BJS 201601 食品中那非類物質(zhì)的測定

附件1

食品中那非類物質(zhì)的測定

BJS201601

1范圍

本方法規(guī)定了食品（含保健食品）中西地那非、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西

地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非、偽伐地那非、他達(dá)拉非、氨基他達(dá)

拉非含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

本方法適用于酒、咖啡、功能飲料、瑪咖片、保健食品中西地那非、豪莫西地那非、羥基豪

莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非、偽伐地那非、

他達(dá)拉非、氨基他達(dá)拉非含量的測定。

2原理

試樣經(jīng)乙腈提取后，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測，外標(biāo)法定量。

3試劑和材料

注：水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

3.1試劑

3.1.1乙腈（CH3CN)：色譜純。

3.1.2甲酸（CH2O2）：質(zhì)譜級。

3.1.30.1%甲酸水溶液：取甲酸1ml用水稀釋至1000ml,用濾膜（3.4）過濾后備用。

3.1.40.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸1ml用乙腈稀釋至1000ml,用濾膜（3.4）過濾后備用。

3.2標(biāo)準(zhǔn)品

西地那非鹽酸鹽、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地

那非、那紅地那非、伐地那非鹽酸鹽、偽伐地那非、他達(dá)拉非、氨基他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、

英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量見附錄A表A.1，純度≥98%。

3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取西地那非鹽酸鹽、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、

硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非鹽酸鹽、偽伐地那非、他達(dá)拉非、氨基他達(dá)拉

非標(biāo)準(zhǔn)品（3.2）0.1g（精確至0.0001g），用乙腈溶解，并轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，定容至刻度，

此溶液濃度為1mg/mL。貯存于4℃冰箱中，有效期3個(gè)月。

3.3.2混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別準(zhǔn)確吸取西地那非鹽酸鹽、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、

那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非鹽酸鹽、偽伐地那非、他達(dá)拉

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非、氨基他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量（3.3.1），用乙腈將其稀釋成含量分別為1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、

10ng/mL、20ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列混合工作液。臨用時(shí)配制。

3.4微孔濾膜：0.22μm，有機(jī)相。

4儀器和設(shè)備

4.1高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。

4.2超聲波清洗器。

4.3分析天平：感量分別為0.01g和0.0001g。

5分析步驟

5.1試樣制備

準(zhǔn)確稱取2g試樣（精確至0.01g）于50mL容量瓶中，加入40mL乙腈，超聲30min，冷卻

至室溫，用乙腈定容至刻度，搖勻，上清液經(jīng)微孔濾膜（3.4）過濾。取續(xù)濾液1.0mL于50mL容

量瓶中，用乙腈定容至刻度，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

5.2儀器參考條件

5.2.1色譜條件

a）色譜柱：C18柱，1.8μm，100mm×2.1mm（內(nèi)徑），或性能相當(dāng)者；

b）流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水溶液（3.1.3），B為0.1%甲酸乙腈溶液（3.1.4），洗脫梯度見表1；

c）流速：0.3mL/min；

d）柱溫：35℃；

e）進(jìn)樣量：2μL。

表1洗脫梯度

時(shí)間（min）流速（L/min）流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）

00.39010

10.39010

40.36040

70.31090

90.31090

9.10.39010

120.39010

5.2.2質(zhì)譜條件

a）電離方式：電噴霧正離子模式；

b）檢測方式：多反應(yīng)檢測（MRM）；

c）霧化氣壓力：30psi；

d）離子噴霧電壓：3500V；

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e）干燥氣溫度：330℃；

f）干燥氣流速：8L/min；

g）定性離子對、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量見表2。

表2那非類物質(zhì)的定性離子對、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量

母離子子離子碎裂電壓碰撞能量

中文名稱

(m/z)(m/z)(V)(eV)

西地那非475311*；37713520/20

豪莫西地那非489113*；31113520/20

羥基豪莫西地那非505487*；37713520/20

那莫西地那非460329*；37713520/20

硫代艾地那非505393*；44813520/20

紅地那非467396*；42013520/20

那紅地那非453353*；40613520/20

伐地那非489151*；29913520/20

偽伐地那非460432*；37713520/20

他達(dá)拉非390268*；30213520/20

氨基他達(dá)拉非391269*；26213520/20

*：定量離子

5.3定性測定

按照上述條件測定試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，如果試樣中的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與混合標(biāo)準(zhǔn)工

作液中的某種組分一致（變化范圍在±2.5%之內(nèi)）；試樣中定性離子對的相對豐度與濃度相當(dāng)混合

標(biāo)準(zhǔn)工作液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為試樣中存在該組

分。

表3定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差

相對離子豐度（%）＞50＞20~50＞10~20≤10

允許的最大偏差（%）±20±25±30±50

5.4定量測定

5.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（3.3.2）分別按儀器參考條件（5.2）進(jìn)行測定，得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色

譜峰面積。以混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5.4.2試樣溶液的測定

將試樣溶液（5.1）按儀器參考條件（5.2）進(jìn)行測定，得到相應(yīng)的樣品溶液的色譜峰面積。根據(jù)標(biāo)

準(zhǔn)曲線得到待測液中組分的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次；試樣待測液響應(yīng)值若低于標(biāo)準(zhǔn)曲線

線性范圍，應(yīng)取5.1中試樣提取續(xù)濾液進(jìn)行分析；試樣待測液響應(yīng)值若超出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，

應(yīng)用乙腈稀釋后進(jìn)行分析。

標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖參見附錄B的圖B.1-B.11。

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6結(jié)果計(jì)算

結(jié)果按式（1）計(jì)算：

cV1000

X…………（1）

m

式中：

X—試樣中某種組分的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；

c—由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中某種組分的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V—試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；

m—試樣稱取的質(zhì)量，單位為克（g）；

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)

字。

7精密度

在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

8其他

當(dāng)稱樣量為2.00g，定容體積為50mL時(shí)，西地那非、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、

那莫西地那非、伐地那非、偽伐地那非、他達(dá)拉非檢出限為2μg/kg，硫代艾地那非、紅地那非、

氨基他達(dá)拉非檢出限為5μg/kg，那紅地那非檢出限為8μg/kg。

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附錄A

那非類標(biāo)準(zhǔn)品信息

表A.1那非類標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量

序號中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子量

1西地那非Sildenafil139755-83-2C22H30N6O4S474.58

2豪莫西地那非HomoSildenafil642928-07-2C23H32N6O4S488.60

3羥基豪莫西地那非Hydroxyhomosildenafil139755-85-4C23H32N6O5S504.60

4那莫西地那非Norneosildenafil371959-09-0C22H29N5O4S459.56

5硫代艾地那非Thioaildenafil856190-47-1C22H30N6O3S2490.64

6紅地那非Acetildenafil831217-01-7C25H34N6O3466.58

7那紅地那非Noracetildenafil949091-38-7C24H32N6O3452.55

8伐地那非Vardenafil224785-91-5C23H32N6O4S488.60

9偽伐地那非Pseudovardenafil224788-34-5C22H29N5O4S459.56

10他達(dá)拉非Tadalafil171596-29-5C22H19N3O4389.40

11氨基他達(dá)拉非Aminotadalafil385769-84-6C21H18N4O4390.39

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附錄B