DB50T 1251-2022 雜交狼尾草青貯質(zhì)量評定　　

ICS65.120CCSB25DB50重慶市市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB50/T1251—2022本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由重慶市農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會提出并歸口。本文件起草單位：重慶市畜牧科學(xué)院、西南民族大學(xué)。本文件主要起草人：何瑋、冉啟凡、陳靜、關(guān)皓、范彥、徐遠(yuǎn)東、朱瑞芬、向白菊、何德超。1DB50/T1251—2022雜交狼尾草青貯質(zhì)量評定本文件規(guī)定了雜交狼尾草（Pennisetumamericanum×P.purpureum）青貯質(zhì)量評定的術(shù)語和定義、技術(shù)要求、檢測方法。本文件適用于雜交狼尾草青貯飼料的質(zhì)量評定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6432飼料中粗蛋白的測定凱氏定氮法GB/T6435飼料中水分的測定GB10468水果和蔬菜產(chǎn)品pH值的測定方法GB13078飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)NY/T2129飼草產(chǎn)品抽樣技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1雜交狼尾草hybridpennisetum為禾本科狼尾草屬暖季型牧草，由二倍體美洲狼尾草（Pennisetumamericanum）與四倍體象草（P.purpureum）雜交育成的三倍體種間雜交種。適于鮮喂牛羊或青貯利用。3.2青貯飼料silage將新鮮的青綠飼料切短后，在密閉缺氧的條件下經(jīng)微生物發(fā)酵，制成的一種具有特殊芳香氣味、營養(yǎng)豐富的多汁飼料。[來源：DB50/T669，3.1]3.3水分moisture按照GB/T6435規(guī)定的步驟干燥樣品所損失物質(zhì)（水分和其他揮發(fā)性物質(zhì)）的質(zhì)量。[來源：GB/T6435，3.1]4技術(shù)要求2DB50/T1251—20224.1感官評定雜交狼尾草青貯飼料感官分級指標(biāo)包括色澤、質(zhì)地、氣味、含水量，按照表1的指標(biāo)進(jìn)行判定。以4項指標(biāo)單項得分之和作為分級依據(jù)，總分100分。青貯飼料感官評分100分～81分為優(yōu)良，80分～61分為中等，60分～41分為較差，40分～0分為差。表1雜交狼尾草青貯飼料感官評分黃綠色，有光澤醋酸味強(qiáng)，酸柔軟，莖、葉滴莖、葉略能分辨0酸臭腐敗霉?fàn)€味0莖、葉黏連成0水04.2發(fā)酵評定雜交狼尾草青貯飼料發(fā)酵分級指標(biāo)包括pH值、氨態(tài)氮/總氮、乳酸/總酸、乙酸/總酸、丁酸/總酸，按照表2的指標(biāo)設(shè)定進(jìn)行判定。以5項指標(biāo)單項得分之和作為分級依據(jù)，總分100分。評分100分~81分為優(yōu)良，80分～61分為中等，60分～41分為較差，40分～0分為差。表2雜交狼尾草青貯飼料發(fā)酵評分%%%%>4.7>15>51>314.2發(fā)酵原料要求雜交狼尾草青貯飼料原料應(yīng)符合GB13078的規(guī)定。3DB50/T1251—20225檢測方法5.1取樣方法按照NY/T2129規(guī)定執(zhí)行。5.2試樣制備稱取20g鮮樣，加入180mL超純水，4℃浸提24h，取50mL浸提液，8000rpm，4℃離心15min，取上清液2ml，12000rpm，4℃離心2min，取上清液用0.22μm微孔濾膜過濾，即為待測樣品。5.3感官評定方法稱取500g青貯飼料樣品，均勻放置在不透明的白色瓷盤中，并保持室內(nèi)空氣的流通，通過嗅覺和視覺等感官器官進(jìn)行辨別。5.4pH值測定按照GB/T10468規(guī)定執(zhí)行。5.5水分測定按照GB/T6435規(guī)定執(zhí)行。5.6有機(jī)酸含量測定液相色譜法測定青貯飼料中有機(jī)酸含量，參見附錄A。5.7氨態(tài)氮/總氮含量測定苯酚-次氯酸鹽顯色法測定青貯飼料中氨態(tài)氮/總氮含量，參見附錄B。4DB50/T1251—2022液相色譜法測定青貯飼料中有機(jī)酸含量A.1試劑和材料乳酸、乙酸、丙酸、丁酸標(biāo)準(zhǔn)品，超純水，磷酸為分析純。A.2儀器與設(shè)備高效液相色譜儀，電子天平，超聲波振蕩器。A.3試劑配制A.3.1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制分別準(zhǔn)確稱取4種物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品，用去離子水溶解并定容于容量瓶中，配制成混合母液，然后準(zhǔn)確量取0.625mL、1.25mL、2.5mL、5mL標(biāo)準(zhǔn)混合母液用超純水定容于10mL容量瓶中，即為梯度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。A.3.2流動相配制準(zhǔn)確稱取磷酸3.0000g，用去超純水溶解，調(diào)節(jié)pH值至2.7，并定容于1000mL的容量瓶中，然后用0.22μm水相濾膜過濾，超聲波振蕩器中脫氣30min后使用。A.4測定程序A.4.1色譜條件色譜柱；流動相：0.3%磷酸；流速：1.0mL/min；柱溫：50℃;進(jìn)樣量：5μL；檢測器波長：210nm。A.4.2色譜測定取A.3.1中配制的梯度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，以峰面積（響應(yīng)值，Y，AU）為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度（X，mg/mL）為橫坐標(biāo)，繪制4種標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到保留時間、線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限信息。A.4.3空白試驗將5.2制備的青貯飼料試樣浸提液，采用高效液相色譜法測定乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量，總酸為乳酸、乙酸、丙酸、丁酸之和。A.4.4結(jié)果計算用色譜工作站計算試樣浸提液被測物的含量，計算中扣除空白值。再通過換算浸提液制備過程中對應(yīng)的樣品量，獲得乳酸、乙酸、丙酸、丁酸在樣品中的比例。有機(jī)酸的含量按式（1）進(jìn)行計算：5DB50/T1251—2022式中：W---乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量，單位為mg/g；C1---樣液的濃度（mg/g)，根據(jù)標(biāo)曲算得；N1---稀釋倍數(shù)；D1---樣品的水分含量（%）；m1---制取青貯液時樣品重量（g）。6DB50/T1251—2022氨態(tài)氮/總氮含量的測定B.1試劑B.1.1亞硝基鐵氰化鈉（Na2[Fe(CN)5·NO]2H2O)。B.1.2結(jié)晶苯酚（C6H5O)。B.1.3氫氧化鈉（NaOH)。B.1.4磷酸氫二鈉（Na2HPO6.7H2O)。B.1.5次氯酸鈉（NaClO)：含活性氯5.25%。B.1.6氯化銨(NH4Cl)。B.1.7苯酚顯色劑：將取0.1g亞硝基鐵氰化鈉、20g結(jié)晶苯酚，蒸餾水定容至2L，溶液放入棕色瓶中2℃~10℃避光保存，保質(zhì)期6個月。B.1.8次氯酸鈉試劑：稱取10g氫氧化鈉、75.7g磷酸氫二鈉溶于蒸餾水中。待冷卻后，加100mL次氯酸鈉混勻后定容于2L，溶液使用濾紙過濾后2℃~10℃避光保存，保質(zhì)期6個月。B.1.9標(biāo)準(zhǔn)銨貯備液：準(zhǔn)確稱取1.0045g氯化銨溶于適量蒸餾水中，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.0，用蒸餾水定容至1L，得到含氨濃度為32mg/dL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。B.2儀器與設(shè)備試驗用儀器包括：分光光度計；水浴鍋；移液槍：10μL，1mL，5mL。B.3測定步驟B.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立用蒸餾水稀釋氨標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，得到氨態(tài)氮濃度分別為：32mg/dL、16mg/dL、8mg/dL、4mg/dL、2mg/dL、1mg/dL和0mg/dL的系列標(biāo)準(zhǔn)液。取系列標(biāo)準(zhǔn)工作液各40mL至貼好標(biāo)簽的試管中，依次加入2.5mL苯酚顯色液、2mL次氯酸鹽試劑。注意加入每種試劑后均要混勻。將樣品放置37℃水浴中發(fā)色30min。冷卻后，使用分光光度計在波長550nm測定吸光度。以吸光度和標(biāo)準(zhǔn)液濃度為坐標(biāo)軸建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。B.3.2樣品的檢測向每支試管中加入40μL正文中所述制備青貯浸出液，按檢測步驟測定樣本液的吸光度。B.3.3水分測定按GB/T6435的規(guī)定執(zhí)行。B.3.4總氮的檢測按GB/T6432的規(guī)定執(zhí)行。B.3.5結(jié)果計算7DB50/T1251—2022氨態(tài)氮的含量按式（2）進(jìn)行計算：