2025年浙教版選擇性必修3生物上冊(cè)階段測(cè)試試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請(qǐng)※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁(yè)，總=sectionpages22頁(yè)第=page11頁(yè)，總=sectionpages11頁(yè)2025年浙教版選擇性必修3生物上冊(cè)階段測(cè)試試卷615考試試卷考試范圍：全部知識(shí)點(diǎn)；考試時(shí)間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級(jí)：______考號(hào)：______總分欄題號(hào)一二三四五六總分得分評(píng)卷人得分一、選擇題(共9題，共18分)1、戊型肝炎病毒是一種RNA病毒；ORF2基因編碼的結(jié)構(gòu)蛋白（pORF2）位于病毒表面，構(gòu)成病毒的衣売。我國(guó)科研人員利用基因工程技術(shù)，在大腸桿菌中表達(dá)pORF2，制備戊型肝炎疫苗，過(guò)程如圖。下列關(guān)于該疫苗的敘述正確的是（）

A.過(guò)程①需要的酶是RNA聚合酶，原料是U、G、CB.重組基因表達(dá)載體上的啟動(dòng)子需來(lái)源于戊型肝炎病毒C.過(guò)程⑤需要用聚乙二醇處理大腸桿菌使其處于感受態(tài)D.過(guò)程⑥大量制備pORF2蛋白前應(yīng)做相應(yīng)的檢測(cè)與鑒定2、甲；乙兩圖表示從細(xì)菌細(xì)胞中獲取目的基因的兩種方法；以下說(shuō)法中錯(cuò)誤的是（）

A.甲方法可建立該細(xì)菌的基因組文庫(kù)B.乙方法可建立該細(xì)菌的cDNA文庫(kù)C.甲方法要以脫氧核苷酸為原料D.乙方法需要反轉(zhuǎn)錄酶參與3、下列有關(guān)腐乳制作的敘述，正確的是（）A.所使用豆腐含水量過(guò)高有利于毛霉菌絲生長(zhǎng)B.腐乳坯堆積會(huì)改變發(fā)酵溫度而影響毛霉生長(zhǎng)C.鹵湯處理可使豆腐塊變硬且能抑制雜菌生長(zhǎng)D.加鹽腌制可抑制雜菌生長(zhǎng)且能賦予獨(dú)特風(fēng)味4、A種植物細(xì)胞和B種植物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)如圖所示（僅顯示細(xì)胞核）；將A；B兩種植物細(xì)胞去掉細(xì)胞壁后，誘導(dǎo)二者的原生質(zhì)體融合，形成單核的雜種細(xì)胞，若經(jīng)過(guò)組織培養(yǎng)得到了雜種植株，則該雜種植株是（）

A.二倍體，基因型是DdYyRrB.三倍體，基因型是DdYyRrC.四倍體，基因型是DdYyRrD.四倍體，基因型是DDddYYyyRRrr5、微生物代謝過(guò)程中產(chǎn)生的CO32-，可與環(huán)境中的Ca2+反應(yīng)形成碳酸鈣沉淀，這種現(xiàn)象稱為微生物誘導(dǎo)碳酸鈣沉淀（MICP）。MICP形成的機(jī)制多種多樣，通過(guò)細(xì)菌分解尿素引起碳酸鈣沉淀是最廣泛的方式。下列相關(guān)說(shuō)法正確的是（）A.尿素只有被土壤中的細(xì)菌分解成氨后，才能被植物利用B.通常用以尿素為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選分解尿素的細(xì)菌C.在培養(yǎng)基中加入酚酞指示劑，可以初步鑒定尿素分解菌D.尿素分解菌可以分解碳酸鈣質(zhì)碎石，有效避免土壤板結(jié)6、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)中常用的轉(zhuǎn)化方法之一。下列與該方法相關(guān)的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.土壤農(nóng)桿菌是重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞B.T—DNA是擬核DNA上的一段序列C.農(nóng)桿菌能侵染雙子葉植物和裸子植物D.新鮮葉圓片與農(nóng)桿菌在適宜條件下共培養(yǎng)，部分細(xì)胞會(huì)被轉(zhuǎn)化7、野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，賴氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變菌由于發(fā)生基因突變只能在添加了賴氨酸的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。下圖為以野生型菌株為材料，誘變、純化賴氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷突變株的部分流程圖，數(shù)字代表培養(yǎng)基，A、B、C表示操作步驟。下列有關(guān)說(shuō)法正確的是（）

（原位影印是指用無(wú)菌絨布輕蓋在已長(zhǎng)好菌落的培養(yǎng)基②上；然后不轉(zhuǎn)動(dòng)任何角度，將②上的菌落按原位“復(fù)印”至新的培養(yǎng)基③和④上）

A.野生型大腸桿菌能夠合成所需的全部氨基酸，因此培養(yǎng)基中無(wú)需提供氮源B.①②④培養(yǎng)基中需添加賴氨酸，而③培養(yǎng)基中不能添加賴氨酸C.需將①中的菌液適當(dāng)稀釋后，用接種環(huán)蘸取菌液在②上進(jìn)行劃線接種D.從④培養(yǎng)基中挑取乙菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)即可獲得所需突變株8、重慶忠州豆腐乳被業(yè)界稱為“腐乳王”，因風(fēng)味獨(dú)特而盛銷不衰，遠(yuǎn)銷英國(guó)、加拿大、中東、東南亞等國(guó)家和地區(qū)，腐乳的制作流程為“讓豆腐塊長(zhǎng)出白色菌絲（前期發(fā)酵）→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制”。下列相關(guān)說(shuō)法正確的是（）A.腐乳制作過(guò)程中有多種微生物的參與，其中起主要作用的是曲霉B.霉菌分泌的蛋白酶等物質(zhì)，能將蛋白質(zhì)分解為小分子肽和氨基酸C.加鹽和鹵湯腌制的目的僅僅是調(diào)味，并不能抑制瓶?jī)?nèi)雜菌的生長(zhǎng)D.豆腐塊相當(dāng)于固體培養(yǎng)基，腌制用的玻璃瓶常用紫外線進(jìn)行滅菌9、科研人員用電融合的方法誘導(dǎo)母羊的乳腺上皮細(xì)胞與另一只羊的去核卵細(xì)胞融合，然后將重構(gòu)胚移植到代孕母羊的體內(nèi)，最終培育出了克隆羊多莉。下表是科學(xué)家獲得的部分實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，下列相關(guān)敘述，不合理的是（）。實(shí)驗(yàn)組別序號(hào)①②核供體細(xì)胞6歲母羊的乳腺上皮細(xì)胞發(fā)育到第9天的早期胚胎細(xì)胞融合成功細(xì)胞數(shù)277385早期發(fā)育成功胚胎數(shù)2990移植后成功懷孕母羊數(shù)/代孕母羊數(shù)1/1314/27出生并成活羔羊數(shù)1（多莉）4A.兩組羔羊性狀主要與核供體母羊相同B.②組比①組成功率高，可能因?yàn)榕咛ゼ?xì)胞分化程度低C.本實(shí)驗(yàn)涉及到細(xì)胞培養(yǎng)、核移植和胚胎分割技術(shù)D.克隆技術(shù)應(yīng)用于人類，可能存在一定的倫理風(fēng)險(xiǎn)評(píng)卷人得分二、多選題(共7題，共14分)10、如圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細(xì)菌的示意圖；有關(guān)敘述正確的是（）

A.在配制步驟②、③的培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)先調(diào)pH后高壓蒸汽滅菌B.步驟③采用涂布平板法接種，并需向牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入尿素C.步驟④挑?、壑胁煌N的菌落分別接種，比較細(xì)菌分解尿素的能力D.步驟③純化分解尿素細(xì)菌的原理是將聚集的細(xì)菌分散，可以獲得單細(xì)胞菌落11、下列相關(guān)實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是（）A.發(fā)酵過(guò)程中，要嚴(yán)格控制溫度、pH等發(fā)酵條件，否則會(huì)影響菌種代謝產(chǎn)物的形成B.DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中，用菜花替代雞血作為實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)操作會(huì)有不同C.PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液、蒸餾水等在使用前不用滅菌D.用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物時(shí)，DNA分子的遷移速率與凝膠濃度、分子大小無(wú)關(guān)12、B基因存在于水稻基因組中；其僅在體細(xì)胞（2n）和精子中正常表達(dá)，但在卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄。為研究B基因表達(dá)對(duì)卵細(xì)胞的影響，設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)，培育轉(zhuǎn)基因植株。以下鑒定篩選轉(zhuǎn)基因植株的方式正確的是（）

A.將隨機(jī)斷裂的B基因片段制備成探針進(jìn)行DNA分子雜交B.以Luc基因?yàn)槟０逶O(shè)計(jì)探針進(jìn)行DNA分子雜交C.以B基因編碼蛋白的序列為模板設(shè)計(jì)探針與從卵細(xì)胞提取的mRNA雜交D.檢測(cè)加入熒光素的卵細(xì)胞中是否發(fā)出熒光13、下表有關(guān)基因表達(dá)的選項(xiàng)中；能夠表達(dá)的有（）

?；虮磉_(dá)的細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物A細(xì)菌抗蟲(chóng)蛋白基因抗蟲(chóng)棉葉肉細(xì)胞細(xì)菌抗蟲(chóng)蛋白B人酪氨酸酶基因正常人皮膚細(xì)胞人酪氨酸酶C動(dòng)物胰島素基因大腸桿菌工程菌細(xì)胞動(dòng)物胰島素D兔血紅蛋白基因兔成熟紅細(xì)胞兔血紅蛋白A.AB.BC.CD.D14、我國(guó)首例綠色熒光蛋白“轉(zhuǎn)基因”克隆豬的培育過(guò)程如圖所示，其中字母代表結(jié)構(gòu)或生物，數(shù)字代表過(guò)程，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.為了①和②的順利完成，需要用滅活的病毒對(duì)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)B.將C的細(xì)胞核去掉，實(shí)質(zhì)上是去除紡錘體—染色體復(fù)合物C.為避免將E植入F時(shí)產(chǎn)生排斥反應(yīng)，移植前應(yīng)給F注射免疫抑制劑D.移入F的桑葚胚要經(jīng)歷囊胚、原腸胚等階段才能形成豬的幼體15、轉(zhuǎn)基因作物的推廣種植，大幅度提高了糧食產(chǎn)量，取得了巨大的經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益碩果累累的轉(zhuǎn)基因成果在帶給人們喜悅的同時(shí)，也促使人們關(guān)注轉(zhuǎn)基因生物的安全性問(wèn)題。下列有關(guān)轉(zhuǎn)基因作物的安全性的敘述，正確的是（）A.轉(zhuǎn)入抗性基因的植物可能成為“入侵物種”，影響生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性B.抗性基因可能會(huì)隨花粉傳播到田間近緣野生植物體內(nèi)，造成基因污染C.若目的基因來(lái)自自然界，則培育出的轉(zhuǎn)基因植物不會(huì)有安全性問(wèn)題D.大面積種植抗蟲(chóng)棉，有可能會(huì)導(dǎo)致棉鈴蟲(chóng)群體中相關(guān)抗性基因頻率增大16、某牧場(chǎng)引進(jìn)一只產(chǎn)肉性能優(yōu)異的良種公羊；為了在短時(shí)間內(nèi)獲得具有該公羊優(yōu)良性狀的大量后代，該牧場(chǎng)通過(guò)以下流程進(jìn)行了相關(guān)操作。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.在體外受精前對(duì)采集到的精子要進(jìn)行獲能處理B.用孕激素對(duì)供體母羊進(jìn)行處理，可獲得更多的卵母細(xì)胞C.為避免受體母羊?qū)χ踩肱咛ギa(chǎn)生排斥反應(yīng)，應(yīng)注射免疫抑制劑D.為了提高已有胚胎的利用率，可采用胚胎分割技術(shù)評(píng)卷人得分三、填空題(共8題，共16分)17、一般包括______、______等技術(shù)18、微生物________________的方法很多，最常用的是_____________和__________________。19、通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的________________，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在_________________________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。20、轉(zhuǎn)化的概念：是______進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持______的過(guò)程。21、目的基因是指：______22、沙門氏菌是一種常見(jiàn)的食源性致病菌；被感染了沙門氏菌的人或帶菌者的糞便污染的食品，會(huì)使人發(fā)生食物中毒。沙門氏菌的最適繁殖溫度為37°C，在20℃以上即能大出繁殖，其對(duì)熱抵抗力不強(qiáng)，在60℃的條件下15min就能被殺死。肉桂精油是從肉桂樹(shù)中提煉獲得的，具有不溶于水；易溶于有機(jī)溶劑且易揮發(fā)的特性，能抑制沙門氏菌的繁殖。回答下列問(wèn)題：

（1）培養(yǎng)沙門氏菌時(shí)要進(jìn)行無(wú)菌操作，常用的滅菌方法有________（答出兩種）。用平板培養(yǎng)沙門氏菌時(shí)一般需要將平板________（填“倒置”或“正置”）。單個(gè)細(xì)菌在平板上會(huì)形成菌落，研究人員通?？筛鶕?jù)菌落的形狀、大小和顏色等特征來(lái)初步區(qū)分不同種的微生物，原因是________。

（2）從雞糞便取樣，經(jīng)選擇培養(yǎng)后需要經(jīng)過(guò)一系列________才能將樣品涂布到鑒別培養(yǎng)基上。對(duì)獲得的沙門氏菌常采用________的方法長(zhǎng)期保存。

（3）根據(jù)題干信息，為避免食用被沙門氏菌污染的食品而引發(fā)的食物中毒，家庭中儲(chǔ)存、加工食品的方法是________。

（4）根據(jù)肉桂精油的化學(xué)特性，可采用________法來(lái)提取，提取過(guò)程中影響精油品質(zhì)的因素有________。23、我國(guó)政府同樣禁止進(jìn)行治療性克隆實(shí)驗(yàn)。（選擇性必修3P108）()24、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：_____、_____、_____、_____等。評(píng)卷人得分四、判斷題(共2題，共18分)25、通過(guò)體細(xì)胞核移植技術(shù)已經(jīng)獲得了多種克隆動(dòng)物，該技術(shù)的成功率已經(jīng)很高。（選擇性必修3P54）()A.正確B.錯(cuò)誤26、胚胎發(fā)育早期，細(xì)胞的數(shù)量不斷增加，胚胎的總體積也增加。()A.正確B.錯(cuò)誤評(píng)卷人得分五、實(shí)驗(yàn)題(共3題，共12分)27、單克隆抗體特異性強(qiáng)；靈敏度高，用于診療疾病具有準(zhǔn)確；高效等特點(diǎn)。下圖表示單克隆抗體制備過(guò)程。

回答下列問(wèn)題：

（1）若細(xì)胞B是小鼠的骨髓瘤細(xì)胞；則A是_________________細(xì)胞，誘導(dǎo)d過(guò)程常用的因素是_________________（答出一個(gè)即可）。

（2）用于篩選細(xì)胞D的培養(yǎng)基必需滿足兩個(gè)條件：一是_________________細(xì)胞都會(huì)死亡；二是保證_________________細(xì)胞能生長(zhǎng)。

（3）使用合成培養(yǎng)基體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞時(shí)；通常需要加入_________________等一些天然成分，并置于含有_________混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（4）制備抗新冠病毒單克隆抗體檢測(cè)試劑，可用_________________（選填數(shù)字標(biāo)號(hào)：①新冠病毒滅活疫苗、②新冠病毒RNA疫苗、③新冠病毒滅活疫苗或RNA疫苗）免疫小鼠，以獲得圖中的A細(xì)胞。28、釀酒；釀醋、腐乳、泡菜、醬制品等是源于中國(guó)的傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)；為部分地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展做出巨大貢獻(xiàn)。請(qǐng)依據(jù)相關(guān)生物學(xué)知識(shí)回到下列問(wèn)題。

（1）泡菜腌制過(guò)程中，進(jìn)行發(fā)酵的主要微生物在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上屬于___________生物。不能采用加入抗生素的方法來(lái)抑制雜菌的原因是____________________________。

（2）腐乳外部有一層致密的“皮”，是前期發(fā)酵時(shí)______等生物在豆腐表面上生長(zhǎng)的菌絲。

（3）測(cè)定亞硝酸鹽含量的方法是___________，在泡菜腌制過(guò)程中定期測(cè)定亞硝酸鹽含量的目的是____________________________。

（4）為了保證既無(wú)雜菌，又能使發(fā)酵菌發(fā)揮正常作用，泡菜所用鹽水應(yīng)__________再使用。

（5）某些制作泡菜的某些蔬菜也可用作DNA粗提取與鑒定，沸水浴條件下，提取出的DNA可與_________試劑反應(yīng)呈_______________色。29、科學(xué)家的發(fā)現(xiàn)給人類的生活帶來(lái)了無(wú)限的想象；他們采集了某深海海域的沉積物樣品，分離；鑒定得到其中的深海放線菌，以期獲得具有前景的抗生素替代品。據(jù)此回答下列問(wèn)題：

(1)研究人員欲篩選出深海放線菌進(jìn)行研究，取1g沉積物樣品接種在液體培養(yǎng)基中搖瓶培養(yǎng)，稀釋后取菌液通過(guò)_______________法接種到高氏一號(hào)（加數(shù)滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的酚）培養(yǎng)基表面以獲得單菌落。

(2)通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增分離得到的放線菌的16SrRNA基因可進(jìn)行菌株的種屬鑒定。PCR技術(shù)中起關(guān)鍵作用的酶是_____________。該技術(shù)能在放線菌總的DNA中專一性擴(kuò)增出16SrRNA基因的原因是______________。PCR產(chǎn)物一般可通過(guò)_________________鑒定。

(3)科學(xué)家還將Oct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4基因通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)入小鼠成纖維細(xì)胞中。2~3周后，這些細(xì)胞顯示出ES細(xì)胞的形態(tài)、具有活躍的分裂能力，它們就是iPS細(xì)胞。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，逆轉(zhuǎn)錄病毒的作用是_______________如何證明iPS細(xì)胞的產(chǎn)生不是由于培養(yǎng)基的作用？請(qǐng)寫出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路______________評(píng)卷人得分六、綜合題(共4題，共24分)30、新冠病毒（COVID-19）是一種單股正鏈RNA病毒；為了更大限度地提升疫苗研發(fā)的成功率，我國(guó)的科研攻關(guān)組布局了新冠病毒的滅活疫苗；核酸疫苗、基因工程疫苗這3大類疫苗的技術(shù)路線。請(qǐng)回答下面關(guān)于疫苗生產(chǎn)的相關(guān)問(wèn)題：

（1）2020年12月31日，新冠滅活疫苗已獲得國(guó)家藥監(jiān)局批準(zhǔn)附條件上市。滅活疫苗是在體外培養(yǎng)新冠病毒，然后將其滅活，將其制成疫苗。在制備滅活疫苗時(shí)，要先取相關(guān)細(xì)胞進(jìn)行________________（技術(shù)），再接種病毒。該過(guò)程中，要給細(xì)胞合適的培養(yǎng)條件，包括________________、適宜的營(yíng)養(yǎng)、溫度和pH以及適宜的________________。

（2）基因工程疫苗被稱為第二代疫苗；是指將病毒基因片段導(dǎo)入合適的表達(dá)載體，在體外表達(dá)病毒抗原后經(jīng)純化制備而成的疫苗，或用能夠表達(dá)病毒抗原的活的重組載體本身制成的疫苗。常見(jiàn)的基因工程疫苗包括重組亞單位疫苗；病毒樣顆粒疫苗、活病毒載體疫苗等。

①重組亞單位疫苗相當(dāng)于生產(chǎn)不完整的病毒，而是單獨(dú)生產(chǎn)最可能作為抗原的蛋白質(zhì)制成疫苗。病毒的結(jié)構(gòu)和病毒侵染人體細(xì)胞的過(guò)程如下圖所示。選擇蛋白________為重組亞單位疫苗的生產(chǎn)蛋白最合適。若要在體外獲得該病毒的DNA，需要向試管中加入________________________作為模板、________________________作為原料、________作為催化劑等進(jìn)行合成。常選擇大腸桿菌作為相關(guān)基因的受體細(xì)胞，其優(yōu)點(diǎn)是_______________________________________________。

②活病毒載體疫苗是指將相關(guān)蛋白質(zhì)基因?qū)肽承┗畈《颈旧?，常用的病毒載體包括腺病毒、流感病毒等。腺病毒是一種常見(jiàn)的DNA病毒，其優(yōu)點(diǎn)包括宿主范圍廣泛、________________、病毒基因組相對(duì)容易操作、允許插入的外源基因容量大、病毒增殖速度快、顆粒比較穩(wěn)定、凍干后無(wú)須冷藏等，目前已經(jīng)成為最常用的病毒載體之一。在制造活病毒載體時(shí)，需要用到的工具酶是________________、________________等。

（3）核酸疫苗包括mRNA疫苗和DNA疫苗；是將編碼相關(guān)蛋白質(zhì)的基因；mRNA或者DNA注入人體，利用自身細(xì)胞合成外源蛋白，刺激人體產(chǎn)生抗體。目前，莫德納公司和輝瑞/拜恩泰科的mRNA疫苗，已在美國(guó)和歐洲等地獲得緊急授權(quán)批準(zhǔn)。

①已知RNA病毒的核酸有正鏈RNA（+RNA）和負(fù)鏈RNA（-RNA）等類型；其區(qū)別如下圖：

則mRNA疫苗中應(yīng)將COVID-19中的RNA________（選填“本身”或“其互補(bǔ)鏈”）作為疫苗；注入人體。

②若將制好的RNA直接注入人體，會(huì)被人體內(nèi)的________催化水解為核苷酸，因此可以將其裝入脂質(zhì)體中，送入細(xì)胞。這些RNA進(jìn)入細(xì)胞后，能不能遺傳下去？________（選填“能”或“不能”）。31、下圖是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線。圖中tet表示四環(huán)素抗性基因；amp表示氨芐青霉素抗性基因，BamHI；HindⅢ、SmaΙ直線所示為三種限制酶的切割位點(diǎn)：

（1）科學(xué)家用PCR的方法對(duì)人乳鐵蛋白基因進(jìn)行體外擴(kuò)增，加熱至94℃的目的是使DNA樣品的_______鍵斷裂；如果人乳鐵蛋白基因的部分序列是：

5’ATGGCTAGGAAC3’

3’TACCGATCCTTG5’

根據(jù)上述序列應(yīng)選擇引物B和_______（填字母）進(jìn)行PCR。

【選項(xiàng)A】引物：5’-TACCGA-3’【選項(xiàng)B】引物：5’-GTTCCT-3’

【選項(xiàng)C】引物：5’-AUGGCU-3’【選項(xiàng)D】引物：5’-ATGGCT-3’

（2）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用_______、______限制酶同時(shí)切割載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含_________的培養(yǎng)基上進(jìn)行。

（3）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是______

【選項(xiàng)A】啟動(dòng)子【選項(xiàng)B】tetR【選項(xiàng)C】復(fù)制原點(diǎn)【選項(xiàng)D】ampR

（4）過(guò)程①可采用的操作方法是________技術(shù)。

【選項(xiàng)A】農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化【選項(xiàng)B】大腸桿菌轉(zhuǎn)化【選項(xiàng)C】顯微注射【選項(xiàng)D】細(xì)胞融合。

（5）為檢測(cè)人乳鐵蛋白是否成功表達(dá)，通?？刹捎胈_______技術(shù)。32、馬鈴薯是重要的經(jīng)濟(jì)作物；植物細(xì)胞工程在馬鈴薯的脫毒及育種等方面有重要應(yīng)用。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)培育脫毒馬鈴薯時(shí)，外植體宜選用___________(“莖尖”葉片”)，不選另一個(gè)的理由是___________。

(2)植物組織培養(yǎng)常用到愈傷組織培養(yǎng)基、生芽培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基。在愈傷組織培養(yǎng)基上，外植體經(jīng)脫分化形成愈傷組織，愈傷組織是一團(tuán)___________。在再分化階段，生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素參與了細(xì)胞分化方向的調(diào)節(jié)，與生根培養(yǎng)基相比，一般情況下生芽培養(yǎng)基中___________。

(3)馬鈴薯栽培種的抗病性和抗逆性較差，野生馬鈴薯種的抗病性和抗逆性較好，但二者存在雜交不親合性。利用野生馬鈴薯種，通過(guò)細(xì)胞工程改進(jìn)馬鈴薯栽培種種質(zhì)的思路是___________。

(4)避免微生物污染、優(yōu)化培養(yǎng)條件可提高植物組織培養(yǎng)的成功率。在植物組織培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)從___________等方面制定措施，減少污染(至少答出2點(diǎn))；在培養(yǎng)室中培養(yǎng)時(shí)，注意優(yōu)化培養(yǎng)環(huán)境，控制___________等培養(yǎng)條件(至少答出3點(diǎn))。33、（一）現(xiàn)科研人員研究利用玉米秸稈作為廉價(jià)的糖源轉(zhuǎn)化生產(chǎn)燃料酒精；不僅可以緩解能源危機(jī)；減少環(huán)境污染，而且是實(shí)現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的基本保障，具體的工藝流程如下圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）由于木質(zhì)纖維素組成成分復(fù)雜、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，生物降解時(shí)難以迅速進(jìn)行，常用酸或堿預(yù)處理，目的是打斷纖維素內(nèi)部的化學(xué)鍵，降低聚合度，易被_______水解。

（2）將預(yù)處理后的玉米秸稈進(jìn)行_______滅菌，冷卻后接種一定濃度的里斯木霉菌懸液，24h就能產(chǎn)生大量的葡萄糖，葡萄糖與蒽酮試劑能產(chǎn)生顏色，為了檢測(cè)秸稈水解效果，可采用光電比色法測(cè)定糖液中的葡萄糖含量，之前制作_______的標(biāo)準(zhǔn)曲線（填寫坐標(biāo)），使用的比色杯若光面玻璃不干凈，將導(dǎo)致測(cè)量的數(shù)據(jù)_______（填偏小、偏大或無(wú)影響）。推測(cè)加入里氏木霉菌懸液的用途是_______。

（3）發(fā)酵過(guò)程接種休哈塔酵母，該微生物在_______的發(fā)酵液中可以生長(zhǎng)繁殖；而絕大多數(shù)其他微生物都因無(wú)法適應(yīng)該環(huán)境而抑制。

（4）釀酒的殘?jiān)逊e會(huì)積累醋桿菌，可從中篩選優(yōu)良菌株?？刹捎胈______方法將混合菌液接種到加有碳酸鈣粉末的固體培養(yǎng)基中，加入碳酸鈣可以篩選菌株的實(shí)驗(yàn)原理是_______。

（二）轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以使重組生物增加人們所期望的新性狀；培育出新品種，下圖是基因工程操作流程圖，請(qǐng)根據(jù)圖示回答下列問(wèn)題：

（5）獲取序列未知的目的基因，常用的方法是從______中提取，①過(guò)程中常用的酶有______。

（6）若要通過(guò)工程菌獲得人類胰島素，②過(guò)程中常用氯化鈣處理大腸桿菌，其目的是______。為了檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)出胰島素，需要采用的方法有______

（7）在培育轉(zhuǎn)基因抗凍蕃茄時(shí)，將離體蕃茄葉組織經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再通過(guò)______培養(yǎng)得到單細(xì)胞，將外源基因?qū)肫渲胁⑴嘤纬煽箖鲛阎仓辏^(guò)程④中用到的植物細(xì)胞工程技術(shù)是______

（8）若要培育能生產(chǎn)彩色羊毛的轉(zhuǎn)基因羊，則需將轉(zhuǎn)基因的受體細(xì)胞培養(yǎng)到早期胚胎后，再通過(guò)______過(guò)程形成轉(zhuǎn)基因羊。參考答案一、選擇題(共9題，共18分)1、D【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲?。焕肞CR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

A；戊型肝炎病毒是一種RNA病毒；過(guò)程①是以病毒RNA為模板合成DNA，獲取目的基因的過(guò)程，需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶，原料是四種脫氧核苷酸，A錯(cuò)誤；

B；啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段；其作用是供RNA聚合酶的識(shí)別結(jié)合以驅(qū)動(dòng)目的基因的轉(zhuǎn)錄，啟動(dòng)子具有物種或組織特異性，構(gòu)建在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)pORF2蛋白的載體時(shí)，需要選擇大腸桿菌細(xì)胞的啟動(dòng)子，而不能選擇其他物種和組織細(xì)胞的啟動(dòng)子，B錯(cuò)誤；

C、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法，需要用Ca2+處理大腸桿菌；增大大腸桿菌細(xì)胞壁的透過(guò)性，使其處于感受態(tài)，C錯(cuò)誤；

D；過(guò)程⑥大量制備pORF2蛋白前應(yīng)對(duì)受體大腸桿菌進(jìn)行目的基因的檢測(cè)與鑒定；篩選出能表達(dá)pORF2蛋白的大腸桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，大量制備pORF2蛋白，D正確。

【點(diǎn)睛】2、C【分析】【分析】

分析圖示可知，甲圖中a表示從細(xì)菌細(xì)胞中獲取的含目的基因的DNA分子，b表示用限制酶切割DNA分子；乙圖表示通過(guò)反轉(zhuǎn)錄法合成目的基因；c表示從細(xì)菌細(xì)胞中獲取的RNA，d表示反轉(zhuǎn)錄過(guò)程。

【詳解】

A；甲圖獲取的是該細(xì)菌的全部DNA分子；因此用限制酶切割后可用于構(gòu)建基因組文庫(kù)，A正確；

B；乙圖表示通過(guò)反轉(zhuǎn)錄法得到DNA分子；只包含該生物的部分基因，因此可用于構(gòu)建cDNA文庫(kù)，B正確；

C；甲圖中是利用限制酶切割得到的目的基因；所以不需要脫氧核苷酸原料，C錯(cuò)誤；

D；乙圖為反轉(zhuǎn)錄過(guò)程；需要逆轉(zhuǎn)錄酶參與，D正確。

故選C。

【點(diǎn)睛】

本題考查獲取目的基因的方法，其中比較基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)，掌握反轉(zhuǎn)錄過(guò)程是解題的關(guān)鍵。3、B【分析】【分析】

參與腐乳制作的微生物主要是毛霉；其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型。腐乳制作的原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解成甘油和脂肪酸。

【詳解】

A；豆腐含水量過(guò)高不利于毛霉生長(zhǎng)；A錯(cuò)誤；

B；腐乳坯堆積會(huì)導(dǎo)致發(fā)酵溫度升高；從而影響毛霉生長(zhǎng)，B正確；

C；加鹽腌制可以析出豆腐中的水分；使豆腐塊變硬，并可抑制雜菌的生長(zhǎng)，使豆腐塊變硬且能抑制雜菌生長(zhǎng)是鹽的作用，而不是鹵湯的作用，C錯(cuò)誤；

D；加鹽腌制可以抑制雜菌生長(zhǎng)；但不能賦予獨(dú)特風(fēng)味，D錯(cuò)誤。

故選B。

【點(diǎn)睛】4、C【分析】【分析】

植物體細(xì)胞雜交利用的原理是細(xì)胞膜的流動(dòng)性；細(xì)胞的全能性，其操作流程為：首先獲得植物的體細(xì)胞，而后去除細(xì)胞壁以獲得原生質(zhì)體，然后利用離心；電刺激、聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，當(dāng)該原生質(zhì)體再生出新的細(xì)胞壁意味著雜種細(xì)胞誘導(dǎo)成功，而后對(duì)雜種細(xì)胞進(jìn)行植物組織培養(yǎng)技術(shù)，獲得雜種植株，該過(guò)程的意義是克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。

【詳解】

據(jù)圖可知，A物種基因型為Dd，屬于二倍體，B物種的基因型為YyRr，也屬于二倍體。植物細(xì)胞融合后形成的雜種細(xì)胞含有兩個(gè)親本的遺傳物質(zhì)，基因型為DdYyRr；屬于異源四倍體，即C正確。

故選C。

【點(diǎn)睛】5、A【分析】由于細(xì)菌在分解尿素的過(guò)程中合成脲酶；脲酶將尿素分解成氨，會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，pH升高，所以可以用檢測(cè)pH的變化的方法來(lái)判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，pH升高，指示劑變紅。

【詳解】

A；尿素不能直接被植物吸收；只有被土壤中的細(xì)菌分解成氨后，才能被植物利用，A正確；

B；通常用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基篩選分解尿素的細(xì)菌；B錯(cuò)誤；

C；根據(jù)分析可知；在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，可以初步鑒定尿素分解菌，C錯(cuò)誤；

D；由題意可知；尿素分解菌分解尿素可引起碳酸鈣沉淀，而不能分解碳酸鈣質(zhì)碎石，D錯(cuò)誤。

故選A。6、B【分析】【分析】

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的原理：農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞；并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細(xì)胞中染色體的DNA上。

【詳解】

A；將目的基因與載體相連形成重組質(zhì)粒后；要導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌內(nèi)，再讓農(nóng)桿菌去侵染植物細(xì)胞，A正確；

B；T-DNA是位于Ti質(zhì)粒中的一段序列；不位于擬核，B錯(cuò)誤；

C；農(nóng)桿菌能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物；對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒(méi)有侵染能力，C正確；

D；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的轉(zhuǎn)化效率不是100%；因此適宜條件下，新鮮葉圓片與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)后，一部分細(xì)胞會(huì)被轉(zhuǎn)化，D正確。

故選B。7、B【分析】【分析】

培養(yǎng)基：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求；配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，是進(jìn)行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。

培養(yǎng)基種類：培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基；半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。

微生物的接種方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法。

①平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作；將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。

②稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋；然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。

【詳解】

A；野生型大腸桿菌不能夠合成所需的全部氨基酸；并且還有別的有機(jī)物需要氮元素，因此培養(yǎng)基中需要提供氮源，A錯(cuò)誤；

B；紫外線照射菌液；使大腸桿菌產(chǎn)生基因突變，便于篩選賴氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷突變株，由于基因突變頻率較低，且不定向，因此發(fā)生賴氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變的菌種不多，因此需要在①中添加賴氨酸來(lái)增大該突變株濃度，以便進(jìn)行稀釋涂布操作，②④中添加賴氨酸目的是使賴氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷突變株能夠在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，③不添加賴氨酸，賴氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷突變株不能在其上繁殖形成菌落，通過(guò)③④對(duì)比，選擇能在④中生長(zhǎng)但是不能在③中生長(zhǎng)的菌落即為賴氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷突變株，故①②④培養(yǎng)基中需添加賴氨酸，而③培養(yǎng)基中不能添加賴氨酸，B正確；

C；需將①中的菌液適當(dāng)稀釋后；用微量移液器吸取少量菌液，用涂布器在②上進(jìn)行涂布接種，C錯(cuò)誤；

D；乙菌落在③培養(yǎng)基內(nèi)對(duì)應(yīng)位置也有菌落；屬于野生型，不是所需突變株，D錯(cuò)誤。

故選B。8、B【分析】【分析】

腐乳的制作原理：參與豆腐發(fā)酵的微生物有青霉；酵母、曲霉、毛霉等多種；其中起主要作用的是毛霉，其代謝類型為異養(yǎng)需氧型；毛霉能夠產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶，將蛋白質(zhì)和脂肪分別水解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸。

【詳解】

A；參與豆腐發(fā)酵的微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等多種；其中起主要作用的是毛霉，A錯(cuò)誤；

B；毛霉能夠產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶；將蛋白質(zhì)和脂肪分別水解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸，B正確；

C；加鹽腌制和加鹵湯的目的是抑制瓶?jī)?nèi)雜菌生長(zhǎng)的同時(shí)又能調(diào)制腐乳的風(fēng)味；C錯(cuò)誤；

D；豆腐塊相當(dāng)于固體培養(yǎng)基；能為微生物發(fā)酵提供營(yíng)養(yǎng)條件等，在密封腌制時(shí)，最好將瓶口通過(guò)酒精燈的火焰，用灼燒法進(jìn)行滅菌，以防止瓶口被污染，D錯(cuò)誤。

故選B。9、C【分析】【分析】

胚胎移植的基本程序主要包括:

①對(duì)供；受體的選擇和處理（選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體；有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體。用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對(duì)供體母牛做超數(shù)排卵處理)；

②配種或人工授精；

③對(duì)胚胎的收集；檢查、培養(yǎng)或保存（對(duì)胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查；此時(shí)的胚胎應(yīng)發(fā)育到桑椹或胚囊胚階段)；

④對(duì)胚胎進(jìn)行移植；

⑤移植后的檢查。

【詳解】

A；由于遺傳物質(zhì)主要在細(xì)胞核內(nèi)；所以兩組羔羊性狀主要與核供體母羊相同，A正確；

B；動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低、易恢復(fù)全能性；故②組比①組成功率高，B正確；

C；本實(shí)驗(yàn)涉及到細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)；不涉及胚胎分割技術(shù)，C錯(cuò)誤；

D；我國(guó)禁止對(duì)人類的克隆原因是克隆人一旦成功；將嚴(yán)重威脅著人類社會(huì)的穩(wěn)定，打破原有的人際關(guān)系，可能引發(fā)一系列社會(huì)倫理、道德和法律問(wèn)題，D正確。

故選C。二、多選題(共7題，共14分)10、A:C:D【分析】【分析】

微生物常見(jiàn)的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板；接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

【詳解】

A；在配制步驟②、③的培養(yǎng)基時(shí)；為避免雜菌污染，應(yīng)先調(diào)pH值后再進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，A正確；

B；要篩選出能高效分解尿素細(xì)菌；所選用的培養(yǎng)基要以尿素為唯一氮源，但牛肉膏和蛋白胨中都含有氮源，因此步驟③所用的培養(yǎng)基中不能含有牛肉膏蛋白胨，B錯(cuò)誤；

C；步驟④挑取③中不同種的菌落分別接種；形成相互對(duì)照試驗(yàn)，比較細(xì)菌分解尿素的能力，C正確；

D；步驟③純化分解尿素的原理是將聚集的細(xì)菌分散；可以獲得單細(xì)胞菌落，D正確。

故選ACD。11、A:B【分析】【分析】

1；DNA粗提取和鑒定過(guò)程中破碎動(dòng)植物細(xì)胞；獲取含DNA的濾液區(qū)別：動(dòng)物細(xì)胞的破碎比較容易，以雞血細(xì)胞為例，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過(guò)濾后收集濾液即可。如果實(shí)驗(yàn)材料是植物細(xì)胞，需要先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜。例如，提取洋蔥的DNA時(shí)，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過(guò)濾后收集研磨液。

2；影響DNA在瓊脂糖凝膠中遷移速率的因素很多；包括DNA分子大小和構(gòu)型、瓊脂糖濃度、所加電壓、電泳緩沖液的離子強(qiáng)度等。

【詳解】

A；微生物發(fā)酵過(guò)程中要嚴(yán)格控制溫度、pH、溶氧、通氣量與轉(zhuǎn)速等發(fā)酵條件；因?yàn)榄h(huán)境條件的變化不僅會(huì)影響菌種的生長(zhǎng)繁殖，而且會(huì)影響代謝產(chǎn)物的形成，A正確；

B；用菜花替代雞血作為實(shí)驗(yàn)材料；其實(shí)驗(yàn)操作步驟不完全相同，如植物細(xì)胞有細(xì)胞壁，破碎細(xì)胞時(shí)需要研磨并加入食鹽和洗滌劑，B正確；

C；為避免外源DNA等因素的污染；PCR反應(yīng)中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌，C錯(cuò)誤；

D；用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物時(shí)；DNA分子的遷移速率與瓊脂糖的濃度、DNA分子大小及構(gòu)型等因素有關(guān)，D錯(cuò)誤。

故選AB。

【點(diǎn)睛】

本題考查發(fā)酵技術(shù)、DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)等相關(guān)知識(shí)，對(duì)于此類試題，需要考生注意的細(xì)節(jié)較多，如實(shí)驗(yàn)的原理、實(shí)驗(yàn)需要采用的試劑及試劑的作用、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象等，需要考生在平時(shí)的學(xué)習(xí)過(guò)程中注意積累。12、B:C:D【分析】【分析】

分析題圖：圖中①表示將目的基因?qū)朕r(nóng)桿菌；②表示采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞，之后再采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因植株。

【詳解】

A；探針是指用放射性同位素（或熒光分子）標(biāo)記的含有目的基因DNA片段；因此要以B基因編碼蛋白的序列為模板設(shè)計(jì)探針，而不是將隨機(jī)斷裂的B基因片段制備成探針，A錯(cuò)誤；

B；可用DNA分子雜交技術(shù)；即以Luc基因?yàn)槟０逶O(shè)計(jì)探針進(jìn)行DNA分子雜交，B正確；

C；用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交；即以B基因編碼蛋白的序列為模板設(shè)計(jì)探針與從卵細(xì)胞提取的mRNA雜交，C正確；

D；檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)；由圖可知B基因與Luc基因連接形成B-Luc融合基因，因此可通過(guò)Luc基因表達(dá)，檢測(cè)加入熒光素的卵細(xì)胞中是否發(fā)出熒光，D正確。

故選BCD。13、A:B:C【分析】【分析】

基因工程的原理是基因重組；把一種生物的基因轉(zhuǎn)入另一種生物后，目的基因可以在受體細(xì)胞中表達(dá)出相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

【詳解】

A；細(xì)菌抗蟲(chóng)蛋白基因可通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)入棉花體內(nèi)；在棉花的葉肉細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)生細(xì)菌抗蟲(chóng)蛋白，使棉花具有抗蟲(chóng)能力，A正確；

B；正常人皮膚細(xì)胞中含有人酪氨酸酶基因；人酪氨酸酶基因能夠表達(dá)產(chǎn)生人酪氨酸酶，B正確；

C；動(dòng)物胰島素基因可通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)移到大腸桿菌體內(nèi)；在大腸桿菌工程菌細(xì)胞中合成動(dòng)物胰島素，C正確；

D；兔屬于哺乳動(dòng)物；其成熟的紅細(xì)胞中沒(méi)有細(xì)胞核和眾多細(xì)胞器，所以不可能表達(dá)出血紅蛋白，D錯(cuò)誤。

故選ABC。

【點(diǎn)睛】14、A:C【分析】【分析】

分析圖解，可以看出綠色熒光蛋白“轉(zhuǎn)基因”克隆豬涉及了多項(xiàng)生物工程技術(shù)。圖中B表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建；然后將目的基因?qū)胴i胎兒的成纖維細(xì)胞，經(jīng)過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)篩選出轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞，然后該細(xì)胞的細(xì)胞核與豬的卵細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞核移植獲得重組細(xì)胞。重組細(xì)胞經(jīng)過(guò)早期胚胎培養(yǎng)到桑椹胚或囊胚期，最后經(jīng)過(guò)胚胎移植技術(shù)將早期胚胎移植到代孕母豬子宮內(nèi)，最后生成轉(zhuǎn)基因克隆豬。由此可見(jiàn)，該過(guò)程中利用基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)。

【詳解】

A；①是將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞；直接采用顯微注射法，無(wú)需對(duì)受體細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，②過(guò)程通常是將細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞中，然后利用電融合法使D構(gòu)建成功，A錯(cuò)誤；

B；C是處于MⅡ期的卵母細(xì)胞；這個(gè)時(shí)期的“核”實(shí)際上是紡錘體—染色體復(fù)合物，B正確；

C；受體對(duì)移入的外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)；因此無(wú)需給F注射免疫抑制劑，C錯(cuò)誤；

D；移入F的通常是桑葚胚；它要經(jīng)歷囊胚、原腸胚階段的發(fā)育才能成為豬的幼體，D正確。

故選AC。15、A:B:D【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因生物的安全性問(wèn)題包括：食物安全（滯后效應(yīng)；過(guò)敏源、營(yíng)養(yǎng)成分改變）、生物安全（對(duì)生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。

【詳解】

A；轉(zhuǎn)基因生物具有某些特殊性質(zhì)；他們?cè)谀车貐^(qū)的競(jìng)爭(zhēng)能力較強(qiáng)，可能成為“外來(lái)入侵物種”，威脅生態(tài)系統(tǒng)中其他生物的存在，從而影響生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，A正確；

B；轉(zhuǎn)基因作物的基因可以通過(guò)花粉傳播到田間近緣野生植物體內(nèi)；該近緣物種在通過(guò)授粉會(huì)造成基因進(jìn)一步擴(kuò)散和污染，B正確；

C；即使目的基因來(lái)自自然界；培自出的轉(zhuǎn)基因植物仍然可能會(huì)有潛在的安全性向題，C錯(cuò)誤；

D；大面積種植轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉；有可能會(huì)導(dǎo)致棉鈴蟲(chóng)群體中相關(guān)抗性基因頻率增加，D正確。

故選ABD。16、B:C【分析】【分析】

胚胎移植的基本程序主要包括:

①對(duì)供；受體的選擇和處理（選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體；有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體）。用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對(duì)供體母牛做超數(shù)排卵處理。

②配種或人工授精。

③對(duì)胚胎的收集；檢查、培養(yǎng)或保存（對(duì)胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查；此時(shí)的胚胎應(yīng)發(fā)育到桑甚胚或胚囊胚階段。④對(duì)胚胎進(jìn)行移植。

⑤移植后的檢查。

【詳解】

A；采集到的良種公羊的精子；在體外受精前要進(jìn)行獲能處理，A正確；

B；對(duì)本地母羊注射促性腺激素可促使其超數(shù)排卵；進(jìn)而獲得更多卵母細(xì)胞，B錯(cuò)誤；

C；受體母羊?qū)σ迫胱訉m的外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)；不需要注射免疫抑制劑，C錯(cuò)誤；

D；采用胚胎分割技術(shù)可提高已有胚胎的利用率；D正確。

故選BC。三、填空題(共8題，共16分)17、略

【解析】①.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)、②.動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體18、略

【解析】①.接種②.平板劃線法③.稀釋涂布平板法19、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】菌落數(shù)30～30020、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】目的基因穩(wěn)定和表達(dá)21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】是人們所需要轉(zhuǎn)移或改造的基因22、略

【分析】【分析】

微生物實(shí)驗(yàn)中常用的滅菌方法有干熱滅菌；高壓蒸汽滅菌和灼燒滅菌；其中對(duì)于培養(yǎng)基一般用高壓蒸汽滅菌，對(duì)于接種環(huán)一般用灼燒滅菌，對(duì)于培養(yǎng)皿等可以用干熱滅菌。培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中需要倒置培養(yǎng)，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法，即將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)，當(dāng)菌落長(zhǎng)成后將試管放入4℃的冰箱中保藏，以后每3-6個(gè)月都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上；對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種可以采用甘油管藏法，在3mL的甘油瓶中裝入1mL甘油后滅菌，將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后放在-20℃的冷凍箱中保存。植物有效成分的提取方法主要有蒸餾法、壓榨法和萃取法，如玫瑰精油的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，能隨水蒸氣一同蒸餾，常采用蒸餾法提??；對(duì)于如橘皮精油，其主要儲(chǔ)存在橘皮部分，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時(shí)會(huì)發(fā)生部分水解，又會(huì)產(chǎn)生原料焦糊問(wèn)題，所以一般采用壓榨法提取。

【詳解】

（1）微生物培養(yǎng)中常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌法；灼燒滅菌法、干熱滅菌法等。用平板培養(yǎng)沙門氏菌時(shí)一般需要將平板倒置；可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征，因此單個(gè)細(xì)菌在平板上會(huì)形成菌落，通常可根據(jù)菌落的形狀、大小和顏色等特征來(lái)初步區(qū)分不同種的微生物。

（2）從雞糞便取樣；經(jīng)選擇培養(yǎng)后，如果要將樣品涂布到鑒別培養(yǎng)基上，需要經(jīng)過(guò)一系列梯度稀釋。對(duì)獲得的沙門氏菌進(jìn)行長(zhǎng)期保存常采用甘油管藏法。

（3）根據(jù)題干信息；沙門氏菌的最適繁殖溫度為37°C，在20℃以上即能大出繁殖，其對(duì)熱抵抗力不強(qiáng)，在60℃的條件下15min就能被殺死，因此為避免食用被沙門氏菌污染的食品而引發(fā)的食物中毒，家庭中可采取低溫儲(chǔ)存；高溫加工方法進(jìn)行處理。

（4）根據(jù)題意；肉桂精油不溶于水；易溶于有機(jī)溶劑且易揮發(fā)，故可采用水蒸氣蒸餾法進(jìn)行提取，提取過(guò)程中蒸餾的溫度、時(shí)間都會(huì)影響精油品質(zhì)。

【點(diǎn)睛】

本題主要考查現(xiàn)代生物科技的原理和運(yùn)用，意在考查考生的識(shí)記能力和理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力，能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，準(zhǔn)確判斷問(wèn)題的能力?！窘馕觥孔茻郎缇ā⒏邏赫羝麥缇?、干熱滅菌法倒置在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征梯度稀釋甘油管藏低溫儲(chǔ)存、高溫加工水蒸氣蒸餾蒸餾的溫度、時(shí)間23、略

【分析】【詳解】

中國(guó)政府的態(tài)度：禁止生殖性克隆，不反對(duì)治療性克隆，該表述錯(cuò)誤。【解析】錯(cuò)誤24、略

【分析】略【解析】營(yíng)養(yǎng)無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境適宜的溫度、pH和滲透壓氣體環(huán)境四、判斷題(共2題，共18分)25、B【分析】【詳解】

目前；用體細(xì)胞核移植技術(shù)得到克隆動(dòng)物的成功率還很低。

故錯(cuò)誤。26、B【分析】【詳解】

胚胎發(fā)育早期；細(xì)胞數(shù)量不斷增加，但胚胎總體積不變或略有縮小。

故錯(cuò)誤。五、實(shí)驗(yàn)題(共3題，共12分)27、略

【分析】【分析】

1；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

（1）原理：細(xì)胞增殖。

（2）培養(yǎng)基性質(zhì)：液體培養(yǎng)基。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的成分與體內(nèi)細(xì)胞基本相同；如需要有葡萄糖；氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清或血漿，還有適量的抗生素以保證無(wú)菌環(huán)境。

（3）需要使用動(dòng)物血清。

（4）適宜的溫度：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。

（5）無(wú)菌條件下進(jìn)行。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素；以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。

（6）氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2。O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。

2；單克隆抗體的制備：

（1）單克隆抗體制備的原理包括：①免疫原理：B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生特異性抗體。②細(xì)胞融合原理：利用病毒對(duì)宿主細(xì)胞的穿透性使B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合。③動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)：對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)；體外培養(yǎng)。

（2）單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)；之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（3）制備單克隆抗體過(guò)程中的幾種細(xì)胞：①免疫B細(xì)胞（漿細(xì)胞）：能產(chǎn)生單一抗體；但不能無(wú)限增殖。②骨髓瘤細(xì)胞：能無(wú)限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。③雜交瘤細(xì)胞：既能產(chǎn)生單一抗體，又能在體外培養(yǎng)條件下無(wú)限增殖。

（4）動(dòng)物細(xì)胞融合的原理是細(xì)胞膜的流動(dòng)性；細(xì)胞的增殖。動(dòng)物細(xì)胞融合誘導(dǎo)手段有電刺激、聚乙二醇、滅活的病毒等；結(jié)果產(chǎn)生雜交細(xì)胞。

【詳解】

（1）若細(xì)胞B是小鼠的骨髓瘤細(xì)胞；則此過(guò)程可以為單克隆抗體的制備過(guò)程。故A是已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞或能產(chǎn)生特定抗體的B細(xì)胞。動(dòng)物細(xì)胞融合的原理是細(xì)胞膜的流動(dòng)性；細(xì)胞的增殖。動(dòng)物細(xì)胞融合誘導(dǎo)手段（誘導(dǎo)d過(guò)程）有電刺激、聚乙二醇、滅活的病毒等，結(jié)果產(chǎn)生雜交細(xì)胞。

（2）一般來(lái)說(shuō)；誘導(dǎo)A細(xì)胞和B細(xì)胞融合，形成C細(xì)胞后，必須利用選擇培養(yǎng)基來(lái)篩選出目的細(xì)胞。那么滿足的條件必須是：未融合的（親本）細(xì)胞和融合的同種（核的）細(xì)胞都會(huì)死亡，而雜交（瘤）細(xì)胞（或雜種細(xì)胞）能夠在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。

（3）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：一是液體培養(yǎng)基。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的成分與體內(nèi)細(xì)胞基本相同，如需要有葡萄糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清或血漿，還有適量的抗生素以保證無(wú)菌環(huán)境。二是氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2。

（4）選用免疫原性好的細(xì)菌；病毒、立克次體、螺旋體等；經(jīng)人工培養(yǎng)，再用物理或化學(xué)方法將其殺滅制成疫苗，即為滅活疫苗。而新冠病毒為RNA病毒，選用RNA疫苗都可以。故選③新冠病毒滅活疫苗或RNA疫苗。

【點(diǎn)睛】

本題考查動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、單克隆抗體制備的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)與觀點(diǎn)，對(duì)某些現(xiàn)實(shí)生活中的生物學(xué)問(wèn)題進(jìn)行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論?！窘馕觥拷?jīng)過(guò)（抗原、病原體）免疫的（小鼠）B（淋巴）細(xì)胞（或漿細(xì)胞，或已免疫的B細(xì)胞，或能產(chǎn)生特定抗體的B細(xì)胞）聚乙二醇（PEG）、滅活的（仙臺(tái)）病毒、電激（或電融合）未融合的（親本）細(xì)胞和融合的同種（核的）細(xì)胞雜交（瘤）細(xì)胞（或雜種細(xì)胞））血清（或血漿）95%空氣和5%CO2③28、略

【分析】【分析】

1；腐乳的制作過(guò)程主要是：讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制。毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶可以將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以將脂肪水解成甘油和脂肪酸。

2；測(cè)定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下；亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料。將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行目測(cè)對(duì)比，可以大致估算出亞硝酸鹽的含量。

【詳解】

（1）泡菜腌制過(guò)程中；進(jìn)行發(fā)酵的主要微生物是乳酸菌，乳酸菌為原核生物。由于抗生素會(huì)抑制乳酸菌的生長(zhǎng)和繁殖，因此不能采用加入抗生素的方法來(lái)抑制雜菌。

（2）利用毛霉腌制腐乳時(shí)；腐乳的外部有一層致密的皮，它是毛霉等生物在豆腐表面上生長(zhǎng)的菌絲。

（3）測(cè)定亞硝酸鹽含量的方法是比色法；不同發(fā)酵時(shí)期亞硝酸鹽的含量不同，在泡菜腌制過(guò)程中定期測(cè)定亞硝酸鹽含量的目的是把握取食泡菜的最佳時(shí)機(jī)。

（4）為了保證既無(wú)雜菌；又能使發(fā)酵菌發(fā)揮正常作用，泡菜所用鹽水應(yīng)煮沸；冷卻再使用。

（5）沸水浴條件下；提取出的DNA可與二苯胺試劑反應(yīng)呈藍(lán)色。

【點(diǎn)睛】

本題考查傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用和DNA鑒定的原理，意在考查考生對(duì)所學(xué)知識(shí)的識(shí)記能力?！窘馕觥吭丝股貢?huì)抑制乳酸菌的生長(zhǎng)和繁殖毛霉比色法把握取食泡菜的最佳時(shí)機(jī)煮沸、冷卻二苯胺藍(lán)29、略

【分析】【分析】

PCR原理：在解旋酶作用下；打開(kāi)DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4種游離脫氧核苷酸為原料，合成子鏈，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開(kāi)始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實(shí)際上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過(guò)程。DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈。

【詳解】

（1）分析題意可知；研究人員取1g沉積物樣品接種在液體培養(yǎng)基中搖瓶培養(yǎng)，稀釋后可通過(guò)稀釋涂布平板法接種到培養(yǎng)基表面以獲得單菌落。

（2）PCR技術(shù)是一項(xiàng)通過(guò)體外控制溫度擴(kuò)增DNA的技術(shù)，該技術(shù)中由于溫度較高，起關(guān)鍵作用的酶是耐高溫DNA聚合酶；PCR擴(kuò)增的前提是要有一段目的基因的核苷酸片段，分析題意，該技術(shù)能在放線菌總的DNA中專一性擴(kuò)增出16SrRNA基因的原因是：引物是根據(jù)16SrRNA基因的一段已知核苷酸序列設(shè)計(jì)合成的；PCR產(chǎn)物一般可通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定：凝膠中的DNA分子通過(guò)染色；可以在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來(lái)。

（3）分析題意，科學(xué)家將Oct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4基因通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)入小鼠成纖維細(xì)胞中，該過(guò)程中逆轉(zhuǎn)錄病毒是載體，能將外源基因ct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4送入小鼠成纖維細(xì)胞；分析題意，實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖莍PS細(xì)胞的產(chǎn)生不是由于培養(yǎng)基的作用，故實(shí)驗(yàn)的自變量是外源基因的有無(wú)，因變量是IPS細(xì)胞的產(chǎn)生情況，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)遵循對(duì)照與單一變量原則，故可設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)如下：將轉(zhuǎn)入外源基因的細(xì)胞和沒(méi)有轉(zhuǎn)入外源基因的細(xì)胞分別培養(yǎng)在相同的培養(yǎng)基中，在相同且適宜的條件下，如果只有轉(zhuǎn)入外源基因的細(xì)胞轉(zhuǎn)化成了iPS細(xì)胞，則可以證明iPS細(xì)胞的產(chǎn)生不是由于培養(yǎng)基的作用?！窘馕觥?1)稀釋涂布平板法##涂布平板法

(2)耐高溫DNA聚合酶引物能與16SrRNA基因特異性結(jié)合（引物是根據(jù)16SrRNA基因的一段已知核苷酸序列設(shè)計(jì)合成的）瓊脂糖凝膠電泳。

(3)逆轉(zhuǎn)錄病毒是載體，能將外源基因ct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4送入小鼠成纖維細(xì)胞。將轉(zhuǎn)入外源基因的細(xì)胞和沒(méi)有轉(zhuǎn)入外源基因的細(xì)胞分別培養(yǎng)在相同的培養(yǎng)基中，在相同且適宜的條件下，如果只有轉(zhuǎn)入外源基因的細(xì)胞轉(zhuǎn)化成了iPS細(xì)胞，則可以證明iPS細(xì)胞的產(chǎn)生不是由于培養(yǎng)基的作用六、綜合題(共4題，共24分)30、略

【分析】【分析】

1；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織；將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖；

2、動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿足以下條件：無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)、溫度和pH、氣體環(huán)境（95%空氣加5%CO2的混合氣體）；

3；以RNA病毒的遺傳物質(zhì)合成DNA需要病毒的RNA為模板、逆轉(zhuǎn)錄酶、游離的脫氧核糖核苷酸作為原料等條件。

【詳解】

（1）病毒不能獨(dú)立存活，需要寄生于活細(xì)胞中，要培養(yǎng)病毒，需先體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞，動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要無(wú)菌無(wú)毒、適應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH和一定的氣體條件（95%空氣加5%CO2）；

（2）①新冠病毒是一種單股正鏈RNA病毒；利用RNA獲取DNA為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，該過(guò)程需要病毒的RNA作為模板，以游離的脫氧核糖核苷酸為原料，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下合成，大腸桿菌作為相關(guān)基因的受體細(xì)胞，有繁殖快；易培養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn)；

②腺病毒作為常用的病毒載體；有宿主范圍廣泛；對(duì)人致病性低、病毒基因組相對(duì)容易操作、允許插入的外源基因容量大等特點(diǎn)，因此常用于重組病毒制作疫苗，制作活體病毒載體時(shí)，需要用限制酶將目的基因剪切再用DNA連接酶將目的基因和載體連接；

（3）①COVID-19是正鏈RNA病毒；自身的RNA可以作為合成蛋白質(zhì)的模板，因此將本身作為疫苗注入人體即可表達(dá)相關(guān)蛋白質(zhì)；

②若直接將RNA注入人體；會(huì)被人體內(nèi)的RNA酶水解為核苷酸，因此可以將其裝入脂質(zhì)體中再注入人體中，RNA進(jìn)入人體的體細(xì)胞而不是生殖細(xì)胞因此不能在人體內(nèi)遺傳下去。

【點(diǎn)睛】

本題涉及動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、基因工程等相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，需要學(xué)生能夠結(jié)合課本內(nèi)容進(jìn)行遷移運(yùn)用進(jìn)行答題，題目難度一般?！窘馕觥竣?動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)②.無(wú)菌、無(wú)毒③.氣體環(huán)境④.S⑤.病毒的RNA⑥.脫氧核苷酸⑦.逆轉(zhuǎn)錄酶⑧.繁殖快、易培養(yǎng)⑨.對(duì)人致病性低⑩.限制酶?.DNA連接酶?.本身?.RNA酶?.不能31、略

【分析】【分析】

結(jié)合題意分析圖解：圖中質(zhì)粒包括四環(huán)素抗性基因；氨芐青霉素抗性基因、啟動(dòng)子、復(fù)制原點(diǎn)；以及兩個(gè)限制酶切點(diǎn)，并且兩個(gè)限制酶切點(diǎn)的位置均在四環(huán)素抗性基因上；目的基因上有三個(gè)限制酶切點(diǎn)，與質(zhì)粒對(duì)照，共有的是BamHI、HindIII。圖中①表示目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，②表示通過(guò)胚胎移植的方式將早期胚胎移植到代孕母牛體內(nèi)。

（1）

模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)間后；使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備，因此在此過(guò)程中加熱至94℃的目的是使DNA樣品的氫鍵斷裂。DNA聚合酶的合成方向都是子鏈的5′→3′，因此PCR所用引物設(shè)計(jì)應(yīng)該是母鏈3'端互補(bǔ)的一段序列，人乳鐵蛋白基因的部分序列一條鏈?zhǔn)牵?’ATGGCTAGGAAC3’，引物為5’-GTTCCT-3’，另外一條鏈?zhǔn)牵?’TACCGATCCTTG5’，引物是5’-ATGGCT-3’，因此引物選擇B和D。

（2）

由圖中信息可知；載體上有HindⅢ和BamHⅠ酶切位點(diǎn)，目的基因上也有它們的酶切位點(diǎn)，應(yīng)用此2種酶切。當(dāng)人乳鐵蛋白基因和質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒后，tetR基因被人乳鐵蛋白基因隔開(kāi)，不是完整的，而ampR基因是完整的，所以篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行。

（3）

能讓目的基因開(kāi)始表達(dá)的是啟動(dòng)子；啟動(dòng)子是RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列，是基因的一個(gè)組成部分，控制基因表達(dá)（轉(zhuǎn)錄）的起始時(shí)間和表達(dá)的程度，因此能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是啟動(dòng)子，A正確，BCD錯(cuò)誤。故選A。

（4）

過(guò)程①可采用的操作方法是將目的基因?qū)氲絼?dòng)物中常用顯微注射法；C正確，ABD錯(cuò)誤。故選C。

（5）

基因表達(dá)是轉(zhuǎn)錄和翻譯；基因表達(dá)產(chǎn)物一般是蛋白質(zhì)，因此一般檢測(cè)目的基因是否表達(dá)里用抗原-抗體雜交的方法。

【點(diǎn)睛】

本題難度適中，屬于考綱中識(shí)記、理解層次的要求，著重考查了基因工程的限制酶的作用特點(diǎn)、啟動(dòng)子的功能、目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞的方法等相關(guān)知識(shí)，要求考生具有一定的識(shí)圖能力，并能識(shí)記相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)?！窘馕觥浚?）D

（2）BamHΙHindⅢ氨芐青青霉素。

（3）A

（4）C

（5）抗原-抗體雜交32、略

【分析】【分析】

植物細(xì)胞工程包括植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交；其中植物組織培養(yǎng)技術(shù)依據(jù)的原理是植物細(xì)胞的全能性。植物細(xì)胞工程技術(shù)的應(yīng)用：植物繁殖的新途徑（微型繁殖；作物脫毒、人工種子）、作物新品種的培育（單倍體育種、突變體的利用）、細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。

【詳解】

（1）培育脫毒馬鈴薯時(shí)；一般選擇莖尖作為外植體，而葉肉細(xì)胞帶病毒（病毒載量大）；細(xì)胞的全能性低，一般不能作為外植體。

（2）植物組織培養(yǎng)過(guò)程；外植體經(jīng)過(guò)脫分化形成的愈傷組織是一團(tuán)具有分生能力（高度液泡化的）薄壁細(xì)胞。再分化形成芽和根