食品微生物 食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)3學(xué)習(xí)資料

同學(xué)們好

準(zhǔn)備上課了弘德明志博學(xué)篤行同學(xué)們好準(zhǔn)備上課了食品微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)第三章

食品微生物

檢驗(yàn)樣品的采集與處理

山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院李世國(guó)lishiguo2004@126.co章的主要內(nèi)容食品微生物檢驗(yàn)的一般步驟檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備樣品的采集樣品的送檢樣品的處理方法致病菌檢驗(yàn)參考菌群的選擇樣品的檢驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告一.食品微生物檢驗(yàn)的一般步驟樣品采集樣品處理樣品保存選擇參考菌群檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備菌落總數(shù)大腸菌群致病菌分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)增菌純化染色鏡檢生化試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告二.檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備準(zhǔn)備好所需的各種儀器。按技術(shù)要求將各種玻璃儀器進(jìn)行清洗、烘干、包扎、滅菌，冷卻后送無(wú)菌室備用。準(zhǔn)備好所用的各種試劑，做好普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂或其他選擇必培養(yǎng)基。做好無(wú)菌室或超凈工作臺(tái)的滅菌工作，提前1h滅菌30~60min.工作衣、鞋、帽、等滅菌后備用。工作人員進(jìn)入無(wú)菌室后，實(shí)驗(yàn)沒(méi)有完成之前不得隨便出入無(wú)菌室。1.食物中毒一般急救處理原則2.食物中毒調(diào)查3.食物中毒現(xiàn)場(chǎng)處理4.采樣技術(shù)5.食物中毒的診斷與鑒別6.食物中毒總結(jié)和報(bào)告的書(shū)寫(xiě)（一）、人員培訓(xùn)采樣用具：長(zhǎng)柄勺、長(zhǎng)柄鑷子、剪刀、消毒棉簽、注射器、75%酒精、油性筆、酒精燈等。樣品容器：滅菌廣口瓶、滅菌試管、采樣箱等。防護(hù)用品：隔離衣、口罩、白帽子、手套等。（二）、事發(fā)前的準(zhǔn)備工作調(diào)查用表：食物中毒事故報(bào)告登記表、食物中毒事故個(gè)案調(diào)查登記表、樣品采集（送檢）記錄單、衛(wèi)生監(jiān)督執(zhí)法文書(shū)等。取證工具：照相機(jī)、錄音機(jī)、攝像機(jī)等。相關(guān)文書(shū)：各種食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則、食品衛(wèi)生相關(guān)法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等。培養(yǎng)基：C-B保存液：保存病原菌亞硒酸鹽增菌液：培養(yǎng)沙門(mén)菌普通肉湯：培養(yǎng)金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌1%葡萄糖肉湯：培養(yǎng)鏈球菌7.5%NaCl肉湯：培養(yǎng)金黃色葡萄球菌嗜鹽增菌液：培養(yǎng)副溶血性弧菌堿性蛋白胨水：培養(yǎng)霍亂弧菌腸道增菌液：培養(yǎng)致瀉大腸埃希菌GN增菌液；培養(yǎng)志賀菌、變形桿菌LB1增菌液：培養(yǎng)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌硫乙醇酸鹽培養(yǎng)液：培養(yǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌布氏肉湯：培養(yǎng)空腸彎曲菌培養(yǎng)基：1.代表性原則：所采的樣本能真正反映被采樣的總體水平。2.典型性原則:應(yīng)根據(jù)中毒癥狀，可疑中毒物性質(zhì)采集可能含毒量最多的樣本，如中毒者吃剩的食物、餐具（未洗刷）。3.適時(shí)性原則：及時(shí)采樣，盡快送檢。4.適量性原則：采樣數(shù)量應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目和目的而定，但每份樣本不少于檢驗(yàn)需要量的三倍，以便供檢驗(yàn)、復(fù)檢和留樣備用。5.程序性原則：采樣、送檢、留樣和出具報(bào)告必須按規(guī)定的程序進(jìn)行，各階段都要有完整的手續(xù)，責(zé)任分明。（三）、采樣原則糞便：2ml(g)嘔吐物或洗胃液：50-100ml(g)食品：200-500ml(g)涂抹樣本：炊具、容器等血液：3-5ml尿液：不少于50ml其它樣本：接觸食品人員和廚師的肛拭和手拭等。（四）、樣本種類(lèi)和數(shù)量1.各種樣本的采集，要注意無(wú)菌操作，防止污染，以免影響檢驗(yàn)結(jié)果。2.采集肛拭人數(shù)，中毒事件規(guī)模較小，患者人數(shù)10人以下的，全部采樣；中毒事件規(guī)模較大，患者人數(shù)較多，至少應(yīng)對(duì)30%-50%臨床癥狀典型的患者進(jìn)行采集。3.采集樣本后，最好立即送檢，如條件不許可時(shí)，最好也不超過(guò)4小時(shí)。（五）、采樣及送檢注意事項(xiàng)4.氣溫較高的季節(jié)，樣本應(yīng)注意冷藏。5.送檢樣本必須有牢固的標(biāo)簽，標(biāo)明編號(hào)、采樣日期等，并嚴(yán)密封閉包裝。6.應(yīng)附詳細(xì)送檢單，填明樣本的名稱(chēng)、來(lái)源、件數(shù)、重量、采樣時(shí)間、送檢時(shí)間、檢驗(yàn)項(xiàng)目、受理編號(hào)、送樣人等。并向檢驗(yàn)人員說(shuō)明中毒表現(xiàn)。7.采樣記錄確保被采樣單位負(fù)責(zé)人簽字確認(rèn)。三.樣品的采集（一）采樣的目的和意義便于食品衛(wèi)生質(zhì)量監(jiān)督管理鑒別食品中是否存在有毒有害物質(zhì)。為新產(chǎn)品、新資源利用、新食品化工產(chǎn)品、新工藝投產(chǎn)前進(jìn)行衛(wèi)生鑒定。（二）樣品的種類(lèi)大樣，就是一整批；中樣，是從樣品中各部分取得的混合樣品，一般為200g；小樣，也稱(chēng)檢樣，做分析用的，一般為25g。（三）采樣的步驟采樣前調(diào)查→現(xiàn)場(chǎng)觀察→確定采樣方案→采樣→樣品封存→開(kāi)具采樣證明（四）采樣的要求1、嚴(yán)格遵守樣品采集的操作規(guī)程。2、所采樣品必須具有代表性。3、采樣操作要防止污染，防止變質(zhì)、損壞、丟失。4、不得加入防腐劑、固定劑等。5、樣品采集和現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定必須有二人以上參加。（五）食品微生物檢驗(yàn)的采樣方案1、食品衛(wèi)生學(xué)微生物檢驗(yàn)的取樣方案檢驗(yàn)?zāi)康模簷z驗(yàn)食品的微生物衛(wèi)生指標(biāo)是否合格。取樣方案有：ICMSF取樣方案；美國(guó)FDA的取樣方案；世界糧農(nóng)組織（FAO）取樣方案；我國(guó)的食品取樣方案。23(1)ICMSF的取樣方案國(guó)際食品微生物規(guī)范委員會(huì)(簡(jiǎn)稱(chēng)ICMSF)的取樣方案ICMSF提出的采樣基本原則，是根據(jù)（1）各種微生物本身對(duì)人的危害程度各有不同。（2）食品經(jīng)不同條件處理后，其危害度變化情況：①降低危害度；②危害度未變；③增加危害度，來(lái)設(shè)定抽樣方案并規(guī)定其不同采樣數(shù)。目前，加拿大、以色列等很多國(guó)家已采用此法作為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。在進(jìn)行詳細(xì)敘述之前，先解釋四個(gè)代號(hào)：

n：系指一批產(chǎn)品采樣個(gè)數(shù)。

c：系指該批產(chǎn)品的檢樣菌數(shù)中，超過(guò)限量的檢樣數(shù)，即結(jié)果超過(guò)合格菌數(shù)限量的最大允許數(shù)。

m：系指合格菌數(shù)限量，將可接受與不可接受的數(shù)量區(qū)別開(kāi)。

M：系指附加條件，判定為合格的菌數(shù)限量，表示邊緣的可接受數(shù)與邊緣的不可接受數(shù)之間的界限。

24(1)ICMSF的取樣方案ICMSF的采樣方法

有些實(shí)驗(yàn)室在每批產(chǎn)品中，僅采一個(gè)檢樣進(jìn)行檢驗(yàn)，該批產(chǎn)品是否合格，全憑這個(gè)檢樣來(lái)決定。ICMSF方法與此不同，它是從統(tǒng)計(jì)學(xué)原理來(lái)考慮，對(duì)一批產(chǎn)品，檢查多少檢樣，才能夠有代表性，才能客觀地反映出該產(chǎn)品的質(zhì)量而設(shè)定的。ICMSF方法中包括二級(jí)法及三級(jí)法兩種。二級(jí)法只設(shè)有n、с及m值，三級(jí)法則有n、c、m及M值。M即附加條件后判定合格的菌數(shù)限量。

25(1)ICMSF的取樣方案（1）二級(jí)抽樣方案。自然界中材料的分布曲線(xiàn)一般是正態(tài)分布，以其一點(diǎn)作為食品微生物的限量值，只設(shè)合格判定標(biāo)準(zhǔn)m值，超過(guò)m值的，則為不合格品。檢查在檢樣是否有超過(guò)m值的，來(lái)判定該批是否合格。以生食海產(chǎn)品魚(yú)為例n=5，c=0，m=100，n=5即抽樣5個(gè)，c=0即意味著在該批檢樣中，未見(jiàn)到有超過(guò)m值的檢樣，此批貨物為合格品。

（2）三級(jí)抽樣方案。設(shè)有微生物標(biāo)準(zhǔn)m及M值兩個(gè)限量如同二級(jí)法，超過(guò)m值的檢樣，即算為不合格品。其中以m值到M值的范圍內(nèi)的檢樣數(shù)，作為c值，如果在此范圍內(nèi)，即為附加條件合格，超過(guò)M值者，則為不合格。例如：冷凍生蝦的細(xì)菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)n=5，c=3，m=10，M=100，其意義是從一批產(chǎn)品中，取5個(gè)檢樣，經(jīng)檢樣結(jié)果，允許≤3個(gè)檢樣的菌數(shù)是在m、M值之間，如果有3個(gè)以上檢樣的菌數(shù)是在m、M值之間或一個(gè)檢樣菌數(shù)超過(guò)M值者，則判定該批產(chǎn)品為不合格品。

（3）．ICMSF對(duì)食品中微生物的危害度分類(lèi)與抽樣方案說(shuō)明

為了強(qiáng)調(diào)抽樣與檢樣之間的關(guān)系，ICMSF已經(jīng)闡述了把嚴(yán)格的抽樣計(jì)劃與食品危害程度相聯(lián)系的概念（ICMSF，1986）。在中等或嚴(yán)重危害的情況下使用二級(jí)抽樣方案，對(duì)健康危害低的則建議使用三級(jí)抽樣方案。26(2)美國(guó)FDA的取樣方案

食品藥品管理局(FDA)的取樣方案與ICMSF的取樣方案基本一致，所不同的是嚴(yán)重指標(biāo)苗所取的15、30、60個(gè)樣可以分別混合，混合的樣品量最大不超過(guò)375g。也就是說(shuō)所取的樣品每個(gè)為100g，從中取出25g，然后將15個(gè)25g混合成一個(gè)375g樣品，混勻后再取258作為試樣檢驗(yàn)，剩余樣品妥善保存?zhèn)溆谩?/p>

27(3)世界糧農(nóng)組織(AFO)規(guī)定的食品微生物質(zhì)量1979年版AFO食品與營(yíng)養(yǎng)報(bào)告中的食品質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的微生物學(xué)分析中列舉了各

種食品的微生物限量標(biāo)準(zhǔn)，由于是按ICMSF的取樣方案判定的，所以在此引用28我國(guó)食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)時(shí)食品取樣方案和數(shù)量，具體查閱國(guó)家食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)總則（GB4789.1-1994）。2、食物中毒微生物檢驗(yàn)的取樣檢驗(yàn)?zāi)康模翰檎沂澄镏杏泻尾≡?、人畜共患病病原菌檢驗(yàn)的取樣檢驗(yàn)?zāi)康模鸿b定畜禽及其產(chǎn)品是否帶有人獸共患的病原菌。（六）食品微生物檢驗(yàn)采樣方法采樣原則：能采取完整包裝的樣品就不拆開(kāi)取樣，必須拆開(kāi)包裝取樣的應(yīng)按無(wú)菌操作進(jìn)行取樣.1、液體樣品采樣方法

充分混勻后，無(wú)菌操作打開(kāi)包裝，用100mL無(wú)菌注射器抽取,注入無(wú)菌盛樣容器.2、半固體樣品采樣方法無(wú)菌操作打開(kāi)包裝，用無(wú)菌勺子從幾個(gè)部位挖取樣品，放入無(wú)菌容器。

3、固體樣品采樣方法大塊整體食品用無(wú)菌刀具和鑷子從不同的部位割取，并注意其代表性；小塊大包裝食品應(yīng)從不同部位的小塊上切取樣品，放入無(wú)菌容器。若為檢驗(yàn)食品的污染情況，可取表層樣品；若為檢驗(yàn)食品品質(zhì)的情況，應(yīng)從深部取樣。

4、冷凍食品采樣方法大包裝小塊冷凍食品按小塊個(gè)體采?。淮髩K冷凍食品可用無(wú)菌刀從不同部位削取或用無(wú)菌手鋸從凍塊上鋸取樣品，放入無(wú)菌容器。若為檢驗(yàn)食品污染情況，可取表層樣品；若為檢驗(yàn)食品品質(zhì)情況，應(yīng)從深部取樣。5、生產(chǎn)工序監(jiān)測(cè)采樣車(chē)間用水：從車(chē)間各龍頭采樣；車(chē)間臺(tái)面、用具、及加工售貨員手的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)：用5cm2孔無(wú)菌采樣板和5支無(wú)菌棉簽擦拭25cm2面積，擦拭后立即用無(wú)菌剪刀將棉簽頭剪入無(wú)菌容器中。車(chē)間空氣采樣：將5個(gè)直徑90mm的普通瓊脂平板分別置于車(chē)間的四角和中部，打開(kāi)平皿蓋5min，然后蓋蓋送檢。平皿（七）采樣標(biāo)簽的填寫(xiě)標(biāo)簽內(nèi)容主要：

編號(hào)、樣品名稱(chēng)、生產(chǎn)單位、生產(chǎn)日期、產(chǎn)品批號(hào)、產(chǎn)品數(shù)量、存放條件、采樣時(shí)間、采樣人姓名，現(xiàn)場(chǎng)情況。×××××采樣單樣品編號(hào)：━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━產(chǎn)品名稱(chēng)（商品名）______規(guī)格型號(hào)__________注冊(cè)商標(biāo)_____________生產(chǎn)廠家_______________通訊地址__________郵政編碼□□□□□□受檢地點(diǎn)_______________通訊地址__________郵政編碼□□□□□□采樣地點(diǎn)_______________采樣日期__________采樣基數(shù)______________生產(chǎn)日期_______________批號(hào)__________產(chǎn)品依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)__________有效成分及含量____________________________________________________________檢驗(yàn)?zāi)康豞_______________檢測(cè)項(xiàng)目_____________________________

采樣人仔細(xì)閱讀以下句子，然后簽字我認(rèn)真負(fù)責(zé)地填寫(xiě)了該樣品采樣單，承認(rèn)以上填寫(xiě)的合法性，被該采親單位所證實(shí)的樣品系按照采樣方法取得的，該樣品具有代表性、真實(shí)性和公正性。代表單位（章）代表單位（章）簽字簽字日期年月日日期年月日

備注

四.樣品的送檢要求1、要快速運(yùn)送：不要超過(guò)3小時(shí)；2、若路途遙遠(yuǎn)，可在1~5℃低溫下運(yùn)送；3、要注意防污染、防散漏、防變質(zhì)；4、要填寫(xiě)檢驗(yàn)申請(qǐng)單。五.樣品的處理方法（一）液體樣品（二）固體樣品（三）冷凍樣品(一)液體樣品的處理瓶裝液體樣品的處理盒裝或軟塑料包裝樣品的處理1.瓶裝液體樣品的處理

用點(diǎn)燃的酒精棉球灼燒瓶口滅菌，接著用石炭酸或來(lái)蘇爾消毒后的紗布蓋好，再用滅菌開(kāi)瓶器將蓋啟開(kāi)；含有二氧化碳的樣品可倒入500mL磨口瓶?jī)?nèi)，口勿蓋緊，覆蓋一滅菌紗布，輕輕搖蕩，待氣體全部逸出后，取樣25mL檢驗(yàn)。2.盒裝或軟塑料包裝樣品的處理

將其開(kāi)口處用75%酒精棉擦拭消毒，用滅菌剪子剪開(kāi)包裝，覆蓋上滅菌紗布或浸有消毒液的紗布在剪開(kāi)部分，直接吸取樣品25mL，或傾入另一滅菌容器中再取樣25mL檢驗(yàn)。（二）固體樣品的處理?yè)v碎均質(zhì)法剪碎振搖法研磨法整粒振搖法胃蠕動(dòng)均質(zhì)法1.搗碎均質(zhì)法將中樣(≥100g)剪碎或攪拌混勻，從中取25g放入帶225mL稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)杯中，8000~10000r/min均質(zhì)1~2min即可。2.剪碎振搖法將中樣(≥100g)剪碎或攪拌混勻，從中取25g檢樣進(jìn)一步剪碎，放入帶225mL稀釋液和直徑5mm左右玻璃珠的稀釋瓶中，蓋緊瓶蓋，用力快速振搖50次，振幅要大于40cm。3.研磨法

將中樣(≥100g)剪碎或攪拌混勻，從中取25g檢樣放入無(wú)菌乳缽中充分研磨后，再放入帶有225mL無(wú)菌稀釋液的稀釋瓶中，蓋緊蓋后充分搖勻。4.整粒振搖法直接稱(chēng)取25g整粒樣品置于帶有225mL稀釋液和直徑5mm左右玻璃珠的稀釋瓶中，蓋緊瓶蓋，用力快速振搖50次，振幅要大于40cm。（三）冷凍樣品冷凍樣品，先將中樣在0~4℃下解凍，時(shí)間不能超過(guò)18h，或在45℃下解凍，時(shí)間不能超過(guò)15min。再取檢樣25g做稀釋處理。各類(lèi)食品微生物檢樣樣品的采集與制備實(shí)例1、肉與肉制品樣品的采集與制備（一）樣品的采取a、生肉及臟器檢樣如是屠宰場(chǎng)后的畜肉，可于開(kāi)腔后，用無(wú)菌刀采取兩腿內(nèi)側(cè)肌肉各50g（或劈半后采取兩側(cè)背最長(zhǎng)肌肉各50g）；如是冷藏或銷(xiāo)售的生肉，可用無(wú)菌刀取腿肉或其他部位的肌肉100g。檢樣采取后放入無(wú)菌容器內(nèi)，立即送檢；如條件不許可時(shí)，最好不超過(guò)3h。送檢時(shí)應(yīng)注意冷藏，不得加入任何防腐劑。檢樣送往化驗(yàn)室應(yīng)立即檢驗(yàn)或放置冰箱暫存。

b、禽類(lèi)（包括家禽和野禽）鮮、凍家禽采取整只，放無(wú)菌容器內(nèi)；帶毛野禽可放清潔容器內(nèi)，立即送檢，以下處理要求同上述生肉。c、各類(lèi)熟肉制品包括醬鹵肉、肴肉、方圓腿、熟灌腸、熏烤肉、肉松、肉脯、肉干等，一般采取200g，熟禽采取整只，均放無(wú)菌容器內(nèi)，立即送檢，以下處理要求同上述生肉。d、臘腸、香肚等生灌腸采取整根、整只，小型的可采數(shù)根、數(shù)只，其總量不少于250g。

（二）檢樣的處理a、生肉及臟器檢樣的處理先將檢樣進(jìn)行表面消毒（在沸水內(nèi)燙3s~5s，或灼燒消毒），再用無(wú)菌剪子剪取檢樣深層肌肉25g，放入無(wú)菌乳缽內(nèi)用滅菌剪子剪碎后，加滅菌海砂或玻璃砂或玻璃砂研磨，磨碎后加入滅菌水225mL，混勻后即為1：10稀釋液。b、鮮、凍家禽檢樣的處理先將檢樣進(jìn)行表面消毒，用滅菌剪子或刀去皮后，剪取肌肉25g（一般可從胸部或腿部剪取），以下處理同生肉。帶毛野禽去毛后，同家禽檢樣處理。

c、各類(lèi)熟肉制品檢樣的處理直接切取或稱(chēng)取25g，以下處理同生肉。d、臘腸、香腸等生灌腸檢樣處理先對(duì)生灌腸表面進(jìn)行消毒，用滅菌剪子取內(nèi)容物25g，以下處理同生肉。注：以上樣品的采集和送檢及檢樣的處理均以檢驗(yàn)肉禽及其制品內(nèi)的細(xì)菌含量從而判斷其質(zhì)量鮮度為目的。如須檢驗(yàn)肉禽及其制品受外界環(huán)境污染的程度或檢索其是否帶有某種致病菌，應(yīng)用棉拭采樣法。

（三）棉拭采樣法和檢樣處理檢驗(yàn)肉禽及其制品受污染的程度，一般可用板孔5cm2的金屬制規(guī)板，壓在受檢物上，將來(lái)菌棉拭稍沾濕，在板孔5cm2的范圍內(nèi)揩抹多次，然后將板孔規(guī)板移壓另一點(diǎn)，用另一棉拭揩抹，如此共移壓揩抹10次，總面積50cm2，共用10只棉拭。每支棉拭在揩抹去完畢后應(yīng)立即剪斷或燒斷后投入盛有50ml滅菌水的三角燒瓶或大試管中，立即送檢。檢驗(yàn)時(shí)先充分振搖吸取瓶、管中的液體，作為原液，再按要求作10倍遞增稀釋。檢驗(yàn)致病菌，不必用規(guī)板，在可疑部位用棉拭揩抹即可。（四）檢驗(yàn)方法見(jiàn)菌落總數(shù)、大腸菌群測(cè)定及各有關(guān)致病菌和霉菌的檢驗(yàn)。

2、乳與乳制品樣品的采集與制備（一）樣品的采取和送檢a、散裝或大型包裝的乳品用滅菌刀、勺取樣，在移采另一件樣品前，刀、勺先清洗滅菌。采樣時(shí)應(yīng)注意部位等代表性。每件樣品數(shù)量不少于200g，放入滅菌容器內(nèi)及時(shí)送檢。鮮乳一般不應(yīng)超過(guò)3h，在氣溫較高或路途較遠(yuǎn)的情況下應(yīng)進(jìn)行冷藏，不得使用任何防腐劑。

b、小型包裝的乳品應(yīng)采取整件包裝，采樣時(shí)應(yīng)注意包裝的完整。各種小型包裝和乳與乳制品，每件樣品量為：生奶1瓶或1包；消毒奶1瓶或1包；奶粉1瓶或1包（大包裝者200g）；奶油1塊（113g）；酸奶1瓶或1罐；煉乳1瓶或1罐；奶酪（干酪）1個(gè)。c、成批產(chǎn)品對(duì)成批產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量鑒定時(shí)，其采樣數(shù)量每批以千分之一計(jì)算，不足千件者抽取1件。

（二）檢樣的處理a、鮮奶、酸奶以無(wú)菌操作去掉瓶口的紙罩紙蓋，瓶口經(jīng)火焰消毒后以無(wú)菌操作吸取25ml檢樣，放入裝有225ml滅菌生理鹽水的三角燒瓶?jī)?nèi)，振搖均勻（酸乳如有水分析出于表層，應(yīng)先去除）。b、煉乳將瓶或罐先用溫水洗凈表面，再用點(diǎn)燃酒精棉球消毒瓶或罐的上表面，然后用滅菌的開(kāi)罐器打開(kāi)罐（瓶），以無(wú)菌操作稱(chēng)取25g（ml）檢樣，放入裝有225ml滅菌生理鹽水的三角燒瓶?jī)?nèi)，振搖均勻。

c、奶油以無(wú)菌操作打開(kāi)包裝，取適量檢樣置于滅菌三角燒瓶?jī)?nèi)，在450C水浴或溫箱中加溫，溶解后立即將燒瓶取出，用滅菌吸管吸取25mL奶油放入另一含225ml滅菌生理鹽水或滅菌奶油稀釋液的燒瓶?jī)?nèi)（瓶裝稀釋液應(yīng)預(yù)置于450C水浴中保溫，作10倍遞增稀釋時(shí)所用的稀釋液亦同），振搖均勻，從檢樣融化到接種完畢的時(shí)間不應(yīng)超過(guò)30min。注：奶油稀釋液：格林氏液（配法：氯化鈉9g、氯化鉀0.12g、氯化鈣0.24g、碳酸氫鈉0.2g、蒸餾水1000ml）250mL、蒸餾水750ml、瓊脂1g、加熱溶解，分裝每瓶225ml，1210C滅菌15min。

d、奶粉罐裝奶粉的開(kāi)罐取樣法同煉乳處理，袋裝奶粉應(yīng)用蘸有75%酒精的棉球涂擦消毒袋口，以無(wú)菌操作開(kāi)封取樣，稱(chēng)取檢樣25g，放入裝有適量玻璃珠的滅菌三角燒瓶?jī)?nèi)，將225ml溫?zé)岬臏缇睇}水徐徐加入（先用少量生理鹽水將奶粉調(diào)成糊狀，再全部加入，以免奶粉結(jié)塊），振搖使充分溶解和混勻。

e、奶酪先用滅菌刀削去部分表面封蠟，用點(diǎn)燃的酒精棉球消毒表面，然后用滅菌刀切開(kāi)奶酪，以無(wú)菌操作切取表層和深層檢樣各少許，置于滅菌乳缽內(nèi)切碎，加入少量生理鹽水研成糊狀。（三）檢驗(yàn)方法見(jiàn)落總數(shù)、大腸菌群測(cè)定及各有關(guān)致病菌和霉菌的檢驗(yàn)。

六.致病菌檢驗(yàn)參考菌群的選擇蛋及蛋制品：沙門(mén)氏菌、葡萄球菌、變形桿菌等水產(chǎn)品海產(chǎn)品：鏈球菌、副溶血性弧菌乳制品：沙門(mén)氏菌、志賀氏菌、葡萄球菌、鏈球菌、蠟樣芽胞桿菌畜禽肉類(lèi)：腸道致病菌和致病性球菌米面類(lèi)：蠟樣芽胞桿菌、變形桿菌、酵母霉菌等罐頭：耐熱性芽胞桿菌、嗜熱脂肪桿菌、大芽胞桿菌、凝結(jié)芽胞桿菌七.樣品的檢驗(yàn)（一）、收樣：1、收到樣品后逐一核對(duì)驗(yàn)收，登記編號(hào)；如2004年收到的50號(hào)樣品，編號(hào)可寫(xiě)成：200400502、立即將樣品放在冰箱或冰盒中，并積極做好準(zhǔn)備工作。（二）、檢驗(yàn)