎo)芽的形成.

VD：將第VI步獲得的幼體轉(zhuǎn)移培養(yǎng),獲得第1代轉(zhuǎn)基因水稻（T1），經(jīng)篩選獲得兩株抗蟲

耐除草劑轉(zhuǎn)基因水稻s6和s8.

Vffl:s6和s8分別自交,分別收集種子，萌發(fā)培養(yǎng)后獲得第2代轉(zhuǎn)基因水稻（T2），重復(fù)該

過程獲得第3代轉(zhuǎn)基因水稻（T3）。

1.（3分）第I步構(gòu)建的表達(dá)載體中，包含的基因或序列有o（多選）

A.c-v基因B.標(biāo)記基因

C.c04基因D.啟動子

2.（3分）下列對1號和2號培養(yǎng)基的分析中，正確的是o（多選）

A.1號培養(yǎng)基一般使用選擇培養(yǎng)基

B.2號培養(yǎng)基一般使用天然培養(yǎng)基

C.1號培養(yǎng)基一般采用稀釋涂布法接種

D.2號培養(yǎng)基一般采用平板劃線法接種

3.（2分）下列關(guān)于3號和4號培養(yǎng)基區(qū)別的分析中，正確的是o（單選）

A.瓊脂的濃度不同B.生長素和細(xì)胞分裂素的濃度不同

C.抗生素的種類不同D.赤霉素和細(xì)胞分裂素的濃度不同

目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，有的可以整

合到水稻基因組中（圖5a），有的不會發(fā)生

整合（圖5b），只有整合到水稻基因組中的

目的基因才能隨染色體遺傳到下一代。

為評估c-v基因是否穩(wěn)定整合到水稻基

圖5

因組中，科研人員設(shè)計了特異性引物，利用

PCR對s6和s8株系T1~T3的所有個體進(jìn)行檢測分析，結(jié)果見表2。

表2

株系s6s8

世代檢測到C-V基因未檢）則到c-v基因檢測到c-v基因未檢測到C-V基因

T1100%0100%0

T275%25%1%99%

T362.5%37.5%0100%

4.（2分）利用PCR檢測c-v基因需要合適的引物，根據(jù)圖6可知需要選擇引物.和

引物O

引物1引物2引物3引物4

颯螂

匚-13,

5'crylAbvip3Af2

3'「-二5'

引物5引物6引物7引物8

圖6

（4分）在s6的T2中，有25%沒有檢測到c-v基因，而s8的T2中，有99%沒有檢測到c-

v基因,產(chǎn)生該結(jié)果的原因可能是：s6中,c-v基因.,s8中cv基因.。（編號選

填）

①沒有整合到基因組中

②整合到一條染色體中

③整合到一對同源染色體中

國家口岸常需快速檢測進(jìn)出口產(chǎn)品是否為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品。為檢測出含耐草甘瞬基因的轉(zhuǎn)基

因產(chǎn)品，科研人員利用圖7所示的流程制備了單克隆抗體。甲表示細(xì)胞,a~e表示過程。

甲

圖7

6.（2分）圖7中過程a注入小鼠體內(nèi)的是o（單選）

A.c-v基因B.cp4基因

C.CrylAb蛋白和Vip3Af2蛋白D.cp4蛋白

7.（2分）圖7中細(xì)胞甲一般選用o（單選）

A.人骨髓瘤細(xì)胞B.水稻體細(xì)胞原生質(zhì)體

C.小鼠骨髓瘤細(xì)胞D.水稻愈傷組織原生質(zhì)體

8.（3分）下列關(guān)于圖7中過程b?e的分析中，正確的是。（多選）

A.過程b表示細(xì)胞融合B.過程c是篩選抗體分泌陽性的細(xì)胞

C.過程d是篩選雜合細(xì)胞D.過程e必須在嚴(yán)格無菌環(huán)境下進(jìn)行

1.ABCD

2.AC

3.B

4.45

5.②（2分）①（2分）

6.D

7.C

8.AD

五，（2025黃浦區(qū)一模）噬菌體展示技術(shù)（21分）

2018年諾貝爾化學(xué)獎授予在噬菌體展示技術(shù)領(lǐng)域作出卓越貢獻(xiàn)的科學(xué)家。這項技

術(shù)的主要原理是：將外源基因整合到噬菌體基因組中，表達(dá)“展示蛋白”并在噬菌

體表面展示，最終快速發(fā)現(xiàn)與其特異性結(jié)合的多肽。圖10為大腸桿菌噬菌體，羅馬

數(shù)字代表編碼外殼蛋白的基因，例如基因〃/負(fù)責(zé)編碼pill蛋白。

圖示

JC----）基因組

-pin蛋白

■pVI蛋白

1c^=>pVII蛋白

—pvni蛋白

pix蛋白

外源基因

“展示蛋白”（多價展示）

噬菌體展示

9.

10.圖10

30.（3分）外源基因表達(dá)出“展示蛋白”需要大腸桿菌提供—o（編號選填）

①核糖體②細(xì)菌DNA③轉(zhuǎn)運RNA④核糖核甘三磷酸

⑤氨基酸⑥ATP⑦脫氧核糖核昔三磷酸

31.（2分）圖11為基因///的結(jié)構(gòu)，編碼的信號肽引導(dǎo)pill蛋白轉(zhuǎn)移至噬菌體的組

裝部位，在組裝過程中會被宿主的蛋白酶切除CT結(jié)構(gòu)負(fù)責(zé)將pill蛋白錨定于噬菌體

上。據(jù)此可知，欲得到圖10展示結(jié)果應(yīng)將外源基因插入到圖11所示①?④中的

一處。（單選）

信號肽編碼序列CT編碼序列

5'座談運遂測通逋附-3，

①②③④

11.圖11

A.①B.②C.③D.@

32.（1分）欲將“展示蛋白”展示在圖10噬菌體的★處,應(yīng)將外源基因與基因

____整合。

圖12為噬菌體展示庫的構(gòu)建及目標(biāo)蛋白的篩選流程，其中噬菌粒是一種人工改造的

特殊載體，而輔助噬菌體為子代噬菌體的復(fù)制和組裝提供必要條件。

13.

14.圖12

15.