藥品生物檢定的基礎(chǔ)知識(shí)-消毒滅菌技術(shù)

消毒滅菌技術(shù)一、基本原理§1

基本概念§2物理方法§3化學(xué)方法1.基本概念

滅菌－殺滅或除去所有微生物的繁殖體和芽胞。消毒－殺滅或除去病原微生物。消毒劑。防腐－抑制微生物的生長與繁殖。抑菌劑或防腐劑。除菌化療無菌車間無菌操作臺(tái)1.基本概念

無菌操作：防止微生物進(jìn)入工作對(duì)象的方法。無菌制劑－系指采用某一無菌操作方法或技術(shù)制備的不含任何活的微生物繁殖體和芽胞的一類藥物制劑。1.基本概念

2.物理方法熱力滅菌法（干熱滅菌、濕熱滅菌）輻射滅菌法（紫外線、電離幅射、微波）濾過除菌法（除菌濾器、適用物品）其他超聲波（機(jī)制：裂解細(xì)菌，主要用于粉碎細(xì)胞、提取抗原）干燥與低溫抑菌(1)熱力滅菌法原理使微生物蛋白質(zhì)變性凝固；酶失活；微生物體內(nèi)的DNA斷裂。方法

干熱滅菌法濕熱滅菌法消毒與滅菌技術(shù)8

焚燒----最徹底的滅菌方法燒灼----直接用火焰滅菌方法如接種環(huán)、試管口、三角瓶口干烤----加熱160-170℃2h

玻璃器皿、陶瓷a、干熱滅菌法紅外線----熱效應(yīng)，與干烤類似滅菌效果：可殺死營養(yǎng)體和芽胞干熱滅菌箱9b.濕熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法（熱壓滅菌法）最有效的濕熱滅菌法121℃15-20mim（殺芽胞)煮沸消毒法水煮100℃5mim(殺繁殖體)-2h(殺芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100℃15-30mim(殺繁殖體)反復(fù)多次流動(dòng)蒸汽間歇加熱滅菌(殺芽胞）較低的溫度61℃30mim/71℃30s（殺致病菌）效果比干熱好10消毒與滅菌技術(shù)

b.濕熱滅菌法：濕熱滅菌特點(diǎn)蒸氣比熱干空氣穿透力強(qiáng)，所以滅菌效力高于干熱滅菌法。滅菌效果可靠,簡便、經(jīng)濟(jì)、易控制制劑生產(chǎn)中廣泛可靠的滅菌方法。除對(duì)熱敏感的藥物外其他藥物均可選用11消毒與滅菌技術(shù)

b.濕熱滅菌法：熱壓滅菌法（高壓蒸汽滅菌法高采用高壓飽和蒸汽殺滅微生物，是最有效的滅菌方法115℃,70.91kPa,30min121℃，103.1kPa,15-20’培養(yǎng)基注射液手提式滅菌鍋滅菌箱12高壓蒸汽滅菌消毒與滅菌技術(shù)

b.濕熱滅菌法：熱壓滅菌法（高壓蒸汽滅菌法溫度/℃壓力/kPa(kg/cm2)時(shí)間/min11040.52(0.4)4011570.91(0.7)30120101.3(1.0)20125141.82(1.4)15130182.34(1,8)10熱壓滅菌所需溫度與相當(dāng)壓力及時(shí)間13消毒與滅菌技術(shù)

b.濕熱滅菌法：熱壓滅菌法（高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌常用設(shè)備手提式熱壓滅菌器（科研、檢驗(yàn)、醫(yī)務(wù)室）14消毒與滅菌技術(shù)

b.濕熱滅菌法：熱壓滅菌法（高壓蒸汽滅菌法）滅菌初期先排凈鍋內(nèi)冷空氣;滅菌時(shí)間：從達(dá)到規(guī)定壓力和溫度開始計(jì)；鍋內(nèi)水分要充足;滅菌物品裝量不宜太滿;滅菌結(jié)束需緩慢減壓；滅菌結(jié)束，趁熱取出物品。高壓蒸汽滅菌注意事項(xiàng)15消毒與滅菌技術(shù)

b.濕熱滅菌法：流通蒸汽滅菌法水蒸汽100℃30-60’(殺繁殖體)適用對(duì)象：不需殺死芽孢的物體的消毒。適用于一些注射劑生產(chǎn)，尤其是1－2ml注射劑及不耐高熱的品種。若在藥液中加入抑菌劑（0.1%~0.5%苯酚等），可殺死芽孢此法不能保證殺滅芽孢，因此制備過程要避免污染。16消毒與滅菌技術(shù)

b.

濕熱滅菌法：低溫間歇滅菌法將滅菌物體置于60~80℃

，1h后，置于20~25℃

，24h。反復(fù)三次(殺芽胞）

不宜高壓滅菌的培養(yǎng)基不耐熱的藥物和營養(yǎng)物發(fā)酵車間的管道等中藥注射劑常用該法適用對(duì)象缺點(diǎn)：時(shí)間長、功效低，消滅芽孢效果差17消毒與滅菌技術(shù)

b.濕熱滅菌法：煮沸滅菌法煮沸滅菌法100℃5’(殺繁殖體)，2h(殺芽胞)適用對(duì)象：注射器和外科器械的消毒。18消毒與滅菌技術(shù)

b.濕熱滅菌法：巴氏消毒法巴氏消毒法（殺致病菌）61℃30’或71℃15’’82℃處理4秒適用對(duì)象：奶制、果汁、酒、糖漿等食品消毒。19消毒與滅菌技術(shù)

－影響濕熱滅菌的因素微生物的種類和數(shù)量蒸汽的性質(zhì)（飽和蒸汽、濕飽和蒸汽、過熱蒸汽）滅菌時(shí)間（滅菌溫度與時(shí)間成反比）被滅菌物品的性質(zhì)（所含營養(yǎng)、pH）高壓滅菌鍋消毒與滅菌技術(shù)

(2)熱力法：濕熱滅菌與干熱滅菌的比較同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好濕熱中細(xì)菌菌體蛋白較易凝固濕熱的穿透力比干熱大濕熱的蒸汽有潛熱21消毒與滅菌技術(shù)

(2)輻射滅菌波長240-300nm（254nm）殺菌機(jī)理：干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄

特點(diǎn)：紫外線穿透力較弱房間靜態(tài)空氣消毒時(shí)劑量一般為0.1～0.4w/m2

通風(fēng)管內(nèi)流通空氣可采用大于100w/m2的大劑量22消毒與滅菌技術(shù)

(2)輻射：紫外線滅菌法使用方法一般6－15m3房間裝30w紫外燈一只；燈距地面2.5—3m溫度10－55℃，濕度45﹪－60﹪應(yīng)在操作前照射1－2h,操作時(shí)關(guān)閉。23消毒與滅菌技術(shù)

－輻射：紫外線滅菌法注意事項(xiàng)殺滅繁殖體需3~5s殺滅芽孢需10min以上紫外燈必須無塵、無油垢可在使用前照射1~2h，操作時(shí)關(guān)閉紫外燈有效使用期為3000h消毒與滅菌技術(shù)

－輻射：輻射滅菌法包括：β射線（電子束滅菌，適用薄、密度低的物料）

60Co－γ射線（同位素輻射滅菌法）殺菌機(jī)理：產(chǎn)生游離基,破壞DNA。特點(diǎn)：射線穿透力強(qiáng)、被滅菌物體溫度變化小適用范圍：一次性醫(yī)用塑料制品的消毒、食品的消毒-不破壞其營養(yǎng)成分25消毒與滅菌技術(shù)

－輻射滅菌法特點(diǎn)適用于熱敏性藥物的滅菌；γ射線穿透力強(qiáng),特別適用于已包裝密封的藥品消毒滅菌可防二次污染；殺菌作用可靠，廣泛適用于固、液、半固體物料。有可能使藥效活性降低，使用中注意安全保護(hù)。26消毒與滅菌技術(shù)

(3)濾過滅菌法指藥液通過無菌濾器，除去活的和死的微生物而得到無菌濾液的方法。特點(diǎn)：（1)適用于很不耐熱的藥物溶液的除菌（2)必須無菌操作（濾球、容器、藥液、環(huán)境無菌等過程）。消毒與滅菌技術(shù)

(3)濾過除菌法殺菌機(jī)理：含有微細(xì)小孔<0.22μm,只允許液體或氣體及孔徑<0.22μm的顆粒通過，細(xì)菌不能濾過。適用范圍：血清、毒素、輸液、生物制品、抗生素以及空氣等的除菌。28消毒與滅菌技術(shù)

(3)濾過除菌法殺菌機(jī)理：含有微細(xì)小孔<0.22μm,只允許液體或氣體及孔徑<0.22μm的顆粒通過，細(xì)菌不能濾過。不能除病毒、支原體適用范圍：血清、毒素、輸液、生物制品、抗生素以及空氣等的除菌。29消毒與滅菌技術(shù)

(3)濾過除菌法常用濾過除菌濾器微孔薄膜濾器垂熔玻璃濾器砂率棒垂熔玻璃漏洞垂熔玻璃濾球垂熔玻璃棒30過濾滅菌31消毒與滅菌技術(shù)

－物理滅菌法方法主要技術(shù)參數(shù)應(yīng)用特點(diǎn)干熱滅菌藥典規(guī)定180℃，1h或160-170℃，2-4h穿透力弱，溫度不易均勻，溫度高，不適于大部分藥品濕熱滅菌熱壓滅菌98kPa(1kg/cm2),15-20min穿透力強(qiáng)，效果可靠，適用廣流通蒸汽100℃，30-60min不能殺滅細(xì)菌芽胞低溫間歇60-80℃，1h+室溫24h，重復(fù)操作3次以上適于必須加熱滅菌而又不耐高溫者；時(shí)間長，效果不理想；須加抑菌劑消毒與滅菌技術(shù)

－物理滅菌法紫外線滅菌200-300nm，254nm最強(qiáng)用于空氣滅菌和表面滅菌，效果與微生物敏感性有關(guān)，對(duì)酵母菌和霉菌力弱微波滅菌2450MHz，3-6min強(qiáng)熱效應(yīng)，快速高效，適于熱不穩(wěn)定者輻射滅菌γ射線60Co穿透力強(qiáng)不升高溫度，設(shè)備費(fèi)用高，輻射能引起一些藥物pH值、含量、活性等改變，某些制品不宜選用β射線由電子加速器產(chǎn)生，穿透力弱，滅菌效果差34利用化學(xué)藥物（消毒防腐劑）破壞微生物的化學(xué)組成、物理結(jié)構(gòu)和生理活動(dòng)，達(dá)到防腐滅菌目的。消毒與滅菌技術(shù)

2化學(xué)消毒法35促進(jìn)菌體蛋白質(zhì)變性凝固（酚、醇、醛、酸堿類等）干擾細(xì)菌酶系統(tǒng)和代謝（氧化劑、重金屬鹽類等）損傷細(xì)菌細(xì)胞膜，增加其通透性（表面活性劑、脂溶劑等）菌體成分氧化、水解或結(jié)構(gòu)改變（氧化劑、鹵素、醛、酚等）消毒與滅菌技術(shù)

3化學(xué)消毒劑作用機(jī)制36

消毒與滅菌技術(shù)

3化學(xué)消毒：氣體消毒與滅菌環(huán)氧乙烷：車間、制藥設(shè)備、注射器、生物制品甲醛溶液：車間、制藥設(shè)備醋酸、乳酸丙二醇臭氧37消毒與滅菌技術(shù)

3化學(xué)消毒：氣體滅菌法使用能形成氣體或蒸汽的化學(xué)藥品適用于不耐熱又不能過濾的藥品（混懸液、固體藥物等環(huán)氧乙烷滅菌法（制藥設(shè)備、注射器、生物制品）

甲醛蒸汽熏蒸滅菌法（車間、制藥設(shè)備）其他蒸汽熏蒸滅菌法38滅菌物品滅菌器減壓排氣預(yù)熱通環(huán)氧乙烷混合氣體抽真空排除環(huán)氧乙烷送無菌空氣消毒與滅菌技術(shù)

氣體滅菌法:環(huán)氧乙烷滅菌法39消毒與滅菌技術(shù)

氣體消毒與滅菌:環(huán)氧乙烷滅菌法環(huán)氧乙烷混合氣體10%環(huán)氧乙烷90%二氧化碳12%環(huán)氧乙烷88%氟里昂40消毒與滅菌技術(shù)

氣體滅菌法:環(huán)氧乙烷滅菌法環(huán)氧乙烷維持時(shí)間濃度450mg/L45℃維持5h濃度850~900mg/L45℃,維持3h相對(duì)濕度：40%~60%溫度：22~55℃41消毒與滅菌技術(shù)

－化學(xué)消毒：浸泡與表面消毒法0.1%新潔爾滅（苯扎溴銨）0.2%—0.5%過氧乙酸2%煤酚皂溶液（來蘇水）潔凈區(qū)地面、門、墻、玻璃窗、天花板、清潔間水池和清潔工具的消毒70%—75%乙醇：皮膚、直接接觸藥物的儀器設(shè)備4243消毒與滅菌技術(shù)

?常用的消毒防腐劑及應(yīng)用類型名稱及使用方法作用原理應(yīng)用范圍醇類70%—75%乙醇脫水、蛋白質(zhì)變性皮膚、器皿醛類0.5%—10%甲醛2%戊二醛（pH=8）蛋白質(zhì)變性房間、物品消毒（不適合食品廠）酚類3%—5%石炭酸2%來蘇兒（煤酚皂）3%—5%來蘇兒破壞細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)變性地面、器具皮膚地面、器具氧化劑0.1%高錳酸鉀3%過氧化氫0.2%—0.5%過氧乙酸氧化蛋白質(zhì)活性基團(tuán)，酶失活皮膚、水果、蔬菜皮膚、物品表面水果、蔬菜、塑料等44類型名稱及使用方法作用原理應(yīng)用范圍重金屬鹽類0.05%—0.1%升汞2%紅汞0.1%—1%硝酸銀0.1%—0.5%硫酸銅蛋白質(zhì)變性、酶失活變性、沉淀蛋白蛋白質(zhì)變性、酶失活非金屬器皿、體溫計(jì)皮膚、粘膜、傷口皮膚、新生兒眼睛防治植物病害表面活性劑0.05%—0.1%新潔爾滅（苯扎溴銨）0.05%—0.1%杜滅芬蛋白變性、破壞細(xì)胞膜皮膚、粘膜、器械皮膚、金屬、棉織品、塑料消毒與滅菌技術(shù)

?常用的消毒防腐劑及應(yīng)用45類型名稱及使用方法作用原理應(yīng)用范圍鹵素及其化合物0.2—0.5mg/L氯氣10%—20%漂白粉0.5%—1%漂白粉2.5%碘酒破壞細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)飲水、游泳池水地面水、空氣等皮膚染料2%—4%龍膽紫與蛋白質(zhì)的羧基結(jié)合皮膚、傷口酸類

0.1%苯甲酸

0.1%山梨酸食品防腐食品防腐消毒與滅菌技術(shù)

?常用的消毒防腐劑及應(yīng)用二、實(shí)驗(yàn)器材

溶液和試劑：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、KNO3、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、KH2PO4、葡萄糖、孟加拉紅（1%的水溶液）、鏈霉素（1%的水溶液）、1mol/LNaOH、1mol/LHCl。儀器和其他用品：試管、三角燒瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養(yǎng)基分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH試紙（pH5.5～9.0）、棉花、牛皮紙（或鋁箔）、記號(hào)筆、麻繩和紗布等。三、操作步驟

高壓蒸汽滅菌法具體操作步驟：

1、將配制好的培養(yǎng)基按要求包扎好。

2、標(biāo)記：班級(jí)、組別、培養(yǎng)基名稱、配制時(shí)間

3、檢查高壓鍋外鍋水位是否合適、密封是否完好。

4、將欲滅菌的物品放置于內(nèi)鍋中，小能太擠。

5、加蓋并擰緊螺旋。

6、加熱：打開源開關(guān)，開始通電。

7、排冷空氣：溫度上升至105℃時(shí)，打開放氣閥，放出冷空氣，待壓力降至0，此為第一次放氣完成。繼續(xù)加熱。當(dāng)溫度再次上升至105℃時(shí)，實(shí)施第二次放氣重復(fù)第一次放氣步驟。

8、繼續(xù)加熱至0.llMlPa，121.3℃，開始計(jì)時(shí)并控制溫度，維持30min。

9、滅菌時(shí)間到達(dá)后，關(guān)閉電源停止加熱，使壓力自然降至零，

10、打開蓋，小心取出滅菌好的物品。液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)直立放置，需要斜面放置傾斜30。，需要倒半板的培養(yǎng)基，待冷卻至40-60℃時(shí)倒半板。

消毒與滅菌技術(shù)

一、

基本概念二、

物理方法三、

化學(xué)方法消毒－殺滅或除去病原微生物。滅菌－殺滅或除去所有微生物的繁殖體和芽胞。防腐－抑制微生物的生長與繁殖。抑菌劑或防腐劑。除菌:用沖洗、過濾等機(jī)械手段除去微生物的方法。無菌操作：防止微生物進(jìn)入工作對(duì)象的方法。一、基本概念二、物理滅菌法熱力滅菌法（干熱滅菌、濕熱滅菌）輻射滅菌法（紫外線、電離幅射、微波）濾過除菌法（除菌濾器、適用物品）其他超聲波（機(jī)制：裂解細(xì)菌，主要用于粉碎細(xì)胞、提取抗原）干燥與低溫抑菌

焚燒----最徹底的滅菌方法燒灼----直接用火焰滅菌方法如接種環(huán)、試管口、三角瓶口干烤----加熱160-170℃2h

玻璃器皿、陶瓷1、干熱滅菌法紅外線----熱效應(yīng)，與干烤類似滅菌效果：可殺死營養(yǎng)體和芽胞2.濕熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法（熱壓滅菌法）最有效的濕熱滅菌法121℃15-20mim（殺芽胞)煮沸消毒法水煮100℃5mim(殺繁殖體)-2h(殺芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100℃15-30mim(殺繁殖體)反復(fù)多次流動(dòng)蒸汽間歇加熱滅菌(殺芽胞）較低的溫度61℃30mim/71℃30s（殺致病菌）效果比干熱好濕熱滅菌特點(diǎn)蒸氣比熱干空氣穿透力強(qiáng)，所以滅菌效力高于干熱滅菌法。滅菌效果可靠,簡便、經(jīng)濟(jì)、易控制制劑生產(chǎn)中廣泛可靠的滅菌方法。除對(duì)熱敏感的藥物外其他藥物均可選用

－濕熱滅菌法：熱壓滅菌法（高壓蒸汽滅菌法）高采用高壓飽和蒸汽殺滅微生物，是最有效的滅菌方法115℃,30min121℃,15-20min培養(yǎng)基注射液手提式滅菌鍋滅菌箱

－濕熱滅菌法：熱壓滅菌法（高壓蒸汽滅菌法）滅菌初期先排凈鍋內(nèi)冷空氣;滅菌時(shí)間：從達(dá)到規(guī)定壓力和溫度開始計(jì)；鍋內(nèi)水分要充足;滅菌物品裝量不宜太滿;滅菌結(jié)束需緩慢減壓；滅菌結(jié)束，趁熱取出物品。高壓蒸汽滅菌注意事項(xiàng)

－熱力滅菌法：濕熱滅菌與干熱滅菌的比較同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好濕熱中細(xì)菌菌體蛋白較易凝固濕熱的穿透力比干熱大濕熱的蒸汽有潛熱

輻射滅菌法?非電離輻射：紫外線波長240-300nm（254nm）殺菌機(jī)理：干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄

特點(diǎn)：紫外線穿透力較弱房間靜態(tài)空氣消毒時(shí)劑量一般為0.1～0.4w/m2

通風(fēng)管內(nèi)流通空氣可采用大于100w/m2的大劑量

輻射滅菌法?非電離輻射：紫外線一般6－15m3房間裝30w紫外燈一只；燈距地面2.5—3m溫度10－55℃，濕度45﹪－60﹪應(yīng)在操作前照射1－2h,操作時(shí)關(guān)閉。

輻射滅菌法：非電離輻射：紫外線殺滅繁殖體需3~5s殺滅芽孢需10min以上紫外燈必須無塵、無油垢可在使用前照射1~2h，操作時(shí)關(guān)閉紫外燈有效使用期為3000h輻射滅菌法特點(diǎn)適用于熱敏性藥物的滅菌；γ射線穿透力強(qiáng),特別適用于已包裝密封的藥品消毒滅菌可防二次污染；殺菌作用可靠，廣泛適用于固、液、半固體物料。有可能使藥效活性降低，使用中注意安全保護(hù)。濾過滅菌法指藥液通過無菌濾器，除去活的和死的微生物而得到無菌濾液的方法。特點(diǎn)：（1)適用于很不耐熱的藥物溶液的除菌（2)必須無菌操作（濾球、容器、藥液、環(huán)境無菌等過程）。濾過除菌法殺菌機(jī)理：含有微細(xì)小孔<0.22μm,只允許液體或氣體及孔徑<0.22μm的顆粒通過，細(xì)菌不能濾過。不能除病毒、支原體適用范圍：血清、毒素、輸液、生物制品、抗生素以及空氣等的除菌。利用化學(xué)藥物（消毒防腐劑）破壞微生物的化學(xué)組成、物理結(jié)構(gòu)和生理活動(dòng)，達(dá)到防腐滅菌目的。三、化學(xué)消毒法氣體滅菌法使用能形成氣體或蒸汽的化學(xué)藥品適用于不耐熱又不能過濾的藥品（混懸液、固體藥物等環(huán)氧乙烷滅菌法（制藥設(shè)備、注射器、生物制品）

甲醛蒸汽熏蒸滅菌法（車間、制藥設(shè)備）其他蒸汽熏蒸滅菌法浸泡與表面消毒法0.1%新潔爾滅（苯扎溴銨）0.2%—0.5%過氧乙酸2%煤酚皂溶液（來蘇水）潔凈區(qū)地面、門、墻、玻璃窗、天花板、清潔間水池和清潔工具的消毒70%—75%乙醇：皮膚、直接接觸藥物的儀器設(shè)備藥品生物檢定技術(shù)的基本操作提綱一、藥品微生物檢定技術(shù)的基本程序二、常用儀器三、無菌操作四、消毒滅菌（一）采樣

藥品微生物檢定的采樣除了與理化分析法的抽樣一樣，遵循隨機(jī)、客觀、均勻、合理的抽樣原則外，還必須對(duì)抽樣過程實(shí)施有效防止微生物污染的措施，以保證微生物檢測(cè)結(jié)果的代表性、真實(shí)性和有效性。為此，采樣應(yīng)由專門的無菌采樣員或微生物檢驗(yàn)員進(jìn)行具體的采樣工作或?qū)嵤┎蓸拥谋O(jiān)管工作。一、藥品微生物檢定技術(shù)的基本程序（二）樣品檢驗(yàn)前處理