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722分光光度計(jì)的使用生物化學(xué)基本實(shí)驗(yàn)技能訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆?22分光光度計(jì)的構(gòu)造和原理使用方法掌握722分光光度計(jì)使用方法問題:如何測(cè)定血清中某一種物質(zhì)的含量?如,葡萄糖,清蛋白,丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶,尿素…物質(zhì)特性物質(zhì)對(duì)光的吸收是選擇性的,利用被測(cè)物質(zhì)對(duì)某波長(zhǎng)的光的吸收來了解物質(zhì)的特性,是光譜法的基礎(chǔ)。I0入射光I透過光比色分析法當(dāng)一束平行單色光通過含有吸光物質(zhì)的稀溶液時(shí),溶液的吸光度與吸光物質(zhì)濃度、液層厚度乘積成正比。原理原理I0入射光I透過光透光率(T)=I/I0吸光值(A)=-lgT=-lgI/I0Lamber-Beer定律,是比色分析的基礎(chǔ)。定律溶液吸光度溶液吸光系數(shù)溶液濃度溶液層厚度A=K?C?LI0入射光I透過光吸光度與濃度的關(guān)系A(chǔ)=
LcA0.00光源檢測(cè)器AA0.22光源檢測(cè)器0.42光源檢測(cè)器LL推導(dǎo)A標(biāo)=KC標(biāo)L,A測(cè)=KC測(cè)LA標(biāo)/
C標(biāo)=KL,A測(cè)/C測(cè)=KLA標(biāo)/
C標(biāo)=
A測(cè)/C測(cè)722分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)分光光度計(jì)的基本部件樣品蓋樣品架透射比吸光度濃度因子0.543按鍵MODE功能0%100%波長(zhǎng)指示窗口拉桿500520顯示屏波長(zhǎng)旋鈕比色皿(1)接通電源,預(yù)熱10min。(2)調(diào)節(jié)波長(zhǎng)旋鈕至所需波長(zhǎng)。(3)比色杯依次放入檢測(cè)室比色杯架內(nèi),空白液對(duì)準(zhǔn)光路。(4)檢查722型分光光度計(jì)的旋鈕,使選擇鈕指向透光度“T”,按“0”鍵,蓋上檢測(cè)室蓋(光門打開),按“100”鍵,重復(fù)數(shù)次,直至達(dá)到穩(wěn)定。(5)吸光度A的測(cè)量:調(diào)整選擇鈕顯示“A”,讀數(shù)顯示為“.000”。如果不是此值,調(diào)消光零旋鈕。再移動(dòng)拉桿,使標(biāo)準(zhǔn)液和待測(cè)液分別置于光路,讀取“A”值。(6)打開檢測(cè)室蓋,取出比色杯,傾去比色液,用水沖洗干凈,倒置于鋪有濾紙的平皿中。儀器操作選擇波長(zhǎng)拉比色桿時(shí)動(dòng)作要輕。2.手持比色杯的毛面(粗糙面),不可用手或?yàn)V紙等摩擦比色杯的透光面;比色杯先用蒸餾水沖洗后,再用比色液潤(rùn)洗才能裝比色液。盛裝比色液時(shí),約達(dá)比色杯2/3體積,不宜過多或過少;若不慎使溶液流至比色杯外,須用棉花或擦鏡紙吸干,才能放入比色架。比色杯用后應(yīng)立即用自來水沖洗干凈。3.測(cè)定溶液濃度的吸光度值在0.1~0.8之間最符合光吸收定律,線性好、讀數(shù)誤差較小。注意事項(xiàng)
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