普通和幾種特殊光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)及使用

實(shí)驗(yàn)一普通和幾種特殊光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)及使用

[目的要求]1、掌握普通光學(xué)顯微鏡的主要構(gòu)造及其性能;2、掌握低、高倍鏡的正規(guī)使用方法，反復(fù)練習(xí)，觀察時(shí)保持兩眼同時(shí)睜開(kāi)和兩手并用。3、掌握各種特殊顯微鏡的原理、構(gòu)造和使用方法。[實(shí)驗(yàn)用品]光學(xué)顯微鏡、四種特殊光學(xué)顯微鏡[實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法]一、普通光學(xué)顯微鏡（一）構(gòu)造：機(jī)械部分、照明部分和光學(xué)部分1.機(jī)械部分鏡座鏡柱鏡臂鏡筒調(diào)節(jié)器物鏡轉(zhuǎn)換器(旋轉(zhuǎn)盤(pán))載物臺(tái)2.照明部分集光器:集光鏡虹彩光圈反光鏡3.光學(xué)部分目鏡常備有2—3個(gè)目鏡，上面刻有5x、10x、15x等符號(hào)以示其放大倍數(shù)，可選擇使用，一般常用的目鏡倍數(shù)為10x。物鏡(顯微鏡分辨性能高低的關(guān)鍵部件)主要性能指標(biāo)——放大倍數(shù)和鏡口率(如10/0.25,40／0.65和100／1.25)，鏡筒長(zhǎng)度和所要求的蓋玻片厚度(如160／0.17)。

（二）顯微鏡的使用方法顯微鏡在使用前，應(yīng)先檢查一下它的各個(gè)部件是否完整和正常，并進(jìn)行必要的清潔工作，然后將顯微鏡放置在自己左肩前方的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，離桌子邊緣3—6cm為宜，以便觀察。

1.低倍鏡的使用方法

1）對(duì)光

2）放置玻片標(biāo)本

3）調(diào)節(jié)焦距

2.高倍鏡的使用方法

1）一定要先在低倍鏡下找到要觀察的標(biāo)本物像后，再把需要放大的部分移至視野正中，并把物像調(diào)節(jié)到最清晰的程度。

2）轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器3.油鏡的使用方法1）在高倍鏡下找到所要觀察的標(biāo)本，移至視野中心。2）把集光器上升到最高位置，光闌開(kāi)到最大。3）移開(kāi)高倍鏡，在要觀察的部位的蓋玻片上滴加一滴香柏油作為介質(zhì)。4）稍稍上升鏡筒或下降載物臺(tái)，使油鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔，慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)螺旋，使油鏡與油滴接觸，再小心地使它貼近蓋玻片表面。5）用眼觀察目鏡，微微上升或下降載物臺(tái)，直到出現(xiàn)清晰的物像。6）油鏡使用完畢，先用拭鏡紙蘸少許二甲苯將鏡頭上的大部分油去掉，再用干拭鏡紙擦拭。擦拭時(shí)要順鏡頭的直徑方向，不要沿鏡頭的圓周擦。（三）注意事項(xiàng)

拿顯微鏡時(shí)，要一手緊握鏡臂，一手托住鏡座，不要單手提拿，以防目鏡或其他零件滑落。顯微鏡不可放置在實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣，以免碰翻落地。不要隨意取下部件，以免灰塵落入內(nèi)部。保持顯微鏡的清潔。光學(xué)和照明部分的鏡面只能用擦鏡紙輕輕擦拭，切勿用手指、手帕和綢布等擦摸。機(jī)械部分可用布擦拭。顯微鏡使用完畢后，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)上升鏡筒或下降載物臺(tái)，取下標(biāo)本，轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器使物鏡離開(kāi)通光孔，下降鏡筒或上升載物臺(tái)，使接近物鏡，垂直反光鏡，下降集光器，關(guān)閉虹彩光闌二、暗視野顯微鏡(一)

原理和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)原理:利用光學(xué)上的丁達(dá)爾現(xiàn)象設(shè)計(jì)的。

結(jié)構(gòu)特點(diǎn):

中央遮光板或暗視野聚光器，從而使光線(xiàn)改變途徑，傾斜地照射在觀察的標(biāo)本上，照明光線(xiàn)在聚光器頂透鏡（或蓋片）的上表面發(fā)生全反射，因而背景是暗的。標(biāo)本被斜射光照射發(fā)生反射或散射，在黑暗的背景下呈現(xiàn)明亮的像。

只能看到物體的存在和運(yùn)動(dòng)，不能辨清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)?？煞直?.004um以上的微粒的存在和運(yùn)動(dòng)，可用以觀察活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)微粒的運(yùn)動(dòng)等。（二）使用方法

1．裝暗視野聚光器。2．選用強(qiáng)的光源，但又要防止直線(xiàn)光線(xiàn)進(jìn)入物鏡，一般用顯微鏡燈照明。3．在聚光器和標(biāo)本片之間要加一滴香柏油。4．升降集光器，將集光鏡的焦點(diǎn)對(duì)準(zhǔn)被檢物體，應(yīng)首先進(jìn)行中心調(diào)節(jié)，使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴(yán)格位于一直線(xiàn)上。5．以下操作方法同普通顯微鏡。

三、相差顯微鏡

(一)

原理和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)原理：相差顯微鏡能夠改變直射光或衍射光的相位，并且利用光的衍射和干涉現(xiàn)象，把相差變成振幅差(明暗差)，可用以觀察活細(xì)胞或未染色標(biāo)本。

結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：用環(huán)狀光闌代替可變光闌，用帶相板的物鏡(通常標(biāo)有Ph的標(biāo)記)代替普通物鏡，并帶有一個(gè)合軸用的望遠(yuǎn)鏡。(二)使用方法1．相差裝置的調(diào)換安裝將環(huán)狀光闌裝在聚光器支架上，把綠色濾光片放在上面，換上相差物鏡。2．調(diào)焦3．合鈾調(diào)整(三)觀察觀察活細(xì)胞，可清楚地分辨細(xì)胞的形態(tài)，細(xì)胞核、核仁以及胞質(zhì)中存在的顆粒狀結(jié)構(gòu)。用途：觀察活細(xì)胞和未經(jīng)染色的玻片標(biāo)本四、熒光顯微鏡

(一)原理和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)原理：利用一個(gè)高發(fā)光效率的點(diǎn)光源，經(jīng)過(guò)濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長(zhǎng)的光(如紫外光365nm或紫藍(lán)光420nm)作為激發(fā)光，激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后，再通過(guò)物鏡和目鏡的放大進(jìn)行觀察。這樣在強(qiáng)烈的對(duì)襯背景下，即使熒光很微弱也易辨認(rèn)，靈敏性高。主要用于觀察具有熒光特性的細(xì)胞結(jié)構(gòu)或被熒光染料著色的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分。結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：普通光學(xué)顯微鏡加上一些附件熒光光源（超高壓汞燈）激發(fā)濾片阻斷濾片按光路分兩種：1．透射式熒光顯微鏡2．落射式熒光顯微鏡（二）使用方法1．打開(kāi)燈源，預(yù)熱幾分鐘。2．透射式熒光顯微鏡需在燈源與聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾片，在物鏡的后面裝上相應(yīng)的阻斷濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片／雙色束分離器／阻斷濾片的插塊。3．用低倍鏡觀察，調(diào)整光源中心，使其位于整個(gè)照明光斑的中央。4．放置標(biāo)本片，調(diào)焦后即可觀察。注意事項(xiàng)：未裝濾光片不要用眼直接觀察；用油鏡觀察標(biāo)本時(shí)，必須用無(wú)熒光的特殊油鏡；汞燈關(guān)閉后，不要立即重新打開(kāi)，須經(jīng)5分鐘后才能再次啟動(dòng)，否則會(huì)不穩(wěn)定，影響汞燈壽命。熒光顯微鏡照片（微管呈綠色、DNA藍(lán)色）

五、倒置顯微鏡光學(xué)原理與普通光學(xué)顯微鏡原理基本相同，主要差別是倒置顯微鏡的光源安裝在標(biāo)本的上方，物鏡裝