2025年冀教新版選擇性必修3生物上冊月考試卷含答案

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請(qǐng)※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年冀教新版選擇性必修3生物上冊月考試卷含答案考試試卷考試范圍：全部知識(shí)點(diǎn)；考試時(shí)間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級(jí)：______考號(hào)：______總分欄題號(hào)一二三四五總分得分評(píng)卷人得分一、選擇題(共8題，共16分)1、三親嬰兒有三個(gè)親代；可避免夫妻將某些致病基因傳遞給嬰兒。下圖是三親嬰兒培育流程的示意圖，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行核移植的過程中，可采用顯微操作B.采集到的精子可直接與培養(yǎng)后的卵母細(xì)胞進(jìn)行受精C.培育三親嬰兒要采用核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)D.三親嬰兒可能會(huì)面臨歧視、社會(huì)倫理道德等問題2、某種線性DNA含有限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI的1個(gè)酶切位點(diǎn)。該DNA樣品（甲）經(jīng)EcoRI酶切后；在DNA連接酶催化下形成產(chǎn)物乙。則反應(yīng)液中產(chǎn)物乙共有。

A.1種B.2種C.3種D.4種3、利用菠蘿蜜制作果醋的大致流程為：先在滅菌的果肉勻漿中接種酵母菌，發(fā)酵6天后，再接入活化的醋酸桿菌，發(fā)酵5天。下列有關(guān)敘述正確的是（）A.酵母菌和醋酸桿菌均是原核生物B.接入醋酸桿菌后，應(yīng)適當(dāng)升高發(fā)酵溫度C.酵母菌和醋酸桿菌發(fā)酵過程中都需要密閉條件D.酵母菌和醋酸桿菌均以有絲分裂的方式進(jìn)行增殖4、下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的敘述，正確的是（）A.取材時(shí)可選用雞血、洋蔥、香蕉等富含DNA的材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)B.將白色絲狀物置于2mol/L的NaCl溶液中，離心后棄去上清液C.可將洋蔥置于清水中，細(xì)胞吸水破裂后將DNA釋放出來D.鑒定DNA時(shí)，應(yīng)將絲狀物直接加入到二苯胺試劑中并進(jìn)行沸水浴5、為初步探究某動(dòng)物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡稱phb2基因），大小為0.9kb（1kb=1000堿基對(duì)），利用大腸桿菌表達(dá)該蛋白。圖1為所用載體圖譜示意圖，圖中限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)見下表，phb2基因序列不含圖1中限制酶的識(shí)別序列。轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌提取質(zhì)粒，再用選中的兩種限制酶進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離，結(jié)果如圖2．下列敘述錯(cuò)誤的是（）

相關(guān)限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)（注：箭頭表示切割位點(diǎn)）。名稱識(shí)別序列及切割位點(diǎn)名稱識(shí)別序列及切割位點(diǎn)HindⅢA↓AGCTTTTCGA↑AEcoRIG↓AATTCCTTAA↑GPvitⅡCAG↓CTGGTC↑GACPstIGA↑CGTCGA↑CGTCKpnⅠG↓GATCCCCATG↑GBamHIG↓GATCCCCTAG↑G

A.需設(shè)計(jì)特異性的引物通過PCR技術(shù)擴(kuò)增phb2基因B.為使phb2基因與載體正確連接，在擴(kuò)增的phb2基因兩端分別引入KpnⅠ和EcoRⅠ兩種不同限制酶的識(shí)別序列C.經(jīng)過兩種限制酶酶切的phb2基因與載體進(jìn)行連接時(shí)，可選用T4DNA連接酶D.圖2中3號(hào)的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒6、玉米的賴氨酸含量比較低，科學(xué)家將合成賴氨酸的關(guān)鍵酶——天冬氨酸激酶中352位的蘇氨酸變成異亮氨酸，二氫吡啶二羧酸合成酶中104位的天冬氨酸變成異亮氨酸后，可大大提高玉米中的賴氨酸含量。下列有關(guān)蛋白質(zhì)工程的敘述，正確的是（）A.蛋白質(zhì)工程的目的是獲得滿足人類生產(chǎn)和生活需求的蛋白質(zhì)B.經(jīng)蛋白質(zhì)工程改造后的兩種酶改變氨基酸這一性狀不可遺傳C.利用基因工程技術(shù)不能改變基因上的特定位點(diǎn)的核苷酸序列D.對(duì)兩種酶進(jìn)行改造可通過直接改造蛋白酶的分子結(jié)構(gòu)來實(shí)現(xiàn)7、下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.在體細(xì)胞核移植過程中，普遍使用的去核方法是顯微操作法B.由于體細(xì)胞分化程度高，因此體細(xì)胞核移植難度高于胚胎細(xì)胞核移植C.非人靈長類動(dòng)物的體細(xì)胞核移植難度較大D.克隆動(dòng)物所利用的細(xì)胞核可以是卵細(xì)胞或精子中的細(xì)胞核8、現(xiàn)有甲、乙兩只綿羊，甲綿羊?qū)儆诳寺⊙颍揖d羊?qū)儆谠嚬苎?。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.甲、乙綿羊的培育過程中都應(yīng)用了體外受精技術(shù)B.甲綿羊的遺傳物質(zhì)可來自兩個(gè)雌性親本，乙綿羊不可以C.培育這兩只綿羊的生殖方式不相同D.兩只羊的體外早期胚胎培養(yǎng)都經(jīng)歷了桑甚胚、囊胚等階段評(píng)卷人得分二、多選題(共5題，共10分)9、下列關(guān)于“轉(zhuǎn)基因”的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.轉(zhuǎn)入的外源基因不會(huì)使作物的其他基因的表達(dá)受到影響B(tài).被轉(zhuǎn)移的基因是功能已知的基因，人們對(duì)它們研究得已經(jīng)相當(dāng)透徹，絕對(duì)不會(huì)引起安全性問題C.在“轉(zhuǎn)基因”的過程中，必須用到工具酶D.轉(zhuǎn)基因技術(shù)成果已進(jìn)入人類的生產(chǎn)和生活，特別是在醫(yī)藥和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上發(fā)揮了極大的作用10、下列關(guān)于傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.較高溫度和密閉環(huán)境有利于果醋的發(fā)酵B.鹽的用量、酒的種類和用量、溫度等均會(huì)影響腐乳風(fēng)味C.果酒、果醋和腐乳制作的微生物細(xì)胞呼吸產(chǎn)生CO2的場所都是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)D.與自然發(fā)酵相比，人工接種菌種不易被雜菌污染11、下面為制備單克隆抗體過程示意圖，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.①表示B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞均是從小鼠的脾臟中提取的B.④中的篩選是通過抗原—抗體反應(yīng)進(jìn)行的C.④中的篩選是為了獲得能產(chǎn)生多種抗體的雜交瘤細(xì)胞D.⑤可以無限增殖12、培養(yǎng)胡蘿卜根組織可獲得試管苗；獲得試管苗的過程如圖所示。

有關(guān)敘述正確的是（）A.消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害B.步驟③切取的組織塊中要帶有形成層，因?yàn)樾纬蓪尤菀渍T導(dǎo)形成愈傷組織C.從步驟⑤到步驟⑥需要更換新的培養(yǎng)基主要是因?yàn)橛泻Υx產(chǎn)物積累D.步驟⑥要進(jìn)行照光培養(yǎng)，誘導(dǎo)葉綠素的形成，使試管苗能夠進(jìn)行光合作用13、如圖是科研人員構(gòu)建的類精子單倍體胚胎干細(xì)胞，以及利用該種細(xì)胞獲得半克隆小鼠的過程（圖中序號(hào)表示過程）。下列敘述正確的是（）

A.過程①使受精卵中的遺傳物質(zhì)減少一半B.過程②需在培養(yǎng)液中添加抗生素和血清C.過程③獲得的干細(xì)胞只有一條性染色體D.半克隆小鼠為雌性且與受體遺傳特性不同評(píng)卷人得分三、填空題(共8題，共16分)14、目的基因是指：______15、為了避免外源DNA等因素污染，PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行_____________。而使用的緩沖液并在__________℃存儲(chǔ)。16、去除DNA中的雜質(zhì)，可以在濾液中加入2mol/L濃度的NaCL溶液，目的是____去除__________________；再調(diào)節(jié)NaCL溶液濃度為0．14mol/L，目的是_______________，_______________去除_______________；最后用濃度為2mol/L的NaCL溶液重新溶解________________17、請(qǐng)回答有關(guān)植物細(xì)胞工程的問題：

（1）在植物中，一些分化的細(xì)胞，經(jīng)過________的誘導(dǎo)，可以脫分化失去其__________而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞。

（2）胡蘿卜的組織培養(yǎng)中，將接種后的胡蘿卜組織塊，放在恒溫_________（填：“光照”或“黑暗”）條件下培養(yǎng)。一段時(shí)間后，將生長良好的愈傷組織轉(zhuǎn)接到_________培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。

（3）在植物組織培養(yǎng)過程中，由于培養(yǎng)細(xì)胞一直處于不斷的分生狀態(tài)，因此容易受到__________的影響而產(chǎn)生突變。為篩選出具有抗鹽性狀的突變體，需將種子播種在含_____的培養(yǎng)基上，獲得所需個(gè)體。18、在我國市場上究竟有多少種轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品呢？一位同學(xué)帶著這樣的問題，進(jìn)行了調(diào)查并將結(jié)果歸納成下圖?

對(duì)該同學(xué)的調(diào)查和歸納結(jié)果，有人表示認(rèn)同，有人提出質(zhì)疑?質(zhì)疑者認(rèn)為：目前我國市場上根本沒有大豆?玉米或甜菜的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品?我們的觀點(diǎn)是什么_____？19、基因工程是蛋白質(zhì)工程的關(guān)鍵技術(shù)；蛋白質(zhì)工程是基因工程的延伸。有人對(duì)基因工程和蛋白質(zhì)工程的關(guān)系進(jìn)行了比較，并歸納為下表。

基因工程與蛋白質(zhì)工程的比較。比較項(xiàng)目蛋白質(zhì)工程蛋白質(zhì)工程原理中心法則中心法則區(qū)別過程獲取目的基因→構(gòu)建表達(dá)載體→導(dǎo)入受體細(xì)胞→目的基因的檢測與鑒定預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測氨基酸序列→合成DNA→表達(dá)出蛋白質(zhì)實(shí)質(zhì)定向改造生物的遺傳特性，以獲得人類所需要的生物類型或生物產(chǎn)品（基因的異體表達(dá)）定向改造蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)以生產(chǎn)人類所需要的蛋白質(zhì)定向改造蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)以生產(chǎn)人類所需要的蛋白質(zhì)結(jié)果生產(chǎn)自然界中已有的蛋白質(zhì)生產(chǎn)自然界中已有的蛋白質(zhì)生產(chǎn)自然界中已有的蛋白質(zhì)聯(lián)系蛋白質(zhì)工程是第二代基因工程

上表的比較是否正確？如果有不妥之處，嘗試進(jìn)行修改。_________20、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：_____、_____、_____、_____等。21、第四步：_____評(píng)卷人得分四、判斷題(共2題，共12分)22、生物武器包括致病菌類、病毒類和生化毒劑類等。()A.正確B.錯(cuò)誤23、“設(shè)計(jì)試管嬰兒”與“試管嬰兒”相比在植入前需要對(duì)胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷。()A.正確B.錯(cuò)誤評(píng)卷人得分五、綜合題(共4題，共24分)24、M基因編碼的M蛋白在動(dòng)物A的肝細(xì)胞中特異性表達(dá)；現(xiàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過核移植；胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)獲得M基因失活的轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物A，流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：

（1）在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是________，這類酶能將特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的________鍵斷開，重組質(zhì)粒導(dǎo)入成纖維細(xì)胞的過程稱為________。

（2）在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)，需要________________；目的是清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。

（3）與體細(xì)胞核移植技術(shù)相比，胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率更高，原因是________________。從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細(xì)胞，在形態(tài)上表現(xiàn)為________________________，功能上具有________。

（4）克隆動(dòng)物A與為其提供核和去核卵母細(xì)胞的雙親的性狀不完全相同的原因是_____________________。25、腐乳是通過微生物發(fā)酵制成的食品；其制作流程如下，請(qǐng)回答有關(guān)問題：

（1）民間制作腐乳時(shí)，豆腐塊上生長的毛霉來自空氣中的毛霉孢子，現(xiàn)代的腐乳生產(chǎn)是在嚴(yán)格的無菌條件下，將優(yōu)良的毛霉菌種直接接種在豆腐上，這樣做的目的是什么？___________。

（2）制作腐乳的原料中哪種有機(jī)物含量比較高？________；毛霉可利用體內(nèi)的酶將其分解成哪些小分子有機(jī)物？____________________。

（3）在用鹽腌制腐乳的過程中，若鹽的濃度過低會(huì)出現(xiàn)什么現(xiàn)象？____________。

（4）鹵湯中酒的含量為什么要控制在12%左右？_______________________。26、人類γ基因啟動(dòng)子上游的調(diào)控序列中含有BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)；該位點(diǎn)結(jié)合BCL11A蛋白后，γ基因的表達(dá)被抑制。通過改變該結(jié)合位點(diǎn)的序列，解除對(duì)γ基因表達(dá)的抑制，可對(duì)某種地中海貧血癥進(jìn)行基因治療?？蒲腥藛T擴(kuò)增了γ基因上游不同長度的片段，將這些片段分別插入表達(dá)載體中進(jìn)行轉(zhuǎn)化和熒光檢測，以確定BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)的具體位置。相關(guān)信息如圖所示。

（1）為將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入載體指導(dǎo)熒光蛋白基因表達(dá)，需在引物末端添加限制酶識(shí)別序列。據(jù)圖可知，在F1～F7末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是____，在R末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是_____。本實(shí)驗(yàn)中，從產(chǎn)物擴(kuò)增到載體構(gòu)建完成的整個(gè)過程共需要____種酶。

（2）將構(gòu)建的載體導(dǎo)入除去BCL11A基因的受體細(xì)胞，成功轉(zhuǎn)化后，含F(xiàn)1～F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物的載體表達(dá)熒光蛋白，受體細(xì)胞有熒光，含F(xiàn)7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光。含F(xiàn)7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光的原因是____。

（3）向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，含F(xiàn)1～F4與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞不再有熒光，而含F(xiàn)5～F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞仍有熒光。若γ基因上游調(diào)控序列上與引物序列所對(duì)應(yīng)的位置不含有BCL11A蛋白的結(jié)合位點(diǎn)序列，據(jù)此結(jié)果可推測，BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)位于_____，理由是___。27、如圖是利用現(xiàn)代生物工程技術(shù)治療遺傳性糖尿?。ɑ蛉毕輰?dǎo)致胰島B細(xì)胞不能正常合成胰島素）的過程設(shè)計(jì)圖解。請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）圖中①是取自患者體細(xì)胞的___________，過程②表示_____________技術(shù)。過程②通常用去核卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞，除了因?yàn)樗w積大、易操作，含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)外，還因?yàn)樗黖_____________。

（2）重組細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)會(huì)發(fā)生貼壁生長現(xiàn)象，要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來，需要用____________________酶等進(jìn)行處理。

（3）圖中過程③表示_____________技術(shù)，過程③中將正常胰島素基因?qū)肱咛ジ杉?xì)胞通常采用的方法是_____________。

（4）與一般的異體移植相比，圖示方法最大的優(yōu)點(diǎn)是_________________。參考答案一、選擇題(共8題，共16分)1、B【分析】【分析】

1；分析題圖：圖示表示三親嬰兒的培育過程；由圖可知，三親嬰兒的培育采用了核移植技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)和胚胎移植技術(shù)等。

2；試管嬰兒技術(shù)是指通過人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精；并通過培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎后，再經(jīng)移植后產(chǎn)生后代的技術(shù)。設(shè)計(jì)試管嬰兒技術(shù)是通過體外受精獲得許多胚胎，然后從中選擇符合要求的胚胎，再經(jīng)移植后產(chǎn)生后代的技術(shù)。

【詳解】

A；對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行核移植的過程中；可采用顯微操作，需要用微型吸管一并吸出細(xì)胞核和第一極體，A正確；

B；體外受精時(shí)采集的精子需要經(jīng)過獲能處理后才可與減數(shù)第二次分裂中期的卵母細(xì)胞受精；B錯(cuò)誤；

C；由圖可知；三親嬰兒的培育采用了核移植技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)和胚胎移植技術(shù)等，C正確；

D；三親嬰兒可能會(huì)面臨歧視、社會(huì)倫理道德等問題；如有人認(rèn)為這項(xiàng)技術(shù)的本質(zhì)就是人造胚胎，相當(dāng)于“設(shè)計(jì)”新生兒，甚至是在制造轉(zhuǎn)基因人，D正確。

故選B。2、C【分析】【分析】

【詳解】

分析題圖和題意可知，線性DNA含有限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI的1個(gè)酶切位點(diǎn)，因此經(jīng)過該酶切割后會(huì)形成兩個(gè)相同的黏性末端，切割后形成的兩個(gè)DNA片段若分別用a和b表示，由于a和b具有相同的黏性末端，因此利用DNA連接酶催化后，能夠產(chǎn)生aa連接、bb連接、ab連接三種產(chǎn)物；C正確。

故選C。

【點(diǎn)睛】

本題考查基因工程的有關(guān)知識(shí)，意在考查考生識(shí)圖能力和能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)與觀點(diǎn)，通過比較、分析與綜合等方法對(duì)某些生物學(xué)問題進(jìn)行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論的能力。3、B【分析】【分析】

參與果酒制作的微生物是酵母菌；其新陳代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型。參與果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型。果醋制作的原理：當(dāng)氧氣；糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸。當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿帷?/p>

【詳解】

A；酵母菌是真核生物；A錯(cuò)誤；

B；醋酸菌的最適溫度為30-35度；比酵母菌高，所以在接入醋酸桿菌后，應(yīng)適當(dāng)升高發(fā)酵溫度，B正確；

C；醋酸菌是需氧型微生物；所以培養(yǎng)過程中不能密閉，需要不斷通入氧氣，C錯(cuò)誤；

D；醋酸桿菌是原核生物；分裂方式是二分裂，而不是有絲分裂，D錯(cuò)誤。

故選B。4、A【分析】【分析】

DNA粗提取選材的標(biāo)準(zhǔn)：DNA含量高；并且材料易得。由于哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核和細(xì)胞器，因此不采用哺乳動(dòng)物的血液。

【詳解】

A；由于哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核和細(xì)胞器；因此不采用豬血來提取DNA，可選用雞血、洋蔥、香蕉等富含DNA的材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，A正確；

B；DNA在2mol/L的氯化鈉溶液中溶解度較大；將晾干的白色絲狀物置于2mol/L的NaCl溶液中，會(huì)發(fā)生溶解現(xiàn)象，離心后應(yīng)保留上清液，B錯(cuò)誤；

C；將洋蔥置于清水中；由于細(xì)胞壁的保護(hù)，細(xì)胞吸水后不會(huì)破裂，C錯(cuò)誤；

D；鑒定DNA時(shí)；應(yīng)將絲狀物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺試劑并進(jìn)行沸水浴，反應(yīng)后呈藍(lán)色，D錯(cuò)誤。

故選A。5、B【分析】【分析】

圖1為所用載體圖譜示意圖，目的基因要插在啟動(dòng)子和終止子之間，可用EcoRⅠ和PvitⅡ兩種不同限制酶切割，KpnⅠ在啟動(dòng)子和終止子之外還有切割位點(diǎn)，所以不用KpnⅠ切割；由圖3可知，EcoRⅠ切割得到黏性末端，PvitⅡ切割可得到平末端，由于目的基因不含圖1中限制酶的識(shí)別序列，所以要在目的基因兩端分別加上EcoRⅠ和PvitⅡ切割后的序列末端，再用T4DNA連接酶將目的基因連接到載體上；完成基因表達(dá)載體的構(gòu)建。

【詳解】

A、通過PCR技術(shù)擴(kuò)增phb2基因時(shí)需設(shè)計(jì)根據(jù)phb2基因特異性的引物；A正確；

B；目的基因應(yīng)導(dǎo)入啟動(dòng)子和終止子之間；兩者之間存在三種限制酶切點(diǎn)，但是由于KpnⅠ在質(zhì)粒上不止一個(gè)酶切位點(diǎn)，所以應(yīng)該選擇EcoRⅠ和PvitⅡ兩種不同限制酶的識(shí)別序列，B錯(cuò)誤；

C、T4DNA連接酶既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端；又可以“縫合”雙鏈DNA片段的平末端，但連接平末端的效率相對(duì)比較低，可以用T4DNA連接酶連接，C正確；

D、題干顯示，目的基因大小約0.9kb，圖2中3號(hào)的質(zhì)粒酶切后得到約6kb片段和約1kb片段，約1kb片段很可能是目的基因；D正確。

故選B。6、A【分析】【分析】

蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)；通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。

【詳解】

A；蛋白質(zhì)工程的目標(biāo)是根據(jù)人們對(duì)蛋白質(zhì)功能的特定需求；對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)改造，A正確；

B；經(jīng)蛋白質(zhì)工程改造后的酶的基因發(fā)生了改變；因此經(jīng)蛋白質(zhì)工程改造后的兩種酶改變氨基酸這一性狀可以遺傳，B錯(cuò)誤；

C；利用基因工程技術(shù)可以改變基因上特定位點(diǎn)的核苷酸序列；進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)的改造，C錯(cuò)誤；

D；要對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造；必須通過改造或合成基因來完成，D錯(cuò)誤。

故選A。7、D【分析】【分析】

動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)是指將供核細(xì)胞的細(xì)胞移入去核的卵母細(xì)胞中；構(gòu)成的重組細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞分裂；分化可形成新個(gè)體。

【詳解】

A；在體細(xì)胞核移植過程中；普遍使用顯微操作法去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核以及與之同時(shí)產(chǎn)生的極體，A正確；

BC；由于體細(xì)胞分化程度高；恢復(fù)分裂能力難度大，因此體細(xì)胞核移植難度高于胚胎細(xì)胞核移植，非人靈長類動(dòng)物的體細(xì)胞核移植難度較大，BC正確；

D；克隆動(dòng)物所利用的細(xì)胞核可以是體細(xì)胞或胚胎細(xì)胞的細(xì)胞核；D錯(cuò)誤。

故選D。8、A【分析】【分析】

胚胎移植實(shí)質(zhì)上是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移。進(jìn)行胚胎移植的優(yōu)勢是可以充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖潛力。

【詳解】

A；甲(克隆羊)通過無性生殖獲得；沒有應(yīng)用到體外受精技術(shù)，A錯(cuò)誤；

B；甲(克隆羊)遺傳物質(zhì)主要來自于提供細(xì)胞核和卵細(xì)胞的親本；提供細(xì)胞核的親本可為雌性親本，遺傳物質(zhì)可來自于兩個(gè)雌性親本；乙(試管羊)是精子和卵細(xì)胞通過體外受精而得到的個(gè)體，遺傳物質(zhì)分別來自于雄性親本和雌性親本，B正確；

C；甲(克隆羊)通過無性生殖獲得；主要應(yīng)用了核移植技術(shù)和胚胎移植技術(shù)；乙(轉(zhuǎn)基因羊)通過基因工程獲得，主要應(yīng)用了體外受精、轉(zhuǎn)基因技術(shù)和胚胎移植技術(shù)，C正確；

D；羊的早期胚胎培養(yǎng)一般培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚階段再進(jìn)行進(jìn)行胚胎移植；D正確。

故選A。二、多選題(共5題，共10分)9、A:B【分析】【分析】

1；基因工程的工具：（1）限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列；并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂；（2）DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵；（3）運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。

2；轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)、過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對(duì)生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。

【詳解】

A；外源基因插入宿主基因組的部位往往是隨機(jī)的；因而極有可能破壞原有基因，并使之表達(dá)受到影響，A錯(cuò)誤；

B；目前科學(xué)家對(duì)基因的結(jié)構(gòu)、基因間的相互作用以及基因的調(diào)控機(jī)制等都了解相當(dāng)有限；再加上轉(zhuǎn)移的基因雖然是功能已知的基因，但不少卻是異種生物的基因，因此可能會(huì)引起安全性問題，B錯(cuò)誤；

C；在“轉(zhuǎn)基因”的過程中；必然用到工具酶，如限制酶和DNA連接酶，C正確；

D；轉(zhuǎn)基因技術(shù)成果在農(nóng)業(yè)和醫(yī)藥上發(fā)揮了極大的作用；已進(jìn)入人類的生產(chǎn)和生活，D正確。

故選AB。

【點(diǎn)睛】10、A:C【分析】【分析】

1；在利用酵母菌發(fā)酵時(shí)最好是先通入足夠的無菌空氣在有氧環(huán)境下一段時(shí)間使其繁殖；再隔絕氧氣進(jìn)行發(fā)酵；酒精發(fā)酵的最佳溫度是在18℃～25℃，pH最好是弱酸性。

2；醋酸菌是好氧性細(xì)菌；當(dāng)缺少糖源時(shí)和有氧條件下，可將乙醇（酒精）氧化成醋酸；當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；醋酸菌生長的最佳溫度是在30℃～35℃。

3；豆腐的主要營養(yǎng)成分是蛋白質(zhì)和脂肪；都是大分子有機(jī)化合物，難以消化、吸收，毛霉、酵母菌等多種微生物分泌的蛋白酶，能將蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可將脂肪分解成甘油和脂肪酸，在多種微生物的協(xié)同下，豆腐轉(zhuǎn)變成腐乳。

【詳解】

A；果醋制作的菌種是醋酸菌；屬于好氧菌，故密閉環(huán)境不利于果醋的發(fā)酵，A錯(cuò)誤；

B；腐乳制作過程中；鹽的用量、酒的種類和用量、溫度等均會(huì)影響腐乳風(fēng)味，B正確；

C、參與果酒制作的酵母菌是兼性厭氧型真核生物，參與果醋制作的醋酸菌是需氧型原核生物，參與腐乳制作的毛霉是需氧型真核生物，所以果酒制作的微生物細(xì)胞呼吸產(chǎn)生CO2的場所是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)或線粒體、果醋制作的微生物細(xì)胞呼吸產(chǎn)生CO2的場所是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，而腐乳制作的微生物細(xì)胞呼吸產(chǎn)生CO2的場所是線粒體；C錯(cuò)誤；

D；與自然發(fā)酵相比；人工接種過程中利用了嚴(yán)格的滅菌措施，可以防止其它雜菌污染，且發(fā)酵獲得的產(chǎn)品品質(zhì)更好，D正確。

故選AC。

【點(diǎn)睛】11、A:C【分析】據(jù)圖分析；①過程表示獲取B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞；②過程促進(jìn)細(xì)胞融合，采用離心；電刺激、聚乙二醇、滅活病毒等試劑誘導(dǎo)，篩選出雜交瘤細(xì)胞；④過程通過專一抗體檢驗(yàn)陽性，篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群；⑥過程表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。

【詳解】

A；B淋巴細(xì)胞是從小鼠的脾臟中提取的；骨髓瘤細(xì)胞不是，A錯(cuò)誤；

B；④中篩選能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；可以通過檢測抗原、抗體反應(yīng)，如果有反應(yīng)說明表達(dá)了抗體，B正確；

C；④中的篩選是為了獲得能產(chǎn)生一種抗體的雜交瘤細(xì)胞；C錯(cuò)誤；

D；⑤可以無限增殖；也能產(chǎn)生特異性抗體，D正確。

故選AC。12、A:B:D【分析】【分析】

植物組織培養(yǎng)過程：離體的植物器官；組織或細(xì)胞→愈傷組織→胚狀體→植物體。常用的植物激素生長素和細(xì)胞分裂素。

【詳解】

A；圖中對(duì)根段進(jìn)行消毒；消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，防止培養(yǎng)過程中雜菌污染，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害，A正確；

B；步驟③切取的組織塊中要帶有形成層；形成層的細(xì)胞保持分裂和分化能力，全能性相對(duì)容易表現(xiàn)出來，形成層容易誘導(dǎo)形成愈傷組織，B正確；

C；從步驟⑤到步驟⑥需要更換新的培養(yǎng)基主要是因?yàn)檎T導(dǎo)愈傷組織形成的植物激素和誘導(dǎo)愈傷組織分化的植物激素的種類和比例不同；C錯(cuò)誤；

D；步驟⑥要進(jìn)行照光培養(yǎng)；誘導(dǎo)葉綠素的形成，因?yàn)槿~綠素的形成需要光照，使試管苗能夠進(jìn)行光合作用，D正確。

故選ABD。13、B:C:D【分析】【分析】

“人造精子”是一種可以替代精子使卵細(xì)胞“受精”的單倍體胚胎干細(xì)胞。目前構(gòu)建成功的單倍體胚胎干細(xì)胞系；其細(xì)胞核內(nèi)包含的性染色體全部都是X染色體，而無包含Y染色體的細(xì)胞。單倍體胚胎干細(xì)胞在培養(yǎng)過程中可能會(huì)成為二倍體細(xì)胞，原因是有一部分單倍體細(xì)胞在分裂期時(shí)發(fā)生異常，跳過分裂期重新進(jìn)入分裂間期，導(dǎo)致DNA含量加倍。

【詳解】

A；過程①只是去掉雌原核遺傳物質(zhì)（核遺傳物質(zhì)）；受精卵中還有卵細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)的遺傳物質(zhì)，A錯(cuò)誤；

B；過程②需保證培養(yǎng)過程無菌；因而可添加抗生素，由于人們對(duì)細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)尚未全部研究清楚，因此在使用合成培養(yǎng)基時(shí)，通常需要添加血清等天然成分，B正確；

C；孤雌單倍體胚胎細(xì)胞只含有精子的染色體；而精子只含1條性染色體，因而過程③獲得的干細(xì)胞只有一條性染色體，C正確；

D；卵母細(xì)胞的性染色體是X；類精子單倍體胚胎干細(xì)胞的性染色體也是X，因而半克隆小鼠的性染色體是X，發(fā)育成雌性，受體只為胚胎提供營養(yǎng)物質(zhì)，不影響胚胎的遺傳物質(zhì)，D正確。

故選BCD。三、填空題(共8題，共16分)14、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】是人們所需要轉(zhuǎn)移或改造的基因15、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】高壓滅菌—2016、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】不容的雜質(zhì)析出DNA過濾溶液中的雜質(zhì)DNA17、略

【分析】【分析】

植物組織培養(yǎng)的條件：①細(xì)胞離體和適宜的外界條件（如適宜溫度；適時(shí)的光照、pH和無菌環(huán)境等）；②一定的營養(yǎng)（無機(jī)、有機(jī)成分）和植物激素（生長素和細(xì)胞分裂素）。決定植物脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素的種類和比例；特別是生長素和細(xì)胞分裂素的協(xié)同作用在組織培養(yǎng)過程中非常重要，被稱為“激素杠桿”。

【詳解】

（1）在植物中；一些分化的細(xì)胞，經(jīng)過激素的誘導(dǎo)，可以脫分化失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞。

（2）胡蘿卜的組織培養(yǎng)中；將接種后的胡蘿卜組織塊，放在恒溫黑暗條件下培養(yǎng)。一段時(shí)間后，將生長良好的愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。

（3）在植物組織培養(yǎng)過程中；由于培養(yǎng)細(xì)胞一直處于不斷的分生狀態(tài)，因此容易受到培養(yǎng)條件和外界壓力的影響而產(chǎn)生突變。為篩選出具有抗鹽性狀的突變體，需將種子播種在含一定濃度的鹽的培養(yǎng)基上，獲得所需個(gè)體。

【點(diǎn)睛】

本題考查植物組織培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記植物組織培養(yǎng)的過程、原理及條件，掌握植物組織培養(yǎng)技術(shù)的相關(guān)應(yīng)用，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確分析，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查?！窘馕觥竣?激素②.特有的結(jié)構(gòu)和功能③.黑暗④.分化⑤.培養(yǎng)條件和外界壓力⑥.一定濃度的鹽18、略

【分析】【詳解】

目前我國市場上的轉(zhuǎn)基因食品，從原料來源看，進(jìn)口的主要有大豆、油菜籽和玉米及相關(guān)產(chǎn)品，國內(nèi)生產(chǎn)的有棉籽油和番木瓜，故我國市場上有大豆等的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品?！窘馕觥磕壳拔覈袌錾系霓D(zhuǎn)基因食品，從原料來源看，進(jìn)口的主要有大豆、油菜籽和玉米及相關(guān)產(chǎn)品，國內(nèi)生產(chǎn)的有棉籽油和番木瓜。19、略

【分析】【詳解】

蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，其結(jié)果是生產(chǎn)自然界沒有的蛋白質(zhì)?！窘馕觥康鞍踪|(zhì)工程的結(jié)果是生產(chǎn)自然界沒有的蛋白質(zhì)20、略

【分析】略【解析】營養(yǎng)無菌、無毒的環(huán)境適宜的溫度、pH和滲透壓氣體環(huán)境21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】目的基因的檢測和鑒定四、判斷題(共2題，共12分)22、A【分析】【詳解】

生物武器是利用生物戰(zhàn)劑殺傷人員、牲畜、毀壞植物的武器。生物武器種類包括致病菌、病毒、生化毒劑以及經(jīng)過基因重組的致病菌等，故正確。23、A【分析】【分析】

“設(shè)計(jì)試管嬰兒”在植入前需要對(duì)胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷；而“試管嬰兒”是解決不孕不育等問題，不需要進(jìn)行遺傳學(xué)診斷。

【詳解】

“設(shè)計(jì)試管嬰兒”與“試管嬰兒”相比在植入前需要通過多種技術(shù)手段對(duì)胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷；以便選擇合適的設(shè)計(jì)出來的試管嬰兒。

故正確五、綜合題(共4題，共24分)24、略

【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲?。焕肞CR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)，個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

（1）基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）；故在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）。限制性內(nèi)切核酸內(nèi)切酶是作用于其所識(shí)別序列中兩個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。轉(zhuǎn)化是指將目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。因此，重組質(zhì)粒導(dǎo)入成纖維細(xì)胞的過程稱為轉(zhuǎn)化。

（2）在無菌；無毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)；需要定期更換培養(yǎng)液，目的是清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。

（3）由于動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低；恢復(fù)其全能性相對(duì)容易，動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難，故與體細(xì)胞核移植技術(shù)相比，胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率更高。胚胎干細(xì)胞在形態(tài)上表現(xiàn)為細(xì)胞體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。

（4）克隆動(dòng)物A的細(xì)胞核的遺傳物質(zhì)來自提供細(xì)胞核的個(gè)體；細(xì)胞質(zhì)的遺傳物質(zhì)來自去核卵母細(xì)胞，因此克隆動(dòng)物A與為其提供核和去核卵母細(xì)胞的雙親的性狀不完全相同，生物體的性狀主要取決于細(xì)胞核，因此克隆動(dòng)物A的性狀主要與提供核的個(gè)體的性狀相同。

【點(diǎn)睛】

本題結(jié)合圖示考查基因工程、核移植的相關(guān)知識(shí)，涉及知識(shí)點(diǎn)較多，但難度不大，要求考生掌握基礎(chǔ)知識(shí)，屬于考綱中識(shí)記與理解層次?！窘馕觥肯拗菩院怂醿?nèi)切酶（限制酶）磷酸二酯鍵轉(zhuǎn)化定期更換培養(yǎng)液胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易細(xì)胞體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯發(fā)育的全能性克隆動(dòng)物A細(xì)胞核遺傳物質(zhì)來自提供核的個(gè)體，細(xì)胞質(zhì)的遺傳物質(zhì)來自去核卵母細(xì)胞的個(gè)體25、略

【分析】【分析】

豆腐就是毛霉等微生物的培養(yǎng)基；相當(dāng)于固體培養(yǎng)基．傳統(tǒng)的腐乳制作過程中，豆腐塊上生長的毛霉來自空氣中的毛霉孢子，而現(xiàn)代的腐乳生產(chǎn)將優(yōu)良的毛霉菌種接種在豆腐上，可以避免其他菌種的污染，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。制作過程中加鹽可以析出豆腐中的水分，使豆腐塊變硬，在后期的制作過程中不會(huì)過早酥爛。同時(shí)，鹽能抑制微生物的生長，避免豆腐塊腐敗變質(zhì)。

（1）

在制作發(fā)酵產(chǎn)品時(shí)要防止雜菌的入侵；所以要求接種時(shí)是無菌條件，保證產(chǎn)品質(zhì)量。

（2）

制作腐乳的原料是豆腐；其中蛋白質(zhì)含量比較高；毛霉可利用體內(nèi)的酶蛋白質(zhì)分解成小分子肽和氨基酸。

（3）

在用鹽腌制腐乳的過程中；若鹽的濃度過低會(huì)導(dǎo)致雜交污染，使豆腐腐敗變質(zhì)。

（4）

鹵湯中酒的含量要控制在12%左右；酒的含量高低不足以殺菌，酒的含量過高會(huì)延長腐乳成熟的時(shí)間。

【點(diǎn)睛】

本題主要考查腐乳的制作過程，意在強(qiáng)化學(xué)生對(duì)腐乳在中關(guān)村的識(shí)記與掌握?！窘馕觥浚?）可以避免其他菌種污染；保證產(chǎn)品質(zhì)量。

（2）蛋白質(zhì)小分子的肽和氨基酸。

（3）不足以抑制微生物的生長；導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)。

（4）酒精含量過低，不足以抑制微生物的生長；含量過高，腐乳成熟的時(shí)間將延長26、略

【分析】【分析】

1；據(jù)題意可知；科研人員擴(kuò)增了γ基因上游不同長度的片段，據(jù)圖中注釋可知，F(xiàn)1~F7以及R位置均為引物，故擴(kuò)增的序列分別是引物F1和引物R之間的序列，引物F2和引物R之間的序列，引物F3和引物R之間的序列，引物F4和引物R之間的序列，引物F5和引物R之間的序列，引物F6和引物R之間的序列，引物F7和引物R之間的序列；

2、據(jù)圖中對(duì)限制酶的注釋可知，限制酶MunⅠ識(shí)別并切割后的黏性末端與限制酶EcoRⅠ識(shí)別并切割后的黏性末端相同，限制酶XhoⅠ識(shí)別并切割后的黏性末端與限制酶SalⅠ識(shí)別并切割后的黏性末端相同。

【詳解】

（1）據(jù)提意可知，需要將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入并指導(dǎo)熒光蛋白基因的表達(dá)，則含有啟動(dòng)子的擴(kuò)增后的產(chǎn)物讀取方向與熒光蛋白基因的讀取方向一致，故擴(kuò)增后的產(chǎn)物中的R端與熒光蛋白基因中限制酶MunⅠ識(shí)別序列端結(jié)合，才能保證擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入并指導(dǎo)熒光蛋白基因的表達(dá)。要做到定向插入，需要引物末端兩端添加限制酶的識(shí)別序列，且被限制酶識(shí)別并切割后，兩端的黏性末端不能相同。而擴(kuò)增后的產(chǎn)物中可能含有MunⅠ和XhoⅠ的識(shí)別位點(diǎn)，故在引物末端添加限制酶的識(shí)別序列不能被限制酶MunⅠ和XhoⅠ所識(shí)別，故應(yīng)該選用添加限制酶EcoRⅠ和限制酶SalⅠ識(shí)別序列，據(jù)圖中對(duì)限制酶的注釋可知，限制酶MunⅠ識(shí)別并切割后的黏性末端與限制酶EcoRⅠ識(shí)別并切割后的黏性末端相同，故R末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是EcoRⅠ，在F1～F7