《實驗用斑馬魚魚房建設與養(yǎng)殖規(guī)范》

ICS65.020.30

CCSB44

團體標準

T/CASXXXX—XXXX

實驗用斑馬魚魚房建設與養(yǎng)殖規(guī)范

Specificationforfishingroomconstructionandbreeding

ofexperimentalzebrafish

(草案)

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

中國標準化協(xié)會發(fā)布

T/CASXXX—XXXX

實驗用斑馬魚魚房建設與養(yǎng)殖規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了實驗用斑馬魚魚房建設、種質(zhì)與養(yǎng)殖等要求。

本文件適用于實驗用斑馬魚魚房建設及斑馬魚的養(yǎng)殖。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用

文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）

適用于本文件。

GB8978污水綜合排放標準

GB16297大氣污染物綜合排放標準

GB/T39649實驗動物實驗魚質(zhì)量控制

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

斑馬魚zebrafish

一種脊椎動物，生物分類學上屬于脊索動物門、硬骨魚綱、鯉形目、鯉科、短擔尼魚屬、斑馬魚

種，可用于教學和科研的模式動物。

3.2

普通環(huán)境generalenvironmental

符合實驗動物居住的基本要求，控制人員、物品和動物出入，不能完全控制傳染因子，適用于

飼育基礎級實驗動物。

4魚房建設

4.1選址要求

應避開自然疫源地；宜環(huán)境安靜，遠離鐵路、碼頭、飛機場、交通要道等有嚴重震動或噪聲污

染的區(qū)域；宜環(huán)境空氣質(zhì)量較好；宜建設在建筑物的底層或地下室。

4.2布局要求

1

T/CASXXX—XXXX

4.2.1前區(qū)的設置

包括辦公室、維修室、庫房、飼料室和走廊。

4.2.2斑馬魚生產(chǎn)區(qū)的設置

宜包括設備間、養(yǎng)殖室、隔離檢疫室或隔離檢疫裝置、餌料準備區(qū)、養(yǎng)殖物品消毒區(qū)和養(yǎng)殖耗

材存放區(qū)。

4.2.3設備間

4.2.3.1用于放置斑馬魚養(yǎng)殖系統(tǒng)的自動化電氣設備，宜與養(yǎng)殖室物理隔離，相對濕度應保持在

75%以下，環(huán)境溫度應保持在25℃以下，避免養(yǎng)殖室恒溫潮濕環(huán)境影響電氣組件運行安全和壽命。

4.2.3.2設備間的地面宜低于養(yǎng)殖室的地面，落差不宜小于50cm。

4.2.3.3應安裝煙感報警器，并配備電氣設備專用滅火器材，滅火器材宜選擇二氧化碳滅火器、手

提七氟丙烷滅火器等。

4.2.4養(yǎng)殖室

4.2.4.1斑馬魚集中飼養(yǎng)及繁殖的區(qū)域，用于養(yǎng)殖魚房自有的（非外部引進的）斑馬魚。按照斑馬

魚的生長發(fā)育特征，該區(qū)域可以分為：成年斑馬魚養(yǎng)殖區(qū)、斑馬魚幼魚養(yǎng)殖區(qū)、斑馬魚魚苗養(yǎng)殖區(qū)

和斑馬魚胚胎放置區(qū)。

4.2.4.2室內(nèi)應配套實驗臺面及大容積水槽，宜配備室內(nèi)應急照明系統(tǒng)，具有獨立的、自動化可控

的光周期，照明系統(tǒng)的開關過程宜是漸亮漸暗的。

4.2.4.3室內(nèi)門、窗應完全遮光，避免外源光照進入室內(nèi)。

4.2.4.4室內(nèi)應具有通風換氣系統(tǒng)、空氣除濕系統(tǒng)和溫控系統(tǒng)，環(huán)境相對濕度應保持在75%以下。

4.2.5隔離檢疫室或隔離檢疫裝置

4.2.5.1用于引進外源斑馬魚的養(yǎng)殖及胚胎繁育。

4.2.5.2在空間上應完全與斑馬魚養(yǎng)殖室隔離，不與養(yǎng)殖室共用養(yǎng)殖設備、養(yǎng)殖水和所有養(yǎng)殖用

品。

4.2.6餌料準備區(qū)

4.2.6.1用于準備斑馬魚餌料，例如孵化豐年蟲卵。

4.2.6.2配套大容積水槽和置物架。

4.2.6.3具有通風換氣系統(tǒng)和溫控系統(tǒng)，環(huán)境溫度應保持在28℃～30℃。通風換氣系統(tǒng)每小時換

氣量不低于5倍室內(nèi)容積。

4.2.6.4具有照明系統(tǒng)，保證24h光照。

4.2.6.5建議配備用于存放斑馬魚餌料的低溫保藏設備。

4.2.7養(yǎng)殖物品消毒區(qū)

4.2.7.1宜分為清洗消毒區(qū)和潔凈區(qū)。

4.2.7.2清洗消毒區(qū)是斑馬魚養(yǎng)殖物品的清洗和理化方法消毒的區(qū)域（例如魚缸、魚撈等），應具

有通風換氣系統(tǒng)，宜配備高溫消毒及烘干的設備和用于化學方法消毒的設備。

4.2.7.2潔凈區(qū)用于臨時存放已清洗消毒的養(yǎng)殖物品，相對濕度應保持75%以下。建議配備紫外殺

菌燈，用于潔凈區(qū)定期的殺菌。

2

T/CASXXX—XXXX

4.2.8養(yǎng)殖耗材存放區(qū)

4.2.8.1用于存放斑馬魚養(yǎng)殖中常用材料的區(qū)域，例如過濾棉、活性炭、電控元器件等。

4.2.8.2應干燥通風。不應存放有毒、易揮發(fā)的化學藥品和易燃易爆物品。

4.3建筑要求

4.3.1建筑物門、窗應有良好的密封性，飼養(yǎng)間門上應設觀察窗。

4.3.2走廊凈寬度一般不應少于1.5m，門的尺寸應滿足設備進出和日常工作的需要。

4.3.3建筑內(nèi)部結(jié)構(gòu)應易于維護、清潔或消毒，采用耐腐蝕材料。

4.3.4實驗臺面、試劑柜應采用耐強酸、強堿與耐腐蝕的材料。

4.3.5房門宜為防潮門，應有良好的密閉性和不透光。

4.3.6宜配備避光、溫度濕度監(jiān)控等設施。

4.3.7應有防止昆蟲、鼠等動物進入的措施。

4.3.8供水布局應滿足檢驗需要，水池、排水應使用防銹、耐壓、耐溫和耐腐蝕的材料，排水系統(tǒng)

的設計和建造應保證排水暢通、便于清潔維護。污水排放應符合GB8978的規(guī)定。

4.3.9如有通風系統(tǒng)，通風系統(tǒng)應具有調(diào)節(jié)流速和流量的功能，通風系統(tǒng)應不漏氣、耐壓、耐溫、

耐腐蝕，大氣污染物排放應符合GB16297的規(guī)定。

4.3.10電力供應應滿足魚房的所有用電要求。照明設施應防爆、明亮，電源插座安全等級不低于

IP65，布局合理，能滿足檢驗需求。

4.3.11建議配備具有人員授權(quán)、數(shù)據(jù)存儲功能的門禁系統(tǒng)。

4.4設備要求

4.4.1集中式斑馬魚循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)

由多個結(jié)構(gòu)和功能不同的模塊構(gòu)成（見附錄A），包括：

a）凈水供水單元設備：供水純化模塊、純水水質(zhì)自動化調(diào)控模塊；

b）斑馬魚循環(huán)養(yǎng)殖設備：斑馬魚養(yǎng)殖水凈化模塊、養(yǎng)殖水動力循環(huán)模塊、養(yǎng)殖水自動化控制即

自動化養(yǎng)殖安全模塊、斑馬魚養(yǎng)殖模塊，養(yǎng)殖系統(tǒng)遠程監(jiān)控和報警模塊。

4.4.2獨立式斑馬魚循環(huán)養(yǎng)殖設備

包括供水純化與純水水質(zhì)自動化調(diào)控模塊、斑馬魚養(yǎng)殖水凈化模塊、養(yǎng)殖水動力循環(huán)模塊、養(yǎng)

殖水自動化控制即自動化養(yǎng)殖安全模塊（不強制）、斑馬魚養(yǎng)殖模塊，養(yǎng)殖系統(tǒng)遠程監(jiān)控和報警模

塊（不強制）。這些模塊的結(jié)構(gòu)功能和工作原理與集中式斑馬魚循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的相同。設備結(jié)構(gòu)

示意圖見附錄B。

4.5環(huán)境要求

斑馬魚養(yǎng)殖魚房的實驗動物環(huán)境屬于普通環(huán)境，具體技術指標要求見表1：

表1技術指標要求

房間名稱養(yǎng)殖室孵育室隔離檢疫室設備間

功能間a溫度/℃22～3222～3222～3218～26

功能間最大日溫差/℃

6666

≤

水溫度/℃24～3024～3024～30/

3

T/CASXXX—XXXX

水最大日溫差/℃

444/

≤

相對濕度/%40～7040～7040～70040～70

最小換氣次數(shù)/（次/h）

888/

≥

養(yǎng)殖水氨濃度/（mg/L）

0.020.020.02/

≤

噪聲/dB（A）

707070/

小于等于

照度/lx54～32454～32454～324/

晝夜明暗交替時間/hb14:1014:1014:10/

a功能間包括養(yǎng)殖室、孵育室、隔離檢疫室和設備間。

b晝夜明暗交替時間之比為明：暗。

5種質(zhì)

5.1形態(tài)特征

5.1.1體呈紡錘形，尾鰭長且呈叉形。

5.1.2背部橄欖色；體側(cè)鰓蓋后緣至尾未位置，雄魚有數(shù)條深藍色和檸檬色相間縱紋，雌魚則為藍

色和銀灰色相間縱紋。

5.2DNA條形碼

DNA序列歧異度應小于或等于1.0%

5.3遺傳管理

實驗魚引種、傳代過程應建立包括種名、來源、數(shù)量、雌雄比例、繁殖生產(chǎn)情況等信息的譜系

檔案。

傳代親本宜選擇6月齡～15月齡健康成熟個體。

6養(yǎng)殖

6.1基本要求

6.1.1養(yǎng)殖水環(huán)境要求見表2：

表2養(yǎng)殖水環(huán)境要求

指標要求

水溫24℃～30℃

日水溫差≤4℃

電導率300μS/cm～1500μS/cm

pH值6.8～7.5

4

T/CASXXX—XXXX

二氧化碳≤5mg/L

溶解氧5mg/L～8mg/L

一般硬度50mg/L～100mg/L

非離子氨≤0.02mg/L

亞硝酸鹽≤0.2mg/L

硝酸鹽≤5mg/L

余氯≤0.2mg/L

6.1.2室內(nèi)檢查：每天檢查并記錄室內(nèi)室溫、水溫、濕度和設備運行狀態(tài)。

6.1.3水質(zhì)檢查：每周應對養(yǎng)殖用水進行檢測并記錄，檢測指標包括電導率、pH值、二氧化碳、

溶解氧、一般硬度、非離子氨、亞硝酸鹽、硝酸鹽和余氯。如所測數(shù)據(jù)不在正常范圍之內(nèi)，應及時查

明原因、處理并記錄。

6.1.4設備檢查：

——每天上午、下午各檢查一次凈水系統(tǒng)，包括原水箱和凈水箱液位、循環(huán)泵壓力、鹽罐液位、

堿罐液位、紫外燈管、鎮(zhèn)流器、濾棉、進水閥和排水閥；

——一般情況下，循環(huán)水系統(tǒng)壓力過低、循環(huán)水流速減小時，應更換濾袋；

——濾棉每周更換一次，更換前應使用純化水浸泡24h，然后晾干；

——鹽罐和堿罐的液位小于1/4時，應分別添加海鹽和碳酸氫鈉；

6.1.5其他檢查：每天應檢查照明控制系統(tǒng)、電扇、空調(diào)和風機是否正常運行，如有故障應及時處

理并記錄故障原因。

6.1.6健康安全操作要求：

——工作人員不應帶入有刺激性氣味的物品，包括香水或驅(qū)蚊水等；

——工作人員應穿專用的工作服和工作鞋，操作應戴手套；

——工作人員不應患有人魚共患的疾病，如腸炎弧菌、創(chuàng)傷弧菌、霍亂弧菌、沙氏桿菌和各種

線蟲病等。感冒、咳嗽及有外傷性傷口人員慎入；

——工作人員不應向養(yǎng)殖魚房外的人員透露密碼，進出養(yǎng)殖魚房應隨手關門；

——養(yǎng)殖魚房處于黑暗期間，不應進入。

6.2喂養(yǎng)

6.2.1一般要求

喂食飼料不宜過多，網(wǎng)板若被多余的飼料堵塞，應及時清理或更換，避免影響水質(zhì)。薄片飼料

應磨成粉末狀。開始喂魚之前應關閉養(yǎng)殖系統(tǒng)的水閥，讓水流停止。不應喂養(yǎng)正進行配對產(chǎn)卵的魚。

6.2.20dpf

將魚卵清洗干凈并去除死卵后轉(zhuǎn)入250mL的容器中，每個容器大約放置500顆魚卵。4h后清

除死卵并換水，4h后再次清除死卵、換水。

注：dpf為受精后天數(shù)。

6.2.31dpf～5dpf

1dpf～5dpf的幼魚，每天清除死卵和換水各兩次，斑馬魚孵化之后，及時去除水中的絨膜。每

次換水應換掉原容器里95%的水，并補充新鮮的養(yǎng)魚用水。

6.2.45dpf～6dpf

5

T/CASXXX—XXXX

將魚缸放在專用的幼魚培養(yǎng)區(qū)，加少量養(yǎng)魚用水，每日喂3次幼魚；每個魚缸喂食量以飼料散

開后所形成的薄層覆蓋1/3水面積為準，每缸約喂5mg微囊飼料。

6.2.56dpf～14dpf

每天加水1/3，加滿后開小水閥，水流不宜過大，呈水滴狀。如果10dpf之前水質(zhì)混濁，加水量

可以增加。

第10dpf開始嘗試早上給每個魚缸喂食1滴~2滴豐年蝦。過15min查看，幼魚如果吃了豐年

蝦，腹部會變成橙色；如果有20%以上的幼魚能夠吃豐年蝦，那么可以開始每天早上、下午少量喂

食豐年蝦；如果不能吃，則在12dpf、14dpf重新嘗試。

6.2.615dpf～30dpf

20dpf后開始嘗試喂食薄片飼料。30dpf將3L缸里面的魚轉(zhuǎn)移至10L缸內(nèi)，每缸養(yǎng)殖60尾。

6.3繁育

6.3.1確定需要進行交配的斑馬魚數(shù)量，可以用以下公式估算：野生型斑馬魚（每個交配盒3條魚，

1雄2雌）

6.3.21×（需卵量）/200＝需要準備的斑馬魚盒數(shù)（每盒約產(chǎn)300個卵）

6.3.3如果種魚是第一次交配或長時間沒有交配，需要多準備一些交配的魚；在一次繁育中不應全

部使用第一次交配或長時間沒有交配的魚。

6.3.4根據(jù)斑馬魚繁殖記錄選擇需要進行交配的魚；將交配盒外盒和內(nèi)盒疊放在一起，中間用隔板

分開；交配盒中加新鮮的系統(tǒng)養(yǎng)魚用水，體積占1/2～2/3。

6.3.5喂食晚餐1h后將需配對的雌魚和雄魚取出，置于交配盒內(nèi)盒中；一側(cè)放入雌魚，另一側(cè)放

入雄魚，蓋上蓋板。

6.3.6做好標簽，標記每一個交配盒中種魚的編號、在養(yǎng)殖設備中的位置，在斑馬魚繁殖表中記錄

相關信息。

6.3.7不應在交配盒中喂食。

6.3.8應使魚處于適宜環(huán)境條件下，確保避光過夜。

6.3.9燈光開啟后10min內(nèi)迅速移去中間的隔板，然后斑馬魚自行交配、產(chǎn)卵；斑馬魚產(chǎn)卵的時

間控制在1h～1.5h內(nèi)。

6.3.10交配完成后，將種魚從交配盒中拿出，喂食后放回原來的魚缸中。

6.4魚卵收集與消毒

6.4.1將交配盒中的成年斑馬魚撈回系統(tǒng)養(yǎng)殖架上的魚缸。

6.4.2向收集魚卵的容器內(nèi)加入2cm～3cm的養(yǎng)魚用水，備用。

6.4.3拿掉交配盒中的隔離網(wǎng)，將交配盒底部的卵倒入干凈篩網(wǎng)中，如無特殊需要，同一批親代魚

產(chǎn)的卵可以收集在一起。

6.4.4用養(yǎng)魚用水從正面反復沖洗網(wǎng)兜，將排泄物和其它污物沖洗掉。

6.4.5將篩網(wǎng)反扣在容器上，用養(yǎng)魚用水將篩網(wǎng)中的魚卵輕緩沖洗到容器中。

6.4.6用干凈的吸管除去死掉的魚卵和其它未沖洗掉的污物，粘有雜物不能沖洗干凈的魚卵也應去

除。

6.4.7粗略計數(shù)，每個容器內(nèi)魚卵的數(shù)量不應超過500個。

6.4.8將魚卵收集日期、魚卵數(shù)量及親本信息標記在容器上

6.4.9將裝有魚卵的容器放在（28±2）℃的培養(yǎng)箱中。

6

T/CASXXX—XXXX

6.5病魚和死魚清除

6.5.1每天檢查魚缸內(nèi)有無病魚或死魚。

6.5.2如果發(fā)現(xiàn)病魚或死魚，戴上手套將其用網(wǎng)兜撈出。

6.5.3將撈出的病魚用冰水混合物處死，用塑料袋包裹后放入在-20℃冰箱暫時凍存，隨后集中處

理。

6.5.4將病魚或死魚所在的魚缸位置、標號以及魚的品系等記錄在《死魚及病魚記錄表》中。

6.5.5將病魚和死魚所用的魚缸、網(wǎng)撈用濃度75%的乙醇消毒。

6.6外來魚接收

6.6.1接收外來斑馬魚時，應檢查外包裝上的斑馬魚品系和數(shù)量是否正確。如果信息正確，則將包

裝箱拿到魚過渡室并打開檢查；如果信息錯誤，則應直接退回。

6.6.2打開外包裝后，先查看是否有死魚。如果有死魚，則立刻用干凈網(wǎng)兜將死魚撈出。將魚放在

養(yǎng)殖中心，待水溫和養(yǎng)殖系統(tǒng)的水溫相差小于2℃后，倒掉約75%的養(yǎng)魚用水，用斑馬魚養(yǎng)殖系統(tǒng)

的養(yǎng)魚用水補足，此后每天更換25%的養(yǎng)魚用水。

6.6.3外來斑馬魚到達后當天不應喂食，從到達后第二天開始正常喂食。

6.6.4在隔離檢疫室中每天對外來斑馬魚進行觀察，查看斑馬魚種是否有生病或死亡現(xiàn)象，進食和

游動是否正常。如果有生病或死亡情況發(fā)生，應立即處理并記錄。

6.7微生物和寄生蟲監(jiān)測

應按照GB/T39649的規(guī)定執(zhí)行。

7

T/CASXXX—XXXX

A

附錄A

（資料性）

獨立式斑馬魚循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)結(jié)構(gòu)圖

獨立式斑馬魚循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)結(jié)構(gòu)圖見圖A.1。

圖A.1獨立式斑馬魚循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)結(jié)構(gòu)圖

8

T/CAS