《生鮮乳體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范》（編制說明）

《生鮮乳體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范》編制說明國家計(jì)量技術(shù)規(guī)范規(guī)程制修訂《生鮮乳體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范》（征求意見稿）編制說明中國計(jì)量科學(xué)研究院2022年9月《生鮮乳體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范》（征求意見稿）編寫說明一、任務(wù)來源根據(jù)市場監(jiān)管總局計(jì)量司2017年關(guān)于《國家計(jì)量技術(shù)規(guī)范制定、修訂及宣貫計(jì)劃有關(guān)事項(xiàng)的通知》（質(zhì)檢量函[2017]25號），由中國計(jì)量科學(xué)研究院牽頭承擔(dān)《生鮮乳體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范》的制定工作，歸口單位為全國生物計(jì)量技術(shù)委員會(huì)，參加單位為上海市計(jì)量測試技術(shù)研究院。二、規(guī)范制定的必要性目前中國奶制品消費(fèi)處于不斷增長階段，乳制品安全和品質(zhì)的檢測影響著大眾健康，也影響著奶牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。國際通用的牛場管理與奶牛健康檢測測定體系即奶牛群體改良計(jì)劃（dairyherdimprovement，DHI）中，體細(xì)胞數(shù)（somaticcellcount,SCC）由于與乳脂率、產(chǎn)奶量、蛋白量等其它指標(biāo)存在著一定的相關(guān)關(guān)系，因此成為了DHI體系中最重要的指標(biāo)。牛奶體細(xì)胞數(shù)是指每毫升牛奶中包括巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞及少量乳腺組織上皮細(xì)胞在內(nèi)的體細(xì)胞總數(shù)。正常情況下，牛奶中體細(xì)胞數(shù)在20～30萬個(gè)/mL；當(dāng)乳房產(chǎn)生炎癥時(shí)，機(jī)體將分泌大量白細(xì)胞，體細(xì)胞數(shù)一般超過50萬個(gè)/mL。因此，體細(xì)胞數(shù)反映了牛奶產(chǎn)量、質(zhì)量及奶牛健康狀況，是奶牛乳房健康狀況的重要指標(biāo)，同時(shí)也反映了一個(gè)地區(qū)或國家奶牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展的管理水平。國外奶牛生產(chǎn)先進(jìn)國家，早在19世紀(jì)末就開始進(jìn)行DHI測試工作，美國、法國、荷蘭等乳業(yè)發(fā)達(dá)國家通過DHI體系為奶農(nóng)提供指導(dǎo)服務(wù)，使牛群的遺傳水平和生產(chǎn)性能持續(xù)提高。我國的DHI起步較晚，1992年引入DHI技術(shù)，1999年中國奶業(yè)協(xié)會(huì)組織成立了“全國奶牛生產(chǎn)性能測定（DHI）工作委員會(huì)”，截止2013年，我國奶牛參加DHI測定的比例不足8%（美國、日本等發(fā)達(dá)國家的參測率已達(dá)50%以上）。自2008年起，我國大規(guī)模開展DHI工作。2015年農(nóng)業(yè)部根據(jù)《中國奶牛群體遺傳改良計(jì)劃（2008-2020）年》規(guī)定，制定了《奶牛生產(chǎn)性能測定工作辦法》。DHI工作在我國逐步受到重視和信賴。2016年中國農(nóng)墾乳業(yè)發(fā)展峰會(huì)上發(fā)布了《中國農(nóng)墾生鮮乳生產(chǎn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》。該企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)首次將我國現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中沒有提到但反映奶牛乳房健康水平的體細(xì)胞數(shù)首次納入到了此次新發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)中，限量每毫升為40萬個(gè)以下。2017年中國奶業(yè)協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/DAC003-2017《學(xué)生飲用奶生牛乳》中規(guī)定體細(xì)胞數(shù)限量40萬個(gè)/mL。2018年修訂的GB19301《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)生乳》（第一次討論稿）中首次增加了體細(xì)胞限量值分級標(biāo)準(zhǔn)。說明我國已開始重視體細(xì)胞對于乳制品的重要性，這對我國奶業(yè)發(fā)展有著重要的意義。牛奶體細(xì)胞檢測儀通過DNA法、ATP法、粘度法、電脈沖法、視覺鏡檢法等不同原理對牛奶中的體細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)（或分型）。目前，國際上已將SCC作為牛奶收購標(biāo)準(zhǔn)之一。我國也建立了多處奶牛生產(chǎn)性能測定實(shí)驗(yàn)室，并將檢測數(shù)據(jù)應(yīng)用于奶業(yè)生產(chǎn)。DNA法、ATP法、粘度法、pH法、EC法、IRT法等間接測量方法檢測相應(yīng)理化值，然后通過模型計(jì)算得到體細(xì)胞數(shù)，與SCC之間的相關(guān)性較差，準(zhǔn)確率較低；以電脈沖法、光脈沖法等為原理的體細(xì)胞直接計(jì)數(shù)儀檢測速率較快，準(zhǔn)確率較高。由于精確檢測SCC有助于區(qū)分處于臨界狀態(tài)的奶牛健康狀況，有助于識別處于亞健康或隱性乳腺炎的奶牛，對持續(xù)改善奶場管理，促進(jìn)奶牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。因此，為保證該類儀器性能的可靠性和檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，需要對牛奶體細(xì)胞檢測儀的性能參數(shù)如示值誤差、重復(fù)性、交叉污染等進(jìn)行檢測校準(zhǔn)。但是目前國內(nèi)外并沒有針對該設(shè)備的計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范，只有相關(guān)參數(shù)的測試方法標(biāo)準(zhǔn)，如農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T800-2004《生鮮牛乳中體細(xì)胞的測定方法》。因此，需要盡快開發(fā)計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)及校準(zhǔn)規(guī)范，配合相關(guān)檢測部門，保障測量的準(zhǔn)確性和溯源性。本項(xiàng)目開展了生鮮乳體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)方法的研究，針對使用中客戶比較關(guān)注的參數(shù)，編寫了國家校準(zhǔn)規(guī)范，填補(bǔ)了國內(nèi)外體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)領(lǐng)域的空白，加強(qiáng)對生鮮乳體細(xì)胞檢測儀性能參數(shù)的質(zhì)量控制，保證計(jì)量性能的量值傳遞準(zhǔn)確可靠，為乳制品安全及奶牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供保障。三、規(guī)范制定過程2017年6月~2017年12月，中國計(jì)量科學(xué)研究院聯(lián)合上海市計(jì)量測試技術(shù)研究院成立起草小組，向委員會(huì)秘書處提交制定的《生鮮乳體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范》計(jì)劃任務(wù)書，申報(bào)市場監(jiān)管總局計(jì)量司計(jì)量技術(shù)規(guī)范立項(xiàng)申請并獲得總局計(jì)量司批復(fù)。2018年1月~2018年12月，中國計(jì)量科學(xué)研究院通過國內(nèi)外文獻(xiàn)、國家標(biāo)準(zhǔn)、國際標(biāo)準(zhǔn)、企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等資料調(diào)研，制定了生鮮乳體細(xì)胞檢測儀測試作業(yè)指導(dǎo)書，開展生鮮乳體細(xì)胞檢測儀測試研究工作。2019年1月~2021年12月，起草小組通過赴全國畜牧總站、北京市奶牛中心乳品質(zhì)量檢驗(yàn)站、哈羅德（北京）科技有限公司等地調(diào)研了生鮮乳體細(xì)胞檢測儀參數(shù)，與我國奶牛生產(chǎn)性能測定管理機(jī)構(gòu)、實(shí)際用戶及儀器廠家等進(jìn)行深入溝通交流，并在此期間召開了2次研討會(huì)，探討生鮮乳體細(xì)胞檢測儀參數(shù)校準(zhǔn)的技術(shù)方案，針對生鮮乳體細(xì)胞檢測儀擬定了開展的具體校準(zhǔn)參數(shù)，形成了初稿。同時(shí)，在此期間，中國計(jì)量科學(xué)研究院開展了牛奶體細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制工作，先后制備了不同批次的牛奶體細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)候選物，通過在不同儀器上進(jìn)行測試，不斷改進(jìn)制備方式，優(yōu)化定值方法，初步形成了標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制方案。2022年1月~2022年9月，中國計(jì)量科學(xué)研究院研制完成5種不同濃度牛奶體細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，并在Bentley公司、FOSS公司及哈羅德公司不同儀器型號儀器進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。針對測試結(jié)果，并結(jié)合與廠家溝通交流等方式，起草小組進(jìn)一步完善校準(zhǔn)草案，合理確定了生鮮乳體細(xì)胞檢測儀參數(shù)的計(jì)量特性、校準(zhǔn)條件、校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法等內(nèi)容，完成了適用性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，最后編制完成《生鮮乳體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范》（征求意見稿）及編制說明。四、規(guī)范制定的主要技術(shù)依據(jù)及原則（一）、依據(jù)本次制訂中校準(zhǔn)規(guī)范文本結(jié)構(gòu)按照J(rèn)JF1071-2010《國家計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范編寫規(guī)則》的要求完成。其中不確定度評定部分按照J(rèn)JF1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》要求完成。（二）、原則1、架構(gòu) 架構(gòu)結(jié)構(gòu)根據(jù)封面、扉頁、目錄、引言、范圍、引用文件、術(shù)語和計(jì)量單位、概述、計(jì)量特性、校準(zhǔn)條件、校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法、校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)、復(fù)校間隔時(shí)間幾個(gè)部分制定《生鮮乳體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范》。2、術(shù)語與計(jì)量單位的選擇術(shù)語和計(jì)量單位的選擇遵照J(rèn)JF1001-2011《通用計(jì)量術(shù)語及定義》及JJF1265-2010《生物計(jì)量術(shù)語及定義》選擇使用。3、計(jì)量特性確定原則根據(jù)生鮮乳體細(xì)胞檢測儀的結(jié)構(gòu)及特點(diǎn)，確定生鮮乳體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)的計(jì)量特性；計(jì)量特性確定過程中也參照了現(xiàn)行有效的中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布標(biāo)準(zhǔn)NY/T800-2004《生鮮牛乳中體細(xì)胞測定方法》及國家計(jì)量技術(shù)規(guī)范JJG714-2012《血細(xì)胞分析儀》檢定規(guī)程。五、規(guī)范制定說明《生鮮乳體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范》共分為10個(gè)部分，即范圍、引用文件、術(shù)語和計(jì)量單位、概述、計(jì)量特性、校準(zhǔn)條件、校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法、校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)、復(fù)校時(shí)間間隔和附錄。1、范圍本規(guī)范適用于電子粒子計(jì)數(shù)法、熒光光電計(jì)數(shù)法及計(jì)算機(jī)視覺鏡檢法等原理的體細(xì)胞檢測儀的校準(zhǔn)。其它原理的體細(xì)胞檢測儀，可參照本規(guī)范執(zhí)行。2、引用文獻(xiàn)列出了本規(guī)范參考和引用的文件包括JJF1001通用計(jì)量術(shù)語及定義、JJF1059.1測量不確定度評定與表示、JJF1071國家計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范編寫規(guī)則、JJF1265生物計(jì)量術(shù)語及定義，凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本規(guī)范，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修訂單）適用于本規(guī)范。3、術(shù)語和計(jì)量單位JJF1001及JJF1265界定的術(shù)語和定義適用于本規(guī)范。本規(guī)范沒有需要特殊標(biāo)注的術(shù)語及計(jì)量單位。4、概述這部分主要描述了生鮮乳體細(xì)胞檢測儀的用途及儀器依據(jù)的主要方法原理。5、計(jì)量特性這部分規(guī)定了生鮮乳體細(xì)胞檢測儀的計(jì)量特性，通過對生產(chǎn)廠家和用戶的調(diào)研，選擇了相對示值誤差、重復(fù)性和攜帶污染率。6、校準(zhǔn)條件這部分主要規(guī)定了生鮮乳體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)時(shí)需要滿足的環(huán)境條件，以及使用的測量標(biāo)準(zhǔn)及儀器設(shè)備。校準(zhǔn)環(huán)境需滿足環(huán)境溫度：（15～35）℃，相對濕度：≤80%。校準(zhǔn)使用的測量標(biāo)準(zhǔn)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，需使用覆蓋儀器測量范圍的不同濃度生鮮乳體細(xì)胞數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，相對擴(kuò)展不確定度≤15%（k＝2）。使用到的主要儀器設(shè)備為水浴鍋，需滿足恒溫40℃±1℃。7、校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法這部分主要針對生鮮乳體細(xì)胞檢測儀針對具體校準(zhǔn)指標(biāo)：相對示值誤差、重復(fù)性和攜帶污染率，對其校準(zhǔn)方法進(jìn)行了具體說明和數(shù)學(xué)公式化處理。8、校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)經(jīng)過校準(zhǔn)的生鮮乳體細(xì)胞檢測儀出具校準(zhǔn)證書，證書應(yīng)符合JJF1071-2010中5.12的要求，校準(zhǔn)記錄格式見附錄A，校準(zhǔn)證書內(nèi)容見附錄B。9、復(fù)校時(shí)間間隔由于復(fù)校時(shí)間間隔的長短是由儀器的使用情況、使用者、儀器本身質(zhì)量等諸因素所決定的，因此，送校單位可根據(jù)實(shí)際使用情況自主決定復(fù)校時(shí)間間隔，復(fù)校時(shí)間間隔建議不超過1年。10、附錄征求意見稿中附錄A和附錄B給出了校準(zhǔn)記錄和校準(zhǔn)證書的內(nèi)容，附錄C給出了測量結(jié)果不確定度評定示例?！渡r乳體細(xì)胞檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范》國家校準(zhǔn)規(guī)范制定起草小組2022年9月參考文獻(xiàn)[1]NY/T800-2004生鮮牛乳中體細(xì)胞測定方法[2]JJG714-2012血細(xì)胞分析儀[3]劉丑生，李麗麗，張勝利等.奶牛生產(chǎn)性能測定及應(yīng)用[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2016年.58-121.[4]王玲玲,DHI在奶牛生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī),2011(9):27-29.[5]肖西山,DHI在奶牛生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào),2013.27(6):22-25.[6]Murphy,S.C.,etal.,Influenceofrawmilkqualityonprocesseddairyproducts:Howdorawmilkqualitytestresultsrelatetoproductqualityandyield[J]JDairySci,2016.99(12):10128-10149.[7] 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