GB/T 45221-2025化學(xué)品EASZY試驗利用轉(zhuǎn)基因tg(cyp19a1b:GFP)斑馬魚胚胎通過雌激素受體檢測內(nèi)分泌活性物質(zhì)

ICS13300

CCSA8.0

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T45221—2025

化學(xué)品EASZY試驗利用轉(zhuǎn)基因tg

c19a1bGFP斑馬魚胚胎通過

(yp:)

雌激素受體檢測內(nèi)分泌活性物質(zhì)

Chemicals—EASZYassa—Detectionofendorineactivesubstancesactin

y,g

throuhestroenrecetorsusintanseictc19a1bGFPzebrafish

ggp,ggg(yp:)

embryos

2025-01-24發(fā)布2025-05-01實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T45221—2025

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范圍

1………………………1

規(guī)范性引用文件

2…………………………1

術(shù)語和定義縮略語

3、………………………1

試驗原理

4…………………2

受試物信息

5………………3

能力驗證化學(xué)品

6…………………………3

試驗準(zhǔn)備

7…………………4

試驗程序

8…………………6

數(shù)據(jù)分析和結(jié)果評價

9……………………7

質(zhì)量保證與質(zhì)量控制

10……………………8

結(jié)果報告

11…………………8

附錄資料性基因構(gòu)造

A()tg(cyp19a1b:GFP)………10

附錄資料性通過誘導(dǎo)表達(dá)來測定化學(xué)品產(chǎn)生雌激素活性的途徑

B()GFP………11

附錄資料性試驗流程

C()EASZY……………………13

附錄資料性試驗成像分析

D()EASZY………………15

附錄資料性后轉(zhuǎn)基因斑馬魚體內(nèi)熒光成像

E()96h…………………16

附錄資料性轉(zhuǎn)基因斑馬魚的體內(nèi)成像廣角熒光顯微鏡

F():………18

附錄資料性轉(zhuǎn)基因斑馬魚的體內(nèi)成像中圖像分析宏的使用示例

G():ImageJ……19

附錄資料性數(shù)據(jù)報告和分析

H()………………………24

附錄資料性數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析的流程圖

I()………………31

附錄資料性試驗中的濃度反應(yīng)關(guān)系示例

J()EASZY-………………32

參考文獻

……………………38

Ⅰ

GB/T45221—2025

前言

本文件按照標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任

。。

本文件由全國危險化學(xué)品管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC251)。

本文件起草單位廣東省科學(xué)院微生物研究所廣東省微生物分析檢測中心生態(tài)環(huán)境部固體廢物

:()、

與化學(xué)品管理技術(shù)中心廣東省生物技術(shù)研究院廣東省實驗動物監(jiān)測中心中檢科健天津檢驗檢測

、()、()

有限責(zé)任公司清華大學(xué)完美廣東日用品有限公司

、、()。

本文件主要起草人梅承芳許玫英許玉潔李建軍竇從從周小紅豐時運王鵬高亮劉洪英

:、、、、、、、、、、

曾國驅(qū)劉超武周麗麗劉純新肖億金高彩霞袁藝

、、、、、、。

Ⅲ

GB/T45221—2025

引言

利用轉(zhuǎn)基因斑馬魚胚胎通過雌激素受體檢測內(nèi)分泌活性物質(zhì)試驗

EASZY[tg(cyp19a1b:GFP)]

是一種基于機制的體內(nèi)篩選試驗旨在通過誘導(dǎo)啟動子驅(qū)動的綠色熒光蛋白的表

,cyp19a1b(GFP)

達(dá)檢測作為雌激素受體激動劑的內(nèi)分泌活性物質(zhì)試驗可用于檢測化學(xué)物質(zhì)對轉(zhuǎn)基因tg

,。EASZY

斑馬魚胚胎暴露的雌激素活性附錄描述了用于建立轉(zhuǎn)基因品系的基因

(cyp19a1b:GFP)96h。A

結(jié)構(gòu)

。

基因編碼的腦芳香化酶是一種負(fù)責(zé)從雄激素中合成雌激素的酶在魚類中

cyp19a1b,。,cyp19a1b

基因的表達(dá)僅限于放射狀膠質(zhì)細(xì)胞它是從胚胎期到成年期產(chǎn)生新神經(jīng)元的祖代細(xì)胞基因

,。cyp19a1b

的轉(zhuǎn)錄需要被激活的雌激素受體結(jié)合于雌激素反應(yīng)元件的配體復(fù)合物以及位于

(ERs)、(EREs)-ER

基因啟動子區(qū)域的半個共同參與調(diào)控還需要與膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)元件

cyp19a1bEREs。cyp19a1bx

結(jié)合的膠質(zhì)細(xì)胞特異性因子與序列的協(xié)同作用在基因的細(xì)胞特異性

(GxRE)ERE。GxREcyp19a1b

調(diào)控及其受雌激素的調(diào)控中發(fā)揮著重要作用

。

除雌激素外類固醇雄激素也可調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄活性對于可芳構(gòu)化的雄激素如睪

,cyp19a1b。(

酮這種調(diào)控預(yù)示著它們可被芳構(gòu)化為雌激素隨后與結(jié)合并誘導(dǎo)的表達(dá)而不可芳構(gòu)

),,ERscyp19a1b。

化的雄激素中酮睪酮無法誘導(dǎo)的表達(dá)二氫睪酮則已被證實具有雌激素樣活

,11cyp19a1b;5α-(DHT)

性它通過依賴性途徑誘導(dǎo)的表達(dá)這可能是由于通過羥基類固醇脫氫酶的作

,ERcyp19a1b。DHT3β-

用轉(zhuǎn)化為一種已知的雌激素類固醇二醇見附錄

———β-(B)。

在斑馬魚胚胎的端腦視前區(qū)和下丘腦中可檢測到和的表達(dá)但對于本文件中

、ERβ1ERβ2mRNA,

所處發(fā)育階段的斑馬魚胚胎在其大腦中未檢測到的轉(zhuǎn)錄體這表明和或可驅(qū)動芳

,ERα。ERβ1/ERβ2

香化酶的表達(dá)其中斑馬魚比對天然和合成雌激素具有更高的親和力這與已報道的人

B,ERβ2ERα,

亞型對這些物質(zhì)的親和力不同

ERs。

在轉(zhuǎn)基因tg斑馬魚中完美地模擬了斑馬魚大腦中內(nèi)源性的表

(cyp19a1b:GFP),GFPcyp19a1b

達(dá)因此測量tg胚胎中的報告基因可用于評估化學(xué)品誘導(dǎo)基因表

。,(cyp19a1b:GFP)GFP,cyp19a1b

達(dá)的能力

。

試驗技術(shù)已成功應(yīng)用于測試一批化合物包括天然和合成激素藥物農(nóng)藥工業(yè)化學(xué)

EASZY,、、、

品用于評估它們在tg斑馬魚胚胎中誘導(dǎo)的能力

,(cyp19a1b:GFP)GFP。

經(jīng)濟合作與發(fā)展組織修訂后的指南文件已將試驗確定為內(nèi)分泌

(OECD)No.150EASZYOECD

評估概念框架中的級魚類篩選試驗即一種提供關(guān)于特定內(nèi)分泌干擾機制通路數(shù)據(jù)的體內(nèi)試驗作

3,/。

為級篩選試驗試驗可通過是否誘導(dǎo)由調(diào)控的啟動子驅(qū)動的來識別

3,EASZYERcyp19a1bGFP,ER

信號通路上的活性和非活性受試物質(zhì)試驗數(shù)據(jù)不宜用于化學(xué)品的風(fēng)險評估

。。

Ⅳ

GB/T45221—2025

化學(xué)品EASZY試驗利用轉(zhuǎn)基因tg

c19a1bGFP斑馬魚胚胎通過

(yp:)

雌激素受體檢測內(nèi)分泌活性物質(zhì)

1范圍

本文件描述了利用轉(zhuǎn)基因tg斑馬魚胚胎通過雌激素受體檢測內(nèi)分泌活性物質(zhì)的

(cyp19a1b:GFP)

試驗方法包括試驗原理受試物信息能力驗證化學(xué)品試驗準(zhǔn)備試驗程序數(shù)據(jù)分析和結(jié)果

EASZY,、、、、、

評價質(zhì)量保證與質(zhì)量控制結(jié)果報告

、、。

本文件適用于篩選和評估化學(xué)品中的內(nèi)分泌活性物質(zhì)

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款其中注日期的引用文

。,

件僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于

,;,()

本文件

。

水質(zhì)物質(zhì)對蚤類大型蚤急性毒性測定方法

GB/T13266()

3術(shù)語和定義縮略語

、

31術(shù)語和定義

.

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

311

..

激