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實(shí)驗(yàn)七噬菌體效價(jià)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)并掌握噬菌體效價(jià)的含義及其測(cè)定原理。2.學(xué)習(xí)并掌握雙層瓊脂平板法測(cè)定噬菌體效價(jià)。實(shí)驗(yàn)原理

噬菌體的效價(jià)即１mL樣品中所含侵染性噬菌體的粒子數(shù)。效價(jià)的測(cè)定一般采用雙層瓊脂平板法。由于在含有特異宿主細(xì)菌的瓊脂平板上，一般一個(gè)噬菌體產(chǎn)生一個(gè)噬菌斑，故可根據(jù)一定體積的噬菌體培養(yǎng)液所出現(xiàn)的噬菌斑數(shù)，計(jì)算出噬菌體的效價(jià)。噬菌體效價(jià)(cfu/ml)=噬菌斑數(shù)×稀釋倍數(shù)×10

當(dāng)烈性噬菌體侵染敏感細(xì)菌后會(huì)迅速引起敏感細(xì)菌裂解，釋放出大量子代噬菌體，然后它們?cè)贁U(kuò)散和侵染周圍細(xì)胞，結(jié)果就會(huì)在菌苔上形成一個(gè)具有一定形狀、大小、邊緣和透明度的噬菌斑實(shí)驗(yàn)材料菌種：大腸桿菌（Escherichiacoli)LE392噬菌體：λ噬菌體EA94培養(yǎng)基：LB固體培養(yǎng)基0.7%瓊脂糖

噬菌體(phage,bacteriophage)是原核生物的病毒噬細(xì)菌體(bacteriophage)

噬放線菌體(actinophage)

噬藍(lán)細(xì)菌體（cyanophage)

噬菌體的生物學(xué)性狀抵抗力比一般細(xì)菌的繁殖體強(qiáng)抵抗乙醚、氯仿和乙醇75℃30min或更久才能被滅活耐受低溫和冰凍但對(duì)紫外和X射線敏感，一般經(jīng)紫外照射10~15min即失去活性。噬菌體的繁殖吸附侵入增殖成熟裂解

噬菌體的繁殖過(guò)程很快，E.coli

T系噬菌體在合適溫度下僅為15～25min雙層平板法

底層平板上層平板上層培養(yǎng)基宿主菌懸液（濃）噬菌體試樣

（0.7%瓊脂糖）（2％瓊脂的細(xì)菌培養(yǎng)基7～8ml)混勻37oC10余h噬菌斑計(jì)數(shù)底層培養(yǎng)基：彌補(bǔ)培養(yǎng)皿底部不平的缺陷使所有的噬菌斑都位于近乎同一個(gè)平面上，因而大小一致、邊緣清晰、無(wú)重疊現(xiàn)象上層培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基可形成形態(tài)較大、特征明顯的噬菌斑便于計(jì)數(shù)LB固體培養(yǎng)基0.7%瓊脂糖單個(gè)噬菌斑指示菌菌苔透明的裂解圈＋＋＋噬菌體大腸桿菌37oC保溫25min＋菌液

菌液噬菌體注意事項(xiàng)2、倒培養(yǎng)基時(shí)要觀察培養(yǎng)基是否已經(jīng)結(jié)塊？3、從50oC

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