(高清版)DB32∕T 4450-2023 固態(tài)化學(xué)品經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入染毒操作規(guī)程

DB32/T4450—2023固態(tài)化學(xué)品經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入染毒操作規(guī)程2023-02-06發(fā)布2023-03-06實(shí)施I 1 1 1 24.1受試物來(lái)源 24.2受試物分類處理 24.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備 24.4實(shí)驗(yàn)儀器準(zhǔn)備 24.5劑量設(shè)計(jì) 2 3 35.2染毒系統(tǒng)過(guò)程控制 35.2.1染毒穩(wěn)定狀態(tài)確定 3 35.2.3染毒濃度計(jì)算 35.2.4染毒氣溶膠的粒徑檢測(cè) 45.2.5染毒過(guò)程中動(dòng)物監(jiān)護(hù)和記錄 45.3實(shí)驗(yàn)結(jié)束后操作 45.3.1染毒結(jié)束清洗消毒 45.3.2廢棄物處置 4 5ⅢDB32/T4450—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省疾病預(yù)防控制中心提出。本文件由江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：江蘇省疾病預(yù)防控制中心、北京慧榮和科技有限公司、江蘇恒生檢測(cè)有限公司、南京大學(xué)環(huán)境學(xué)院。1DB32/T4450—20231范圍本文件確定了固態(tài)化學(xué)品經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入染毒的程序，規(guī)定了經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入染毒的實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備和實(shí)驗(yàn)操作內(nèi)容。本文件適用于化學(xué)品毒性鑒定機(jī)構(gòu)和其他科研機(jī)構(gòu)的固態(tài)化學(xué)品經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入染毒試驗(yàn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T15670.12—2017農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法第12部分：短期重復(fù)吸入染毒(28天)毒性試驗(yàn)GB/T21605—2008化學(xué)品急性吸入毒性試驗(yàn)方法GB/T21754—2008化學(xué)品28天/14天重復(fù)劑量吸入毒性試驗(yàn)方法GB/T21765—2008化學(xué)品亞慢性吸入毒性試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入染毒dynamicexposurefororal-nasalinhalation采用經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入設(shè)備，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保定在動(dòng)物固定器內(nèi)，使其口鼻部充分暴露在染毒腔，在一定時(shí)間內(nèi)持續(xù)吸入通過(guò)專用發(fā)生裝置發(fā)生的質(zhì)量濃度穩(wěn)定的受試樣品的染毒方式。半數(shù)致死濃度(LC?0)medianlethalcon在一定時(shí)間內(nèi)經(jīng)呼吸道吸入受試樣品后引起受試動(dòng)物發(fā)生死亡概率為50%的濃度，以單位體積空氣中受試樣品的質(zhì)量(mg/m3)來(lái)表示。由空氣動(dòng)力學(xué)直徑大小不一的顆粒組成的氣溶膠樣品中，小于和等于某一空氣動(dòng)力學(xué)直徑(例如5μm)的顆粒占?xì)馊苣z樣品總質(zhì)量或總重量50%時(shí)，則該氣溶膠顆?？諝鈩?dòng)力學(xué)直徑即為此氣溶膠樣品的質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(5μm)。24實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備4.1受試物來(lái)源制方法、配制日期及有效期等。如使用賦型劑，所用賦形劑應(yīng)標(biāo)明批號(hào)、規(guī)格和生產(chǎn)廠家。4.2受試物分類處理實(shí)驗(yàn)前應(yīng)使用合適尺寸的超分篩等設(shè)備把受試物篩出較細(xì)顆粒物。根據(jù)受試物特性，其發(fā)生處理方式可分為以下幾類?！鲃?dòng)性強(qiáng)，吸濕性較弱，易于發(fā)生的受試物，可使用相應(yīng)粉塵發(fā)生器直接發(fā)生；——流動(dòng)性強(qiáng)，吸濕性較強(qiáng)，開(kāi)封后不能長(zhǎng)時(shí)間放置的受試物，發(fā)生過(guò)程中應(yīng)保持密封?？墒褂貌捎眯D(zhuǎn)電刷式原理的發(fā)生器或者其他在發(fā)生過(guò)程中能夠保持受試物密封的發(fā)生器發(fā)生；——流動(dòng)性弱的受試物，需與賦形劑混勻后發(fā)生處理。用于配比的賦形劑如無(wú)明確數(shù)據(jù)表明其毒性作用，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)增加空白對(duì)照組確認(rèn)賦形劑對(duì)受試動(dòng)物的影響。4.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，選擇合適的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，嚙齒類動(dòng)物首選健康成年大鼠，非嚙齒類動(dòng)物首選健康成年犬，必要時(shí)可以選擇非人靈長(zhǎng)類，也可以選擇其他敏感動(dòng)物，但應(yīng)說(shuō)明原因。應(yīng)使用具有質(zhì)量合格證的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，同性別的各劑量組個(gè)體間體重相差不超過(guò)平均體重的±20%。試驗(yàn)開(kāi)始前，應(yīng)進(jìn)行固定器預(yù)適應(yīng)，根據(jù)動(dòng)物種屬選擇相應(yīng)固定器，預(yù)適應(yīng)時(shí)間由短逐漸延長(zhǎng)至正式實(shí)驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)度，一般為3天至5天，非人靈長(zhǎng)類宜增加適應(yīng)性訓(xùn)練的時(shí)間和頻率。在染毒時(shí)，動(dòng)物固定器不宜對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物施加不適當(dāng)?shù)奈锢怼峄驂浩攘?，過(guò)強(qiáng)的外力限制會(huì)影響動(dòng)物的生理指標(biāo)。4.4實(shí)驗(yàn)儀器準(zhǔn)備應(yīng)使用經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入儀器進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入儀器包括但不限于粉塵發(fā)生器、吸入暴露排風(fēng)及廢氣處理設(shè)備等。正式實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，應(yīng)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定合適的實(shí)驗(yàn)參數(shù)設(shè)置，包括進(jìn)氣流量、4.5劑量設(shè)計(jì)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康陌凑障鄳?yīng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行劑量設(shè)計(jì)，急性吸入毒性試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)按照GB/T21605—2008中的5.2條款內(nèi)容，28天/14天重復(fù)劑量吸入毒性試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)按照GB/T21754—2008中的4.1.2條款內(nèi)容，亞慢性吸入毒性試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)按照GB/T21765—2008中的4.4條款內(nèi)容，慢性吸入毒性試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)參照《化學(xué)品毒性鑒定技術(shù)規(guī)范》(衛(wèi)監(jiān)督發(fā)〔2005〕272號(hào))的相關(guān)規(guī)定。當(dāng)儀器需要重復(fù)使用時(shí)，不同劑量染毒試驗(yàn)應(yīng)由低濃度到高濃度進(jìn)行。35實(shí)驗(yàn)操作內(nèi)容5.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒環(huán)境染毒時(shí)，應(yīng)保持染毒腔內(nèi)溫度在22℃±3℃,相對(duì)濕度在30%～70%范圍，氧含量不低于19%,二氧化碳含量不高于1%,染毒腔和設(shè)備外部通風(fēng)櫥之間應(yīng)保持微負(fù)壓，以保證染毒腔內(nèi)的受試物氣溶膠不會(huì)擴(kuò)散到外部通風(fēng)櫥。至少每小時(shí)記錄一次環(huán)境參數(shù)和樣品使用量，5.2染毒系統(tǒng)過(guò)程控制應(yīng)用經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入儀器進(jìn)行染毒實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)對(duì)染毒腔受試物濃度進(jìn)行調(diào)為染毒系統(tǒng)濃度是穩(wěn)定的，并記錄到達(dá)穩(wěn)定所需時(shí)間，否則需要繼續(xù)調(diào)試。待染毒系統(tǒng)濃度確認(rèn)穩(wěn)定30min采樣一次)或連續(xù)采樣進(jìn)行測(cè)定。設(shè)置采樣流量時(shí)，應(yīng)減少對(duì)染毒腔穩(wěn)態(tài)氣流造成不必要的干采樣分析。固態(tài)化學(xué)品吸入染毒過(guò)程中，變異系數(shù)(CV值=標(biāo)準(zhǔn)差與平均濃度的比值%)不超過(guò)20%。染毒濃度應(yīng)直接測(cè)定動(dòng)物呼吸帶的實(shí)際濃度，多次測(cè)定后取平均值C——染毒濃度，單位為毫克每立方米(mg/4R——受試樣品在賦形劑中的含量(%,質(zhì)量比)。注：公式(1)和公式(2)中，1000為單位換算系數(shù)。5.2.4染毒氣溶膠的粒徑檢測(cè)對(duì)于固態(tài)化學(xué)品制備的氣溶膠，應(yīng)對(duì)氣溶膠粒徑進(jìn)行連續(xù)測(cè)定和監(jiān)控，至少每30min采樣一次，氣溶膠的MMAD值應(yīng)在1μm~4μm范圍內(nèi)，且連續(xù)兩次測(cè)定的MMAD值的波動(dòng)范圍在10%之內(nèi)，幾何標(biāo)準(zhǔn)差在1.5～3.0之間。5.2.5染毒過(guò)程中動(dòng)物監(jiān)護(hù)和記錄染毒過(guò)程中，應(yīng)觀察受試物和固定器對(duì)受試動(dòng)物的影響，并記錄實(shí)驗(yàn)中的動(dòng)物狀態(tài)。如動(dòng)物出現(xiàn)體位反轉(zhuǎn)等異常情況，應(yīng)及時(shí)調(diào)整，受試動(dòng)物的體位變化可能導(dǎo)致吸入染毒濃度不足，或?qū)е轮舷⑺劳?。觀察并記錄動(dòng)物外觀、肢體活動(dòng)、行為方式以及呼吸狀態(tài)等變化發(fā)生的時(shí)間、程度和記錄口鼻部是否有異常分泌物以及眼球部是否有出血充血現(xiàn)象。5.3實(shí)驗(yàn)結(jié)束后操作5.3.1染毒結(jié)束清洗消毒染毒結(jié)束后，按照染毒開(kāi)始時(shí)的安裝順序，逐次取下固定器并取出動(dòng)物塔底部沉積樣品收集后，對(duì)暴露腔和管路用洗滌劑浸泡，用清水沖洗干凈，避免殘留樣品對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)影響。對(duì)于難以除去的殘留受試物可用高壓水槍或超聲波清洗，必要時(shí)使用中性洗滌劑清洗。清洗晾干后消毒備用。使用經(jīng)口鼻吸入動(dòng)式染毒