《自發(fā)性強(qiáng)制性脊柱炎食蟹猴解剖病理學(xué)檢查規(guī)程》征求意見稿

1T/GDPMAAXXXX—XXXX自發(fā)性強(qiáng)直性脊柱炎食蟹猴解剖病理學(xué)檢查規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了自發(fā)性強(qiáng)直性脊柱炎食蟹猴（以下簡稱“自發(fā)性AS食蟹猴”）解剖病理學(xué)檢查的內(nèi)容和方法，包括檢查程序、解剖病理學(xué)檢查、檢查報告。本標(biāo)準(zhǔn)適用于強(qiáng)直性脊柱炎食蟹猴的解剖病理學(xué)檢查。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。T/CALAS108-2021《實(shí)驗(yàn)動物骨與關(guān)節(jié)疾病食蟹猴模型評價規(guī)范》DB53/T293.1-2009《實(shí)驗(yàn)動物病理學(xué)檢測第1部分：實(shí)驗(yàn)動物處死方法》T/CALAS109-2021《實(shí)驗(yàn)動物2型糖尿病食蟹猴模型評價規(guī)范》DB11/T1462.1-2017《實(shí)驗(yàn)動物病理學(xué)診斷規(guī)范第1部分:實(shí)驗(yàn)用豬》3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1實(shí)驗(yàn)動物食蟹猴L(fēng)aboratoryMacacaFascicularis經(jīng)人工飼育，對其攜帶的微生物和寄生蟲等實(shí)行質(zhì)量控制，遺傳背景明確或者來源清楚，用于科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)和檢定以及其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)的食蟹猴。[T/CALAS109-2021,定義3.1]以骶髂關(guān)節(jié)和脊柱附著點(diǎn)炎癥為主要癥狀的一種全身性自身免疫性疾病。[T/CALAS108-2021,定義2.3]3.3獸醫(yī)解剖病理學(xué)VeterinaryAnatomicalPathology以通過肉眼、顯微鏡、免疫學(xué)等方法對患病動物的機(jī)體、器官和組織的形態(tài)學(xué)進(jìn)行檢查，并對疾病進(jìn)行診斷的學(xué)科。[DB11/T1462.1—2017,定義3.2]4縮略語以下縮略語適用于本文件。AS:強(qiáng)直性脊柱炎。5檢查程序自發(fā)性AS食蟹猴解剖病理學(xué)檢查程序見圖1。2T/GDPMAAXXXX—XXXX圖1.檢查程序6解剖病理學(xué)檢查6.1稱重稱量動物體重，注意體重是否明顯減輕?？上饶繙y動物大小，大體型或配合度差的動物會先予以適度的鎮(zhèn)靜，再進(jìn)行抓取操作。6.2麻醉在麻醉前，動物應(yīng)禁食至少8-12小時，認(rèn)真核對動物信息無誤后，根據(jù)動物體重等計算麻醉藥使用量，進(jìn)行常規(guī)麻醉。6.3外觀檢查a)毛發(fā)和皮膚：檢查體溫是否升高,全身或局部是否出現(xiàn)腫脹等炎癥跡象，毛發(fā)是否有異常脫落或被污染等。b)脊柱：觀察動物脊柱的形態(tài)是否發(fā)生異常改變，如過度彎曲、變形或僵硬等。c)尾部：觀察動物尾部的形態(tài)是否發(fā)生異常改變，如僵硬、竹節(jié)樣改變等。d)其它骨關(guān)節(jié)：觀察動物髖部及四肢外周關(guān)節(jié)是否有隆起、膨脹或畸形等異常改變。e)肌肉：觀察動物全身主要肌肉群是否發(fā)生異常改變，特別是脊柱附近的肌肉是否萎縮。f)眼球：使用檢眼鏡檢查動物角膜、虹膜、鞏膜等部位是否存在充血、水腫或破損等。6.4安樂死在深麻醉狀態(tài)下，使用腹主動脈或腹股溝動脈放血安樂死。[DB53/T293.1-2009]6.5大體剖檢6.5.1解剖程序進(jìn)行體表、皮下、腹腔、盆腔、胸腔、頭頸部、中軸關(guān)節(jié)和外周關(guān)節(jié)的剖檢。6.5.2檢查內(nèi)容3T/GDPMAAXXXX—XXXXAS病變密切相關(guān)組織臟器，與AS病變最為密切的為中軸關(guān)節(jié)，其次為外周關(guān)節(jié)、眼球、腸道、心臟、腎臟等，此外肺臟、肝臟、胸腺、脾臟、淋巴結(jié)等其他組織臟器也應(yīng)進(jìn)行解剖和觀察。6.5.3大體解剖將安樂死后的實(shí)驗(yàn)動物放置于負(fù)壓解剖臺，使用手術(shù)刀、剪刀、電鋸等進(jìn)行大體解剖，組織臟器的解剖詳見附錄A。6.5.4解剖檢查需重點(diǎn)觀察的內(nèi)容6.5.4.1與AS病變密切相關(guān)組織臟器6.5.4.1.1骨組織a)中軸關(guān)節(jié)脊柱、骶髂關(guān)節(jié)及其周圍軟組織。脊柱、骶髂關(guān)節(jié)及其周圍軟組織解剖檢查的大體觀察要點(diǎn)如下：——脊柱形態(tài)觀察.觀察脊柱的整體形態(tài)，是否有僵硬、畸形或異常彎曲（如脊柱側(cè)凸、前凸或后凸）等。.重點(diǎn)檢查腰椎和胸椎部分脊柱，觀察是否有明顯的骨質(zhì)增生或骨質(zhì)疏松。.仔細(xì)檢查各脊椎之間的間隙是否正常，有無椎間隙變窄或融合等跡象。——脊柱活動度評估.試輕輕彎曲、伸展和旋轉(zhuǎn)動物脊柱，觀察是否有活動受限——脊柱周圍軟組織檢查.檢查脊柱周圍的肌肉組織是否有萎縮、纖維化、脂肪化或充血、腫脹、壞死及鈣化等異常改變。.檢查脊柱周圍的脂肪墊的大小、形態(tài)和質(zhì)地，是否存在充血、腫脹、壞死或鈣化的跡象。.檢查脊柱周韌帶組織是否有增厚、硬化或其他異常改變。2)骶髂關(guān)節(jié)——骶髂關(guān)節(jié)觀察.仔檢查骶髂關(guān)節(jié)位置的骨組織是否光滑，注意是否有骨質(zhì)增生或侵蝕的現(xiàn)象。——骶髂關(guān)節(jié)周圍軟組織檢查.觀察骶髂關(guān)節(jié)周圍的軟組織，如韌帶、關(guān)節(jié)囊和肌肉，是否有粘連、增厚或萎縮。b)外周關(guān)節(jié)分布在人體四肢的關(guān)節(jié)及其周圍軟組織。檢查外周關(guān)節(jié)及其周圍軟組織,一般來說下肢關(guān)節(jié)較上肢受累更為常見，特別需注意髖關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)以及肩關(guān)節(jié)、肘關(guān)節(jié)、腕關(guān)節(jié)等關(guān)節(jié)的受累情——關(guān)節(jié)周圍軟組織檢查.觀察關(guān)節(jié)周圍的肌肉、脂肪組織等，是否顯示腫大、充血、萎縮或其他異常改變。.檢查肌腱和韌帶的附著點(diǎn)是否有炎癥和損傷的跡象，可表現(xiàn)為充血、腫脹、壞死或鈣化。.檢查關(guān)節(jié)囊是否受到炎癥或退變的影響，可表現(xiàn)為增厚、纖維化或鈣化?！P(guān)節(jié)形態(tài)觀察.檢查關(guān)節(jié)是否存在僵硬、畸形等改變。.檢查關(guān)節(jié)附近的骨質(zhì)密度和結(jié)構(gòu)，以評估骨質(zhì)疏松或骨質(zhì)增生的情況?！P(guān)節(jié)活動度評估：.嘗試輕輕彎曲、伸展和旋轉(zhuǎn)關(guān)節(jié)，評估關(guān)節(jié)活動是否受限，以及受限的程度。6.5.4.1.2非骨組織臟器a)眼球：檢查眼球壁是否存在充血、出血或滲出等情況。b)腸道：檢查腸黏膜是否出現(xiàn)充血、出血、潰瘍、糜爛或脫落，腸道壁增厚等情況。c)心臟：觀察各心房和各心室大小是否正常，觀察心肌及各瓣膜的厚度和形態(tài)，需特別留意瓣膜是否有增厚、變形或鈣化，是否存在瓣膜狹窄或關(guān)閉不全的跡象。d)腎臟：檢查是否存在萎縮或腫大，顏色變淡，表面及切面是否有不光滑的情況。4T/GDPMAAXXXX—XXXXe)肺臟：檢查肺臟的大小、顏色、質(zhì)地、表面有無異常，需留意肺葉是否纖維化的跡象。f)肝臟：評估肝臟的形態(tài)，注意是否有腫大或縮小，檢查肝臟的顏色是否正常，注意是否有異常的蒼白、黃疸或暗紅色。切面顏色是否均勻，是否有出血、壞死或脂肪變性等。g)胸腺：注意胸腺的形態(tài)是否飽滿、對稱，有無變形、腫大或萎縮。評估胸腺是否有萎縮時，需結(jié)合年齡，萎縮也可能是正常的年齡相關(guān)性變化。h)淋巴結(jié)：檢查腸系膜及頸部淋巴結(jié)，注意其大小與質(zhì)地。6.5.4.2其他組織臟器檢查時需注意組織臟器的大小、形態(tài)、顏色、質(zhì)地等是否正常。6.5.5大體標(biāo)本留樣需留樣脊柱、骶髂關(guān)節(jié)及其周圍的軟組織。外周關(guān)節(jié)、眼球、腸道、心臟、腎臟、胸腺、脾臟、腹股溝淋巴結(jié)、頸部淋巴結(jié)以及大體解剖檢查發(fā)現(xiàn)異常的器官和組織等也應(yīng)留樣保存于固定液中進(jìn)行充分的固定。6.6組織病理學(xué)檢查6.6.1檢查內(nèi)容需檢查脊柱、骶髂關(guān)節(jié)。外周關(guān)節(jié)、眼球、腸道、心臟、腎臟、胸腺、脾臟、腹股溝淋巴結(jié)、頸部淋巴結(jié)以及大體解剖檢查發(fā)現(xiàn)異常的器官和組織也應(yīng)檢查。6.6.2組織標(biāo)本取材規(guī)范標(biāo)本的取材，對于有病變的標(biāo)本，取材應(yīng)包括病變部位、病變與正常組織的交界處以及正常部位。骨標(biāo)本的取材，往往需要電鋸切割及脫鈣處理。實(shí)驗(yàn)方法參見附錄B。6.6.3病理組織制片a)骨標(biāo)本1)進(jìn)行必要的脫鈣及處理后的標(biāo)本脫水后進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋和切片，伊紅-蘇木精（HE）染色，必要時進(jìn)行特殊染色（如Masson三色染色、番紅O-固綠染色及茜素紅S染色等）、免疫組織化學(xué)、免疫熒光以及原位雜交染色鑒定。實(shí)驗(yàn)方法參見附錄C。2)未進(jìn)行脫鈣的標(biāo)本可進(jìn)行樹脂包埋后及硬組織切片。實(shí)驗(yàn)方法參見附錄D。b)非骨標(biāo)本常規(guī)石蠟切片，伊紅-蘇木精（HE）染色，必要時進(jìn)行特殊染色（如Masson三色染色、番紅O-固綠染色及茜素紅S染色等、免疫組織化學(xué)、免疫熒光以及原位雜交染色鑒定。實(shí)驗(yàn)方法參見附錄C。6.6.4閱片及診斷由具有動物病理診斷經(jīng)驗(yàn)和資質(zhì)的病理學(xué)專業(yè)人員進(jìn)行。6.6.4.1脊柱a)附著點(diǎn)：韌帶與骨骼相連部位的炎癥情況。b)韌帶：韌帶是否出現(xiàn)變性、壞死、血管新生、炎癥細(xì)胞浸潤和聚集、纖維化、鈣化、軟骨化和骨化等現(xiàn)象。c)椎體：椎體邊緣是否有新生骨質(zhì)形成，不同椎體之間是否有骨橋形成；椎體內(nèi)部的骨小梁是否變細(xì)、數(shù)量減少；軟骨板下方與椎體相連的部分是否完整，有無破壞和侵蝕的痕跡；骨髓腔內(nèi)的細(xì)胞成分變化，有無明顯的炎癥細(xì)胞浸潤、聚集和纖維化以及病灶內(nèi)的血管新生等現(xiàn)象；觀察椎體骨髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞的數(shù)量和分布情況，評估其是否有異常增多。d)椎間盤：觀察椎間盤組織的退變情況，特別是纖維環(huán)的變性、斷裂和纖維化，注意發(fā)生纖維化的椎間盤組織內(nèi)是否有炎癥細(xì)胞浸潤、聚集，血管新生，纖維化，鈣化，軟骨化和骨化等現(xiàn)象，檢查椎骨邊緣是否有新生骨的形成，特別是有接相鄰椎骨的現(xiàn)象。e)脊柱旁肌肉：需關(guān)注肌肉萎縮、炎癥浸潤、纖維化、脂肪浸潤等病理學(xué)改變，并注意與脊柱病變和其他組織病變的關(guān)聯(lián)。5T/GDPMAAXXXX—XXXXf)脊柱旁脂肪墊：需關(guān)注脂肪壞死、炎癥細(xì)胞浸潤、纖維化、新生血管形成等方面的病理學(xué)改變，并注意與脊柱病變和其他并發(fā)癥的關(guān)聯(lián)。6.6.4.2骶髂關(guān)節(jié)a)韌帶：觀察包括骨間韌帶在內(nèi)的骶髂關(guān)節(jié)韌帶是否出現(xiàn)變性、壞死、血管新生、炎癥細(xì)胞浸潤和聚集、纖維化、鈣化、軟骨化和骨化等現(xiàn)象。b)韌帶附著的骶骨和髂骨：骨組織是否存在侵蝕，是否有新生骨質(zhì)形成。骨小梁是否變細(xì)、數(shù)量減少；骨髓腔內(nèi)的細(xì)胞成分變化，有無明顯的炎癥細(xì)胞浸潤、聚集和纖維化以及病灶內(nèi)的血管新生等現(xiàn)象；觀察椎體骨髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞的數(shù)量和分布情況，評估其是否有異常增多。c)滑膜：觀察滑膜是否有細(xì)胞增生的現(xiàn)象，并注意是否有大量炎癥細(xì)胞的浸潤。d)關(guān)節(jié)囊：觀察關(guān)節(jié)囊是否有增厚，并伴有纖維化和鈣化現(xiàn)象。e)軟骨：觀察骶髂關(guān)節(jié)軟骨的破壞情況，包括軟骨表面的粗糙化、潰瘍形成和軟骨基質(zhì)的喪失。f)軟骨下骨：注意軟骨下骨質(zhì)的硬化現(xiàn)象，包括軟骨下骨質(zhì)的增厚和密度增加。g)關(guān)節(jié)間隙：觀察關(guān)節(jié)間隙的寬度，是否有明顯的狹窄或增寬跡象。注意是否有骨橋（骨贅）形成，導(dǎo)致骶髂關(guān)節(jié)部分或完全融合。6.6.4.3外周關(guān)節(jié)需特別關(guān)注韌帶和肌腱骨附著點(diǎn)的炎癥、滑膜炎、纖維組織增生、新骨形成和骨質(zhì)融合等改變。6.6.4.4眼球注意葡萄膜是否有炎癥的病理表現(xiàn)，包括炎癥細(xì)胞浸潤和組織增生等。6.6.4.5腸道注意腸壁是否有炎癥細(xì)胞浸潤、聚集和潰瘍形成。6.6.4.6心臟注意有無主動脈根部炎癥、瓣膜增厚和鈣化、骨化。6.6.4.7腎臟觀察腎小球基底膜的厚度是否異常，是否有基底膜增厚的現(xiàn)象；注意腎小球內(nèi)細(xì)胞的增生情況，包括內(nèi)皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞的增生；注意腎間質(zhì)中是否有炎癥細(xì)胞的浸潤，是否有纖維化現(xiàn)象。6.6.4.8肺臟觀察肺泡壁是否有增厚、纖維化或炎癥細(xì)胞浸潤。注意間質(zhì)組織是否有異常增生或纖維化。6.6.4.9肝臟注意肝細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞是否發(fā)生變性和壞死，匯管區(qū)是否有炎癥細(xì)胞浸潤、聚集。6.6.4.10胸腺觀察胸腺皮質(zhì)和髓質(zhì)的分界是否清晰，髓質(zhì)中的Hassall小體是否數(shù)量正常，形態(tài)是否有異常變化。評估胸腺皮質(zhì)和髓質(zhì)中胸腺細(xì)胞的密度，是否有細(xì)胞減少或細(xì)胞增生。需注意被檢查食蟹猴的年齡，需排除年齡相關(guān)性變化。6.6.4.11淋巴結(jié)檢查淋巴濾泡的大小、數(shù)量及其生發(fā)中心的活躍程度。評估淋巴結(jié)皮質(zhì)和髓質(zhì)中淋巴細(xì)胞的密度，是否有細(xì)胞減少或細(xì)胞增生。6.6.4.12其他大體解剖檢查發(fā)現(xiàn)異常的器官和組織也應(yīng)進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。需注意增生或萎縮，變性，壞死，炎癥等組織病理學(xué)改變。6T/GDPMAAXXXX—XXXX7檢查報告7.1檢查報告撰寫要求病理檢查報告內(nèi)容的表述和書寫應(yīng)準(zhǔn)確、詳實(shí)、完整、規(guī)范。盡量使用病理學(xué)規(guī)范術(shù)語。7.2檢查報告內(nèi)容報告內(nèi)容應(yīng)包括：a)動物編號、性別、年齡、體重、組織標(biāo)本取材部位等；b)解剖病理學(xué)檢查結(jié)果：包括大體解剖的描述、鏡下檢查描述、綜合分析與診斷結(jié)果；c)具有動物病理診斷經(jīng)驗(yàn)和資質(zhì)的病理學(xué)專業(yè)人員簽名并注明報告時間。7T/GDPMAAXXXX—XXXX大體剖檢觀察A.1體表檢查猴全身外表及營養(yǎng)狀況，被毛光澤、疏密、有無脫毛；皮膚有無皮疹、出血、創(chuàng)口、疤痕；眼、耳、口、鼻、肛門、外生殖器有無分泌物、排泄物、滲出物及粘膜出血；軀體有無腫脹、膨隆、骨折等。A.2胸腔、腹腔及盆腔主要步驟如下：a)沿正中線從頜下至恥骨前緣的皮膚切開，并向兩側(cè)分離，檢查皮下組織。b)剪開腹部肌肉，打開腹腔，原位檢查腹腔臟器。c)去除胸骨肋骨表面的肌肉，打開胸腔，摘取胸骨和肋骨（包括肋骨和軟骨交接處），檢查胸腔臟器。檢查后用生理鹽水濕潤的紗布覆蓋。d)在胸腔臟器的表面或者在組織器官上灑生理鹽水，從而防止組織干燥。e)摘取脾臟，稱重后保留2塊中間部分組織，每塊大約5mm厚，檢查切面，剩余組織丟棄。f)將胃至結(jié)腸、胰腺、腸系膜淋巴結(jié)、腸系膜和大網(wǎng)膜一同摘出。分離胰腺、腸系膜淋巴結(jié)。保留胃和十二指腸（至少長3cm），沿胃大彎將胃和十二指腸剪開，用生理鹽水洗去內(nèi)容物，檢查粘膜，如有必要，將其固定在紙板上，粘膜面朝上。g)摘取整個盲腸和約5cm長的空腸、回腸和結(jié)腸。空腸取胃和盲腸中間部位，回腸和結(jié)腸取靠近盲腸處。Peyer’s節(jié)保留在空腸或回腸上。沿腸系膜將各段腸剪開，檢查粘膜面。如有必要，將各段腸固定在標(biāo)記為“J”“I”“C”“Co”的紙板上。h)摘取肝臟和膽囊，使用注射器抽出膽汁，觀察膽汁，記錄體積，將膽囊切開，觀察膽囊粘膜面，稱重后，保留肝臟左側(cè)葉、中葉（該部分必須包括膽囊，每葉保留2塊肝臟組織，每塊肝臟組織大約5mm）。肝臟其他葉需要切開檢查。i)摘取腎上腺；摘取輸尿管，貼在紙上，可用“P”標(biāo)示近腎端；摘取腎臟，在左腎一端表面切口標(biāo)記。稱重后，左腎在腎門附近橫切，右腎在腎乳頭附近縱切，觀察切面。固定需要部位，剩余的腎臟組織丟棄。j)雄性：摘取睪丸、附睪區(qū)分左右并檢查。雌性：摘取卵巢和輸卵管并檢查。k)切斷恥骨聯(lián)合，暴露盆腔。雄性：摘取膀胱、前列腺和精囊腺。雌性：摘取膀胱、陰道、子宮頸和子宮并檢查。分離陰道和子宮頸，打開陰道并檢查。將膀胱沿V字型打開并檢查。l)摘取直腸，剪開檢查粘膜面，如必要，固定在標(biāo)記為“Re”的紙板上。m)摘取胸腺，如果不能辨認(rèn)胸腺時，取其所在部位組織，如需稱重，需用備注說明。n)摘取心臟，從右心房至心尖切開，心尖至肺動脈切開。再將肺靜脈至左心房及左心室切開，心尖到大動脈切開。觀察肺動脈瓣、乳頭肌、三尖瓣、右心房、主動脈瓣、二尖瓣、左心房及心室心內(nèi)膜。o)在胸腔入口處剪斷食管和氣管，與主動脈和肺（包括主支氣管）一起取出。提交主動脈、食管和氣管。肺臟稱重時在距離氣管分叉處約1cm處切斷，稱重完成后對肺臟進(jìn)行灌注固定。A.3頭部、脊柱及四肢主要步驟如下：a)分離寰椎與枕骨，取下整條脊柱及其周圍的韌帶、肌肉及脂肪墊等軟組織并進(jìn)行檢查。b)摘取眼球和視神經(jīng)摘取眼瞼、瞬膜或第三眼瞼。剔除眼球和視神經(jīng)周圍的組織。c)摘取頜下腺和頸部淋巴結(jié)，分離頜下腺和頜下淋巴結(jié)；摘取腮腺。d)摘取甲狀腺和甲狀旁腺；摘取舌下腺，將舌、咽、喉、扁桃體一起摘出。舌取中間部。e)去除頭蓋骨上的皮膚和肌肉，采集腦；摘取垂體和鼻腔。8T/GDPMAAXXXX—XXXXf)將動物放置于仰臥位或側(cè)臥位，摘取骨骼肌（股二頭肌、股四頭肌和/或腓腸肌）坐骨神經(jīng)，將坐骨神經(jīng)固定在紙上面。取下并檢查四肢關(guān)節(jié)其周圍的韌帶等軟組織。9T/GDPMAAXXXX—XXXX骨標(biāo)本病理學(xué)組織取材B.1脫鈣前取材骨標(biāo)本固定完全后，脊柱需從頸部開始，至胸部、腰部、尾部，用電鋸鋸開合適的大小。使用電鋸橫鋸時，應(yīng)從椎體而不是椎間盤處橫切，以盡量保留完整的椎間盤；使用電鋸進(jìn)行縱鋸時，應(yīng)在椎體中央鋸開，以保留椎體的最大觀察面。四肢關(guān)節(jié)的取材需保留關(guān)節(jié)面、關(guān)節(jié)囊及周圍的韌帶。需進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋制片的標(biāo)本需置于包埋盒中進(jìn)行脫鈣處理。不需進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋制片的標(biāo)本放回至相應(yīng)編號含有固定液的原容器中保存?zhèn)溆谩.2脫鈣脫鈣液選擇EDTA脫鈣液，脫鈣液與骨組織體積比例至少為15:1，一周換2次新鮮的脫鈣液，脫鈣終點(diǎn)以骨組織無氣泡發(fā)生或軟化，或用大頭針輕輕能刺進(jìn)為標(biāo)準(zhǔn)。B.3脫鈣后取材脫鈣結(jié)束后，從脫鈣液中取出骨組織，切取0.3cm～0.5cm厚度，標(biāo)記好對應(yīng)位置，放入與其相應(yīng)編號的包埋盒中，用流水沖洗3～4小時，沖洗完成后進(jìn)入待脫水狀態(tài)。T/GDPMAAXXXX—XXXX（資料性）病例組織制片C.1脫水C.1.1脫水試劑脫水所需試劑包括70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、無水乙醇、二甲苯、石蠟（熔點(diǎn)56~58°C）。C.1.2脫水程序70%乙醇（3h）、80%乙醇（2.5h）、95%乙醇I（2h）、95%乙醇II（2h）、無水乙I醇（40min）、無水乙醇II（40min）、無水乙醇III（1h）、二甲苯I（30min）、二甲苯II（40min）、二甲苯III（1h）、石蠟I（1h）、石蠟II（1h）、石蠟III（1h）。C.2包埋注意事項(xiàng)如下：a)溫度一般設(shè)置在65-70℃左右。b)包埋前應(yīng)在浸蠟缸中浸泡10min左右。c)根據(jù)組織塊的大小選擇合適的包埋模。d)先將少量石蠟注入包埋模內(nèi)，迅速將組織塊夾入其中，用無齒鑷將組織切面輕壓至包埋模底，并與之持平，最后將包埋模移至冷卻臺上冷卻，使組織固定于包埋模底。e)將脫水盒放到包埋模上面，再灌注石蠟。f)把包埋模移到冷卻臺上，冷卻后將脫水盒與包埋模分離。C.3切片注意事項(xiàng)如下：a)先修整蠟塊，充分暴露所有包埋的組織面，將蠟塊放于冰塊上冷卻30min左右，再進(jìn)行切片。b)切片厚度一般為3μm~4μm，特殊實(shí)驗(yàn)要求除外。c)把切片展平，用毛筆或鑷子分離，光滑面朝下，放入冷水槽中伸展。C.4攤片注意事項(xiàng)如下：a)水溫控制在37℃~48℃左右，防止蠟片離散。b)撈片時注意組織塊方向的一致性，撈取的組織切片貼于防脫載玻片上。c)檢查玻片有無破損、皺褶、是否完整。C.5烘片注意事項(xiàng)如下：a)貼好切片的載玻片可以置于烘片機(jī)上進(jìn)行烘片。b)烘片機(jī)溫度調(diào)至37℃~48℃,烘片時間一般為30min之內(nèi)。c)烘干玻片后，檢查玻片是否干燥，若未完全干燥則置于鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)繼續(xù)烘片，若干燥則置于玻片架，待烤片和染色。C.6烤片注意事項(xiàng)如下：a)使用鼓風(fēng)干燥箱進(jìn)行烤片。b)干燥箱的溫度控制在65℃左右。c)烤片至少30min。T/GDPMAAXXXX—XXXXC.7染色（伊紅-蘇木精染色）注意事項(xiàng)如下：a)染色試劑染色所需試劑包括70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、無水乙醇、二甲苯、TO透明劑、鹽酸乙醇、伊紅（醇溶）、蘇木素。b)染色程序二甲苯I（20min）、二甲苯II（20min）、無水乙醇I（5min）、無水乙醇II（5min）、95%乙醇I鹽酸乙醇（5s）、自來水返藍(lán)（15min）、90％乙醇（5min）、醇溶性伊紅（1min）、95%乙醇I（8s）、95%乙醇II（8s）、95%乙醇II（8s）、無水乙醇I（5min）、無水乙醇II（5min）、TO透明劑I（20min）、TO透明劑II（20min）。c)染色標(biāo)準(zhǔn)為胞核被染成藍(lán)色，胞漿被染成紅色，著色適中，染色均勻，色澤鮮艷，清晰透徹，染色質(zhì)呈顆粒狀。C.8封片注意事項(xiàng)如下：a)染色結(jié)束后，取出浸泡在透明劑中的載玻片，拭去過多的透明劑。b)在載玻片上的組織上滴1滴中性樹膠。c)根據(jù)組織切片選擇適當(dāng)大小的蓋玻片。d)將蓋玻片斜立在載玻片上適當(dāng)?shù)奈恢茫p輕放下，封固，避免產(chǎn)生氣泡。操作者避免對著切片呼氣。e)核對玻片質(zhì)量，如是否封片膠過多、封片方向錯誤、氣泡過多，如存在以上問題則重新封片，無則置于通風(fēng)櫥中晾干。T/GDPMAAXXXX—XXXX病理組織制片（硬組織切片）D.1脫水D.1.1脫水試劑脫水所需試劑包括70%乙醇、95%乙醇、無水乙醇、二甲苯。D.1.2脫水程序70%乙醇（1d）、95%乙醇I（2d）、無水乙I醇（1d）、無水乙醇II（1d）、二甲苯（1d），以上程序均在4℃冰箱進(jìn)行。D.2滲透包括以下方式a)滲透液I浸泡（甲基丙烯酸甲酯75ml＋鄰苯二甲酸二丁酯25ml攪拌3h），時間2d，4℃冰箱進(jìn)行。b)滲透液II浸泡（甲基丙烯酸甲酯75ml＋鄰苯二甲