細(xì)胞凋亡專題

關(guān)鍵詞：凋亡，DNA損傷，CCK8，TUNEL、AnnexinV、Caspase飛躍的載體TUNEL、DNA損傷、AnnexinV、Caspase，細(xì)胞凋亡的多維度研究細(xì)胞凋亡是細(xì)胞狀態(tài)研究的熱點(diǎn)之一，細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，就像樹葉或花的自然凋落一樣，對(duì)于這種生物學(xué)觀察，借用希臘“Apoptosis”來表示，意思是像樹葉或花的自然凋落，可譯為細(xì)胞凋亡。接下來我們會(huì)對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行精細(xì)解讀：圖片來自網(wǎng)絡(luò)細(xì)胞凋亡的研究主要從以下四個(gè)方向進(jìn)行：

分類

檢測方法

形態(tài)學(xué)顯微鏡觀察

細(xì)胞功能線粒體膜電位檢測、Annexin

V/PI

分子標(biāo)記凋亡分子標(biāo)記檢測、DNA損傷檢測蛋白標(biāo)記Caspase蛋白檢測DNALadder檢測：細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑A+B（1:1000）誘導(dǎo)后提取DNA電泳可檢測到階梯型條帶。DNA斷裂損傷檢測：細(xì)胞DNA損傷檢測在細(xì)胞凋亡中的作用非常關(guān)鍵。DNA損傷可以由多種因素引起，如紫外線、放射線、化學(xué)藥物、氧化應(yīng)激等。當(dāng)細(xì)胞中的DNA受到損傷時(shí)，細(xì)胞會(huì)啟動(dòng)一系列信號(hào)通路，以決定是修復(fù)損傷還是誘導(dǎo)凋亡。產(chǎn)品優(yōu)勢及特點(diǎn):組分齊全：包含優(yōu)質(zhì)彗星玻片和電泳液成分，防脫片效果好；操作簡便：無需蓋玻片，只需兩層同組膠，無需區(qū)分；膠層輕?。号恼崭颖憬?。TUNEL檢測：細(xì)胞死亡（凋亡或壞死）時(shí)，DNA發(fā)生斷裂。此時(shí)利用末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶（TdT），將核苷酸類似物摻入DNA鏈中，就可用抗體、點(diǎn)擊化學(xué)（Clickchemistry）等方法進(jìn)行檢測。細(xì)胞膜Annexin-V蛋白翻轉(zhuǎn)：Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。將Annexin-V進(jìn)行熒光素（FITC、PE）或biotin標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin-V作為熒光探針標(biāo)記，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生（綠色）。碘化丙啶(propidineiodide,PI)是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染（紅色）。因此將Annexin-V與PI匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。5.凋亡蛋白Caspase的檢測標(biāo)記：細(xì)胞凋亡途徑，是由一套明確的信號(hào)通路層層調(diào)控的。在絕大多數(shù)情況下，所有的凋亡信號(hào)都會(huì)匯集到凋亡的最終執(zhí)行者Caspase-3之上。上游的凋亡信號(hào)通過切割Caspase-3，使其具備酶活，并執(zhí)行最后的凋亡程序。半胱氨酸蛋白酶的Caspase家族已顯示在凋亡中起關(guān)鍵作用。哺乳動(dòng)物caspases可分為三個(gè)功能組：啟動(dòng)子半胱天冬酶（Caspase2、8、9和10），執(zhí)行者半胱天冬酶（Caspase-3、6和7）和炎性半胱天冬酶（Caspase1、4、5、11和12）。Caspase-1（ICE，白介素-1β-轉(zhuǎn)換酶）是哺乳動(dòng)物的caspase，負(fù)責(zé)將兩種炎性細(xì)胞因子白介素1β和IL-18的蛋白水解成活性細(xì)胞因子，從而引發(fā)促炎反應(yīng)。相關(guān)產(chǎn)品推薦：貨號(hào)名稱規(guī)格KTA2010一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（綠色熒光）50T/100TKTA2011一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（紅色熒光）50T/100TKTA4001線粒體膜電位分析試劑盒（JC-1法）20T/100T/500TKTA4002線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(MPTP)檢測試劑盒50T/100TKTA0002AnnexinV-AbFluor?488/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒50T/100TKTA0004Annexin

V-AbFluor?

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細(xì)胞凋亡檢測試劑盒50T/100TKTA0005AnnexinV-EGFP/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒20T/50T/100TKTA7010Fluo-4鈣離子檢測試劑盒200T/1000TKTA3040彗星法DNA損傷分析試劑盒（3孔載玻片）15T/75TKTA3020Caspase-1活性分析試劑盒（比色法）20T/50T/100TKTA3021Caspase-2活性分析試劑盒（比色法）20T/50T/100TKTA3022Caspase-3

活性分析試劑盒（比色法）20T/50T