眉睫毛的毛發(fā)滋養(yǎng)功效測(cè)試方法

T/XXXXICS71.100.70T/XXXXC2682Y42團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/XXXX000-2024T/XXXX000-2024眉/睫毛的毛發(fā)滋養(yǎng)功效測(cè)試方法Eyebrow/EyelashHairNourishingEfficacyTestMethod2024-XX-XX發(fā)布2024-XX-XX實(shí)施2024-XX-XX發(fā)布2024-XX-XX實(shí)施XXXXXXX發(fā)布方法編號(hào)眉/睫毛的毛發(fā)滋養(yǎng)功效測(cè)試方法1范圍本方法規(guī)定了通過(guò)測(cè)定真人眉/睫毛毛發(fā)脂質(zhì)中十八甲基二十碳烯酸（簡(jiǎn)稱18-MEA）和神經(jīng)酰胺的含量（第一法），以及通過(guò)真人發(fā)束（第二法）來(lái)評(píng)估眉/睫毛產(chǎn)品滋養(yǎng)功效的測(cè)試方法，包括但不限于眉筆、眉粉筆、眉膠、睫毛膏、睫毛打底產(chǎn)品等。作用于人體眉睫毛外其它部位毛發(fā)的產(chǎn)品滋養(yǎng)功效可參考引用。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。國(guó)家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布《化妝品功效宣稱評(píng)價(jià)規(guī)范》的公告（2021年第50號(hào)）國(guó)家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布《化妝品分類規(guī)則和分類目錄》的公告（2021年第49號(hào)）T/GDCA025-2023發(fā)用產(chǎn)品頭發(fā)滋養(yǎng)功效測(cè)評(píng)方法T/GDCA017-2022發(fā)用產(chǎn)品護(hù)發(fā)功效測(cè)評(píng)方法T/CAFFCI68-2023化妝品滋養(yǎng)功效測(cè)試方法3基本原則3.1被測(cè)化妝品應(yīng)為理化和衛(wèi)生檢驗(yàn)合格的產(chǎn)品，人體試驗(yàn)之前應(yīng)先按照《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》完成必要的安全性評(píng)價(jià)并出具書面證明，安全性評(píng)價(jià)不合格的樣品不再進(jìn)行人體檢驗(yàn)。3.2人體試驗(yàn)應(yīng)符合國(guó)際赫爾辛基宣言的基本原則，要求受試者簽署知情同意書并采取必要的醫(yī)學(xué)防護(hù)措施，最大程度地保護(hù)受試者的利益。4術(shù)語(yǔ)和定義4.1滋養(yǎng)nourishing有助于為施用部位提供滋養(yǎng)作用。注：定義來(lái)源為國(guó)家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布《化妝品分類規(guī)則和分類目錄》的公告（2021年第49號(hào)）。4.2毛發(fā)滋養(yǎng)hairnourishing有助于為毛發(fā)提供滋養(yǎng)作用，促進(jìn)毛發(fā)光澤度、順滑度、韌性等提升。第一法眉/睫毛毛發(fā)成分分析法5原理毛發(fā)中十八甲基二十碳烯酸（簡(jiǎn)稱18-MEA）和神經(jīng)酰胺的含量對(duì)毛發(fā)的物理性能起著主要的作用，影響著毛發(fā)的光澤度、色澤、光滑度和柔軟度等各方面的特性，因此，可通過(guò)檢測(cè)產(chǎn)品使用前后眉/睫毛毛發(fā)中18-MEA、神經(jīng)酰胺含量的變化來(lái)評(píng)價(jià)眉/睫毛產(chǎn)品滋養(yǎng)功效。6試驗(yàn)條件和志愿者要求6.1試驗(yàn)環(huán)境條件測(cè)試環(huán)境溫度：20℃～25℃，并對(duì)溫度實(shí)施必要的監(jiān)測(cè)。6.2志愿者要求6.2.1受試者人數(shù)按人選和排除標(biāo)準(zhǔn)選擇合格的受試者入組，并應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況考慮可能脫落的人數(shù)比例，確保最終完成有效人數(shù)不少于30人。6.2.2受試者納入標(biāo)準(zhǔn)1）年齡介于18-60歲，身體健康人群；2）眉/睫部左右兩側(cè)毛發(fā)外觀無(wú)明顯差異者；3）能理解測(cè)試過(guò)程，自愿參加試驗(yàn)并簽署知情同意書者；4）能夠按照要求使用產(chǎn)品者。6.2.3受試者排除標(biāo)準(zhǔn)1）懷孕或哺乳期婦女，或近期有備孕計(jì)劃者；2）嚴(yán)重系統(tǒng)疾病、免疫缺陷或自身免疫性疾病者；3）受試部位近3個(gè)月沒有接受過(guò)皮膚治療、紋眉等醫(yī)美及其他可能影響結(jié)果的測(cè)試；4）有銀屑病、濕疹、異位性皮炎等現(xiàn)患皮膚病者；5）近1個(gè)月內(nèi)口服或外用過(guò)皮質(zhì)類固醇激素等抗炎藥物者；6）受試部位正參加其他臨床試驗(yàn)者。6.2.4受試者限制1）在試驗(yàn)期間受試部位應(yīng)使用實(shí)驗(yàn)室提供的試驗(yàn)產(chǎn)品，該試驗(yàn)產(chǎn)品替換原自用的同類型產(chǎn)品，且受試部位不可使用其他具有同類功效的產(chǎn)品，試驗(yàn)期間應(yīng)保持日常生活、作息、飲食等習(xí)慣不變；2）測(cè)試當(dāng)天早上，受試部位不使用產(chǎn)品。7試劑和材料7.1真人毛發(fā)（眉毛或睫毛）7.2二氯乙烷（分析純AR）7.3乙醇（分析純AR）7.4十二烷基硫酸鈉（分析純AR）7.5燒杯7.6橡膠手套7.7鑷子7.8剪刀7.9修眉刀8儀器8.1高效液相色譜儀：可測(cè)定毛發(fā)中神經(jīng)酰胺含量的設(shè)備8.2飛行時(shí)間二次離子質(zhì)譜儀：可測(cè)定毛發(fā)中18-MEA含量的設(shè)備8.3索氏提取器8.4恒溫水浴鍋8.5電子分析天平（精確十萬(wàn)分之一）8.6恒溫恒濕空調(diào)或恒溫恒濕箱8.7布氏漏斗8.8旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀9測(cè)試步驟9.1神經(jīng)酰胺含量測(cè)定9.1.1由工作人員用酒精棉片或水潤(rùn)濕的一次性擦臉巾擦拭受試部位，隨后采用鑷子和修眉刀/剪刀，獲取并稱量單個(gè)受試者眉/睫毛發(fā)0.1~0.5g樣本。9.1.2將毛發(fā)樣本浸泡在0.5%的十二烷基硫酸鈉溶液中，將其一同置于已恒溫至（40.0±1.0）℃的水浴鍋中水浴30min，用布氏漏斗過(guò)濾并用清水沖洗至少3次。9.1.3將毛發(fā)置于索氏提取器中，用體積比為2:1的二氯乙烷和乙醇在70℃下萃取2h，隨后在相同條件下進(jìn)行第二次萃取，將得到的萃取液合并后進(jìn)行過(guò)濾操作，真空旋干后得到毛發(fā)粗提物。9.1.4用高效液相色譜儀測(cè)定毛發(fā)粗提物中神經(jīng)酰胺的含量。采用C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇和異丙醇的混合溶液（體積比為55：45），紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm，柱溫為30℃，檢測(cè)池溫度為40℃。對(duì)毛發(fā)粗提物進(jìn)行神經(jīng)酰胺定量檢測(cè)，作為產(chǎn)品使用前神經(jīng)酰胺初始值（A用樣前）。9.1.5讓受試者按要求單次或連續(xù)使用待測(cè)產(chǎn)品，并設(shè)置不同的訪視點(diǎn)，可為2周、4周等，具體間隔依據(jù)產(chǎn)品特性或?qū)嶒?yàn)需求定，試驗(yàn)周期以不低于2周為宜。9.1.6在特定的訪視點(diǎn)，按9.1.1~9.1.4操作進(jìn)行再次取樣分析，記為產(chǎn)品使用后測(cè)量值（A用樣后）。兩次毛發(fā)樣本的重量需保持一致，重量偏差小于±0.00005g。9.2十八甲基二十碳烯酸含量測(cè)定9.2.1按9.1.1~9.1.3進(jìn)行操作，采用飛行時(shí)間二次離子質(zhì)譜儀測(cè)定十八甲基二十碳烯酸18-MEA的含量。采集面積：50μm×50μm，采集時(shí)間：3min，次級(jí)離子種類：正離子和負(fù)離子。對(duì)毛發(fā)粗提物進(jìn)行18-MEA定量檢測(cè)，記為產(chǎn)品使用前初始值（B用樣前）。9.2.2讓受試者按要求單次或連續(xù)使用待測(cè)產(chǎn)品，并設(shè)置不同的訪視點(diǎn)，可為2周、4周等，具體間隔依據(jù)產(chǎn)品特性或?qū)嶒?yàn)需求定，試驗(yàn)周期以不低于2周為宜。9.2.3在特定的訪視點(diǎn)，按9.2.1操作進(jìn)行再次取樣分析，記為產(chǎn)品使用后測(cè)量值（B用樣后）。兩次毛發(fā)樣本的重量需保持一致，重量偏差小于±0.00005g。第二法真人發(fā)束替代法10原理人體毛發(fā)的主要成分為角蛋白（約占80%以上），它是由毛干和毛囊兩部分組成，毛干可分為毛小皮、皮質(zhì)和髓質(zhì)三層。眉毛、睫毛、頭發(fā)、腋毛等人體毛發(fā)結(jié)構(gòu)和組成幾乎一樣，故可用真人頭發(fā)替代眉毛、睫毛等毛發(fā)進(jìn)行測(cè)試。本方法通過(guò)產(chǎn)品使用前后對(duì)比，或樣品組與空白組對(duì)比，測(cè)量發(fā)束的梳理性、光澤度、摩擦力以及蓬松度參數(shù)變化，來(lái)評(píng)價(jià)試驗(yàn)產(chǎn)品滋養(yǎng)效果。11試驗(yàn)條件11.1測(cè)試環(huán)境溫、濕度要求：環(huán)境溫度為（21±2）℃、相對(duì)濕度為（50±10）%，并并對(duì)溫濕度實(shí)施必要的監(jiān)測(cè)。11.2試驗(yàn)過(guò)程中的測(cè)試條件應(yīng)保持一致，如測(cè)試人員、場(chǎng)所、環(huán)境、儀器設(shè)備及其參數(shù)設(shè)置等。12試劑耗材12.1發(fā)束：試驗(yàn)產(chǎn)品的測(cè)試應(yīng)使用同一批次、相同規(guī)格的發(fā)束，且發(fā)束之間應(yīng)無(wú)明顯差異。發(fā)束規(guī)格：亞洲真人發(fā)束，扁平直發(fā)，發(fā)束長(zhǎng)度不少于20cm、寬度不小于2cm，受損發(fā)質(zhì)（經(jīng)染燙處理或人為損傷處理）更優(yōu)。注：可借助頭發(fā)測(cè)試儀對(duì)發(fā)束進(jìn)行差異性篩選，例如，采用多功能頭發(fā)測(cè)試儀Instron或相當(dāng)者，對(duì)購(gòu)入的批量發(fā)束進(jìn)行梳理性能篩選，篩選出梳理力/功相近的發(fā)束作為本次試驗(yàn)入組發(fā)束。12.2梳子：防靜電梳子，齒間距不大于1.1mm，梳齒長(zhǎng)度大于2cm，梳子長(zhǎng)度不少于10cm（不含梳子把柄）。12.3發(fā)束清洗液：10%十二烷基硫酸鈉水溶液（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）13儀器設(shè)備13.1蓬松度測(cè)試儀（主要參數(shù)）：具有測(cè)量發(fā)束蓬松度的儀器，例如SHUFFLE或相當(dāng)者。13.2摩擦性測(cè)試儀（主要參數(shù)）：具有測(cè)量發(fā)束摩擦力/功的儀器，例如DIA-STRON、Instron、質(zhì)構(gòu)儀（SMS）或相當(dāng)者。13.3光澤度測(cè)試儀（主要參數(shù)）：具有測(cè)量發(fā)束光澤度的儀器，例如SAMBAHAIR頭發(fā)光澤度測(cè)試儀或相當(dāng)者。13.4頭發(fā)梳理儀（次要參數(shù)）：具有測(cè)量發(fā)束梳理力/功的儀器，例如DIA-STRON、Instron、MTT175、質(zhì)構(gòu)儀（SMS）或相當(dāng)者。13.5拉斷測(cè)試儀（次要參數(shù)）：具有測(cè)量發(fā)束拉斷力/功的儀器，例如DIA-STRON、Instron、MTT175、質(zhì)構(gòu)儀（SMS）或相當(dāng)者。13.6頭發(fā)直徑測(cè)試儀：具有測(cè)量頭發(fā)直徑大?。ù旨?xì)）的儀器，例如螺旋測(cè)微器（又稱千分尺），精度0.01mm。14測(cè)試步驟14.1試驗(yàn)前，取同等用量的10%十二烷基硫酸鈉水溶液（SLS）水溶液將發(fā)束清洗干凈。若為濕梳理性測(cè)試，清洗后可直接使用；若為其他參數(shù)測(cè)試，則清洗后捋去多余水分，并將其懸掛于試驗(yàn)環(huán)境中晾干。14.2自身前后對(duì)比試驗(yàn)，每個(gè)試驗(yàn)產(chǎn)品需測(cè)量（5±1）個(gè)發(fā)束；組間對(duì)比試驗(yàn)，每組需測(cè)量（5±1）個(gè)發(fā)束，每個(gè)發(fā)束平行測(cè)試5次，取其平均值。6個(gè)發(fā)束剔除偏離最大的發(fā)束，保留5個(gè)有效發(fā)束數(shù)據(jù)。14.3梳理性測(cè)試14.3.1將發(fā)束浸于清水中拿出，用梳子將濕發(fā)束由發(fā)尾至發(fā)根輕輕梳理，正反面各梳理2次，避免發(fā)絲纏結(jié)。用食指與中指并緊夾住發(fā)束，捋去多余水分直至無(wú)法捋出水滴。測(cè)量產(chǎn)品使用前發(fā)束濕梳理力/功，記為濕發(fā)梳理性初始值。14.3.2將發(fā)束懸掛于試驗(yàn)環(huán)境條件中晾干（8h~24h），用梳子將干發(fā)束由發(fā)尾至發(fā)根輕輕梳理，正反面各梳理2次，避免發(fā)絲纏結(jié)。測(cè)量產(chǎn)品使用前發(fā)束干梳理力/功，記為干發(fā)梳理性初始值。14.4蓬松度/摩擦性/光澤度測(cè)試按14.2要求測(cè)量產(chǎn)品使用前發(fā)束蓬松度/摩擦性/光澤度，記為蓬松度/摩擦性/光澤度初始值。14.5拉斷測(cè)試發(fā)束寬度要求不做限制，每個(gè)發(fā)束剪取5根頭發(fā)，確保頭發(fā)直徑偏差不高于1%，測(cè)量產(chǎn)品使用前頭發(fā)拉斷力，記為拉斷力初始值。14.6將試驗(yàn)產(chǎn)品按產(chǎn)品使用說(shuō)明（淋洗型或駐留型）施用于發(fā)束上，單次或連續(xù)使用，設(shè)置不同的訪視點(diǎn)，可為單次、3天、7天、4周等，具體間隔依據(jù)產(chǎn)品特性或?qū)嶒?yàn)需求定。14.7在設(shè)置的訪視點(diǎn)按照14.3~14.5步驟進(jìn)行再次測(cè)量，記為產(chǎn)品使用后測(cè)量值。14.8試驗(yàn)結(jié)束后，取同等用量的10%十二烷基硫酸鈉水溶液將發(fā)束清洗干凈，將發(fā)束懸掛于試驗(yàn)環(huán)境條件中晾干。15數(shù)據(jù)分析應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料表示為：均值±標(biāo)準(zhǔn)差，并進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布要求，自身前后的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，否則采用2個(gè)相關(guān)樣本秩和檢驗(yàn)；試驗(yàn)組（側(cè)）和對(duì)照組（側(cè)）之間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)（配對(duì)t檢驗(yàn)）或秩和檢驗(yàn)。所有統(tǒng)計(jì)分析均為雙尾檢驗(yàn)，顯著性水平為α=0.05。16結(jié)果判定16.1第一法：與產(chǎn)品使用前相比，產(chǎn)品使用后任一訪視點(diǎn)神經(jīng)酰胺或18-MEA有顯著性升高（P＜0.05）；或產(chǎn)品使用前后，產(chǎn)品組（側(cè)）任一訪視點(diǎn)神經(jīng)酰胺或18-MEA變化值顯著性優(yōu)于（P＜0.05）對(duì)照組（側(cè)），即可認(rèn)為試驗(yàn)產(chǎn)品具有滋養(yǎng)功效。16.2第二法：與產(chǎn)品使用前相比，產(chǎn)品使用后任一訪視點(diǎn)至少2個(gè)主要參數(shù)有顯著性改善（P＜0.05），或任一主要參數(shù)和至少2個(gè)次要參數(shù)有顯著性改善（P＜0.05）；或產(chǎn)品使用前后，產(chǎn)品組（側(cè)）任一訪視點(diǎn)至少2個(gè)主要參數(shù)變化值顯著性優(yōu)于（P＜0.05）對(duì)照組（側(cè)），或任一主要參數(shù)和至少2個(gè)次要參數(shù)變化值顯著性優(yōu)于（P＜0.05）對(duì)照組（側(cè)），即可認(rèn)為試驗(yàn)產(chǎn)品具有滋養(yǎng)功效。

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