DB45T-奶水?;铙w采卵操作技術(shù)規(guī)程編制說明_第1頁
DB45T-奶水牛活體采卵操作技術(shù)規(guī)程編制說明_第2頁
DB45T-奶水?;铙w采卵操作技術(shù)規(guī)程編制說明_第3頁
DB45T-奶水?;铙w采卵操作技術(shù)規(guī)程編制說明_第4頁
DB45T-奶水?;铙w采卵操作技術(shù)規(guī)程編制說明_第5頁
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文檔簡介

廣西地方標(biāo)準(zhǔn)《奶水?;铙w采卵操作技術(shù)規(guī)程》(征求意見稿)編制說明一、任務(wù)來源、起草單位、主要起草人根據(jù)《廣西壯族自治區(qū)市場監(jiān)督管理局關(guān)于下達(dá)2023年廣西地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂項目計劃的通知》(桂市監(jiān)函(2023)2257號)文件精神,由廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出,廣西壯族自治區(qū)水牛研究所、廣西皇氏賽爾生物技術(shù)有限公司共同起草的廣西地方標(biāo)準(zhǔn)《奶水?;铙w采卵操作技術(shù)規(guī)程》(項目編號:2023-1205)已獲批立項。為高質(zhì)量編制廣西地方標(biāo)準(zhǔn)《奶水?;铙w采卵操作技術(shù)規(guī)程》,由起草單位成立標(biāo)準(zhǔn)編制工作組并進(jìn)行如下分工:姓名職稱/職位工作單位主要負(fù)責(zé)工作覃廣勝研究員廣西水牛研究所統(tǒng)籌標(biāo)準(zhǔn)編制工作,組織人員進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布后的宣貫培訓(xùn)。負(fù)責(zé)起草標(biāo)準(zhǔn)草案、征求意見稿和標(biāo)準(zhǔn)編制說明、送審稿及編制說明的編寫工作及征求意見會、網(wǎng)上征求意見的匯總修改。黃榮春畜牧師廣西水牛研究所負(fù)責(zé)起草標(biāo)準(zhǔn)草案、征求意見稿和標(biāo)準(zhǔn)編制說明、送審稿及編制說明的編寫工作及征求意見會、網(wǎng)上征求意見的匯總修改。譚正準(zhǔn)畜牧師廣西水牛研究所負(fù)責(zé)起草標(biāo)準(zhǔn)草案、征求意見稿和標(biāo)準(zhǔn)編制說明、送審稿及編制說明的編寫工作及征求意見會、網(wǎng)上征求意見的匯總修改。黃健畜高級畜牧師廣西水牛研究所負(fù)責(zé)起草標(biāo)準(zhǔn)草案、征求意見稿和標(biāo)準(zhǔn)編制說明、送審稿及編制說明的編寫工作及征求意見會、網(wǎng)上征求意見的匯總修改。李輝畜牧師廣西水牛研究所負(fù)責(zé)起草標(biāo)準(zhǔn)草案、征求意見稿和標(biāo)準(zhǔn)編制說明、送審稿及編制說明的編寫工作及征求意見會、網(wǎng)上征求意見的匯總修改。韋亮源技術(shù)主管皇氏賽爾生物科技(廣西)有限公司負(fù)責(zé)起草標(biāo)準(zhǔn)草案、征求意見稿和標(biāo)準(zhǔn)編制說明、送審稿及編制說明的編寫工作及征求意見會、網(wǎng)上征求意見的匯總修改。陳明棠正高級畜牧師廣西水牛研究所負(fù)責(zé)起草標(biāo)準(zhǔn)草案、征求意見稿和標(biāo)準(zhǔn)編制說明、送審稿及編制說明的編寫工作及征求意見會、網(wǎng)上征求意見的匯總修改。黃加祥正高級畜牧師廣西水牛研究所負(fù)責(zé)起草標(biāo)準(zhǔn)草案、征求意見稿和標(biāo)準(zhǔn)編制說明、送審稿及編制說明的編寫工作及征求意見會、網(wǎng)上征求意見的匯總修改。鐘華配畜牧師廣西水牛研究所負(fù)責(zé)起草標(biāo)準(zhǔn)草案、征求意見稿和標(biāo)準(zhǔn)編制說明、送審稿及編制說明的編寫工作及征求意見會、網(wǎng)上征求意見的匯總修改。李兆和技術(shù)主管皇氏賽爾生物科技(廣西)有限公司負(fù)責(zé)文獻(xiàn)資料的查詢、收集和整理工作,參與區(qū)內(nèi)調(diào)查,協(xié)助項目實施。楊春艷正高級畜牧師廣西水牛研究所對標(biāo)準(zhǔn)實施情況進(jìn)行總結(jié)分析,不斷對地方標(biāo)準(zhǔn)提出修正意見。鄭海英高級畜牧師廣西水牛研究所對標(biāo)準(zhǔn)實施情況進(jìn)行總結(jié)分析,不斷對地方標(biāo)準(zhǔn)提出修正意見。尚江華研究員廣西水牛研究所對標(biāo)準(zhǔn)實施情況進(jìn)行總結(jié)分析,不斷對地方標(biāo)準(zhǔn)提出修正意見。二、制定標(biāo)準(zhǔn)的必要性和意義廣西奶水牛存欄量及水牛奶產(chǎn)量均居全國第一,并擁有全國最大的良種水牛繁育基地、全國最大的水牛冷凍精液中心、農(nóng)業(yè)部水牛遺傳繁殖技術(shù)重點實驗室。目前廣西和廣東存欄雜交水牛超過36.51萬頭,2019年廣西和廣東奶水牛相關(guān)產(chǎn)業(yè)產(chǎn)值近50億元,帶動約20萬農(nóng)民養(yǎng)殖戶脫貧。2021年,廣西水牛奶產(chǎn)量占全國80%,相關(guān)產(chǎn)業(yè)產(chǎn)值接近100億元。奶水牛已成為廣西特色鮮明、潛力巨大的優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)。水牛奶產(chǎn)業(yè)上端連接農(nóng)村農(nóng)民,下端連接市場和消費者,中間是科技和加工企業(yè),全產(chǎn)業(yè)鏈涵蓋了一二三產(chǎn)業(yè),對促進(jìn)鄉(xiāng)村振興和一二三產(chǎn)融合發(fā)展有著非常重大的意義。盡管通過雜交改良我國水牛泌乳性狀已經(jīng)有了一定程度的提升,但是還沒有形成可持續(xù)發(fā)展的種群規(guī)模,且在繁衍過程中泌乳性狀不斷退化,未從根本上扭轉(zhuǎn)我國奶水牛種業(yè)自主創(chuàng)新能力弱、整體競爭力不強的局面?,F(xiàn)階段最突出問題是奶水牛良種種源匱乏,單產(chǎn)量低、種群數(shù)量少,雜交良種繁育周期長,奶源供應(yīng)嚴(yán)重不足。目前國內(nèi)純種河流型乳用水牛不足1000頭,主要飼養(yǎng)在廣西水牛研究所,經(jīng)過幾十年的雜交改良,累計出生的雜交水牛超過100萬頭,但主要作為肉用,可用于擠奶的雜交水牛數(shù)量相對較少,現(xiàn)有4.3萬頭擠奶水牛,集中分布在廣西、廣東、云南、福建、浙江等省區(qū),絕大多數(shù)為雜交母牛,平均單產(chǎn)1000~1400千克,由于高產(chǎn)奶牛群體較少,高產(chǎn)群體數(shù)量的產(chǎn)奶量與國際水平2.1噸相比差距顯著,水牛作為奶畜資源未能得到充分挖掘。種源生產(chǎn)和供應(yīng)能力跟不上產(chǎn)業(yè)發(fā)展需要,品種改良能力已達(dá)到極限,國內(nèi)年產(chǎn)河流型乳用種公牛約100頭,年產(chǎn)凍精60萬支,全部以凍精改良計,僅能配種母牛28.5萬頭,而廣西的水牛能繁母牛有180多萬頭,若全部以凍精改良計,年需凍精近360萬支,需有采精種公牛700頭,種公牛數(shù)量缺口之大顯而易見。如果推廣國外以本交為主的經(jīng)驗,則缺口更大,根本無法滿足實際需要。因此,采用胚胎生物技術(shù)挖掘良種奶水牛種質(zhì)資源,以本地水牛作為受體牛進(jìn)行胚胎移植,縮短良種繁育周期,擴大繁育培育優(yōu)質(zhì)種群,助推產(chǎn)業(yè)升級已迫在眉睫。隨著奶水牛胚胎生物技術(shù)與胚胎移植技術(shù)的不斷發(fā)展,對遺傳基因明確的胚胎和卵母細(xì)胞需求量不斷增大,雖然可通過超數(shù)排卵技術(shù)獲得比自然發(fā)情狀態(tài)下更多的胚胎,但由于水牛超排效果不穩(wěn)定,效率低,不能預(yù)知供體對超排的反應(yīng),至今仍無法完全掌握其規(guī)律;而取自屠宰后牛卵巢的卵母細(xì)胞,雖經(jīng)濟(jì)方便,但往往存在對供體母牛種用價值不了解和不能重復(fù)利用等缺點。因此,如何獲取數(shù)量較多遺傳背景清楚的卵母細(xì)胞已成為胚胎生產(chǎn)走向產(chǎn)業(yè)化推廣應(yīng)用的關(guān)鍵。而活體采卵是繼體外受精、胚胎移植之后的又一項胚胎工程技術(shù),它與體外受精、胚胎移植等配套綜合利用,不僅可反復(fù)從良種動物體內(nèi)采集卵母細(xì)胞生產(chǎn)胚胎,提高母畜繁殖效能、縮短世代間隔,加速動物育種進(jìn)程,而且具有胚胎生產(chǎn)成本低、效率高,對供體母畜的生產(chǎn)和繁殖性能無不良影響等特點,因而越來越受到人們的重視,成為今后良種胚胎生產(chǎn)的主要方向。隨著畜牧業(yè)的發(fā)展和胚胎生物工程技術(shù)研究的深入,為活體采卵技術(shù)提供了廣闊的市場和美好的前景,它和體外受精-胚胎移植結(jié)合已經(jīng)成為歐美和大洋洲等畜牧業(yè)發(fā)達(dá)國家擴大良種牛群的重要繁殖技術(shù),已經(jīng)用于商業(yè)化生產(chǎn),國內(nèi)諸多乳企也爭相引進(jìn)活體采卵和體外受精-胚胎移植技術(shù),以加速良種牛的繁育速度,優(yōu)化牛群結(jié)構(gòu)。但活體采卵操作技術(shù)含量高,遠(yuǎn)比人工授精復(fù)雜,對技術(shù)人員的專業(yè)操作技術(shù)要求高,目前我國專門從事活體采卵的人員非常匱乏,尤其是專家型、技能型活體采卵人才更加短缺,而且目前國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和地方標(biāo)準(zhǔn)上尚缺乏與活體采卵相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程,這些都極大地限制了活體采卵技術(shù)的推廣。通過制定廣西地方標(biāo)準(zhǔn)《奶水?;铙w采卵操作技術(shù)規(guī)程》,以標(biāo)準(zhǔn)為抓手,統(tǒng)一規(guī)定采卵前準(zhǔn)備、采卵操作、采卵后工作、采集卵母細(xì)胞資料記錄等技術(shù)要求,對提高廣西奶水?;铙w采卵操作技術(shù)水平,填補奶水?;铙w采卵相關(guān)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的空白,推動廣西水牛產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展,助力鄉(xiāng)村振興具有重要意義。三、主要起草過程(一)成立標(biāo)準(zhǔn)編制工作組廣西地方標(biāo)準(zhǔn)《奶水牛活體采卵操作技術(shù)規(guī)程》項目任務(wù)下達(dá)后,廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳成立了標(biāo)準(zhǔn)編制工作組,起草單位制定了起草編寫方案與進(jìn)度安排,明確任務(wù)職責(zé),確定工作技術(shù)路線,開展標(biāo)準(zhǔn)研制工作。具體標(biāo)準(zhǔn)編制工作由廣西壯族自治區(qū)水牛研究所、廣西皇氏賽爾生物技術(shù)有限公司組成標(biāo)準(zhǔn)編制工作組完成。編制工作組下設(shè)二個組分別是資料收集組、草案編寫組資料收集組負(fù)責(zé)國內(nèi)外有關(guān)奶水?;铙w采卵操作技術(shù)的文獻(xiàn)資料的查詢、收集和整理工作,查閱前人對奶水?;铙w采卵操作技術(shù)的有關(guān)研究情況和目前科學(xué)界奶水?;铙w采卵操作技術(shù)的研究進(jìn)展。草案編寫組負(fù)責(zé)起草標(biāo)準(zhǔn)草案及后續(xù)征求意見稿和標(biāo)準(zhǔn)編制說明、送審稿及編制說明等編寫工作,包括后期召開征求意見會、網(wǎng)上征求意見,以及標(biāo)準(zhǔn)的不斷修改和完善。(二)收集整理文獻(xiàn)資料標(biāo)準(zhǔn)編制工作組收集了國內(nèi)奶水牛、活體采卵相關(guān)文獻(xiàn)資料。主要有:DB53/T344.2-2011《奶水牛養(yǎng)殖第2部分:繁殖技術(shù)》DB45/T2313-2021《奶水牛同期發(fā)情一人工授精操作技術(shù)規(guī)程》DB53/T344.4-2011《奶水牛養(yǎng)殖第4部分:養(yǎng)殖技術(shù)》DB45/T916-2013《水牛胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)操作規(guī)程》(三)研討確定標(biāo)準(zhǔn)主體內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)編制工作組在對收集的資料進(jìn)行整理研究之后,標(biāo)準(zhǔn)編制工作組召開了標(biāo)準(zhǔn)編制會議,對標(biāo)準(zhǔn)的整體框架結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究,并對標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵性內(nèi)容進(jìn)行了初步探討。經(jīng)過研究,標(biāo)準(zhǔn)的主體內(nèi)容確定為術(shù)語和定義、供體牛的選擇和飼養(yǎng)管理、采卵頻率、采卵前準(zhǔn)備、采卵操作、采卵后工作和采集卵母細(xì)胞資料記錄。(四)調(diào)研、形成草案、征求意見稿2023年6月~8月,標(biāo)準(zhǔn)起草工作小組進(jìn)行了廣泛實地調(diào)研工作,查閱了大量的國內(nèi)外文獻(xiàn)資料,對奶水?;铙w采卵操作技術(shù)的前人研究成果進(jìn)行系統(tǒng)總結(jié)。調(diào)研的同時召集廣西壯族自治區(qū)水牛研究所、廣西皇氏賽爾生物技術(shù)有限公司等單位開展了標(biāo)準(zhǔn)研討會,對奶水牛活體采卵操作技術(shù)的有關(guān)研究情況和目前科學(xué)界奶水?;铙w采卵操作技術(shù)進(jìn)行系統(tǒng)總結(jié)。形成了標(biāo)準(zhǔn)的基本構(gòu)架,對主要內(nèi)容進(jìn)行了討論并對項目的工作進(jìn)行了部署和安排。2023年9月~10月,在前期工作的基礎(chǔ)之上,通過理清邏輯脈絡(luò),整合已有的參考資料中有關(guān)奶水?;铙w采卵操作技術(shù)的部分,在廣西區(qū)內(nèi)相關(guān)單位、企業(yè)等進(jìn)行廣泛實地調(diào)研及查閱資料的基礎(chǔ)上,按照簡化、統(tǒng)一等原則編制完成廣西地方標(biāo)準(zhǔn)《奶水牛活體采卵操作技術(shù)規(guī)程》(草案),并提出申請立項。2023年8月22日,根據(jù)《廣西壯族自治區(qū)市場監(jiān)督管理局關(guān)于下達(dá)2023年廣西地方標(biāo)準(zhǔn)制修定項目計劃的通知》廣西地方標(biāo)準(zhǔn)《奶水牛活體采卵操作技術(shù)規(guī)程》獲批立項。2023年11月~12月,標(biāo)準(zhǔn)起草工作組再次深入廣西區(qū)內(nèi)各相關(guān)單位、企業(yè)進(jìn)行實地調(diào)研。通過實地調(diào)研,掌握各相關(guān)單位關(guān)于奶水?;铙w采卵的具體技術(shù)要求。以草案為基礎(chǔ),提煉核心技術(shù)細(xì)節(jié),在廣西內(nèi)廣泛開展技術(shù)對比和總結(jié),并實際征求意見,通過收集反饋了大量意見,標(biāo)準(zhǔn)編制工作組多次召開會議,對標(biāo)準(zhǔn)草案進(jìn)行了反復(fù)修改和研究討論。進(jìn)一步討論完善標(biāo)準(zhǔn)草案,形成廣西地方標(biāo)準(zhǔn)《奶水?;铙w采卵操作技術(shù)規(guī)程》(征求意見稿)和(征求意見稿)編制說明。四、制定標(biāo)準(zhǔn)的原則和依據(jù),與現(xiàn)行法律、法規(guī)的關(guān)系,與有關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的協(xié)調(diào)情況(一)編制原則1、實用性原則本文件是在充分收集當(dāng)前國內(nèi)、外最新的研究資料,結(jié)合起草單位多年積攢的實踐經(jīng)驗和實驗數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上而總結(jié)起草的,針對奶水?;铙w采卵技術(shù)規(guī)定明確的、詳細(xì)的操作內(nèi)容和步驟,對生產(chǎn)上活體采卵操作人員起到很好的標(biāo)桿和指導(dǎo)作用,有利于培養(yǎng)更多的高素質(zhì)活體采卵技能型人才,具有較強的實用性和可操作性。2、協(xié)調(diào)性原則本文件編寫過程中注意了與奶水?;铙w采卵操作技術(shù)相關(guān)法律法規(guī)的協(xié)調(diào)問題,在內(nèi)容上與現(xiàn)行法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致。3、規(guī)范性原則本文件嚴(yán)格按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》編寫本標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容,保證標(biāo)準(zhǔn)的編寫質(zhì)量。4、前瞻性原則本文件在兼顧當(dāng)前廣西奶水?;铙w采卵操作技術(shù)現(xiàn)實情況的同時,還考慮到了研究機構(gòu)奶水?;铙w采卵操作技術(shù)需求快速發(fā)展的趨勢和產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整需要,在標(biāo)準(zhǔn)中體現(xiàn)了個別特色性、前瞻性和先進(jìn)性條款,作為對奶水?;铙w采卵操作技術(shù)發(fā)展的指導(dǎo)。(二)編制依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)則起草,標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)文件并結(jié)合起草單位多年的實踐經(jīng)驗和實驗數(shù)據(jù)總結(jié)進(jìn)行起草。(三)與現(xiàn)行法律、法規(guī)的關(guān)系,與有關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的協(xié)調(diào)情況本編制工作組承諾本標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容與各項指標(biāo)不違反相關(guān)法律法規(guī)要求,且不低于國家強制性標(biāo)準(zhǔn)。推薦性國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。經(jīng)調(diào)查,目前與“”相關(guān)或相似且已批準(zhǔn)發(fā)布實施的國家、行業(yè)、地方標(biāo)準(zhǔn)有:(1)《DB53/T344.2—2011奶水牛養(yǎng)殖第2部分:繁殖技術(shù)》規(guī)定了水牛繁殖技術(shù)規(guī)范,包括種公牛的選擇、細(xì)管冷凍精液制作、水牛人工授精技術(shù)、母牛發(fā)情鑒定以及母牛的妊娠診斷、分娩等技術(shù)要求。適用于奶水牛養(yǎng)殖。(2)《DB45/T2313-2021奶水牛同期發(fā)情一人工授精操作技》規(guī)定了奶水牛同期發(fā)情-人工授精技術(shù)的器械物資、母水牛選擇、藥品、時間、處理方案、發(fā)情鑒定、輸精、孕檢等要求。適用于廣西行政區(qū)域內(nèi)奶水牛的同期發(fā)情-人工授精操作。(3)《DB45/T916-2013奶水牛養(yǎng)殖第4部分:養(yǎng)殖技術(shù)》規(guī)定了奶水牛的犢牛、后備牛培育和能繁母牛、種公牛的飼養(yǎng)管理等基本技術(shù)要求。適用于奶水牛養(yǎng)殖。(4)《DB53/T344.4-2011水牛胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)操作規(guī)程》規(guī)定了水牛胚胎體外生產(chǎn)的術(shù)語與定義、水牛卵母細(xì)胞采集、卵母細(xì)胞的體外成熟、精子的體外獲能和精卵體外受精、受精后早期胚胎的體外培養(yǎng)和胚胎的形態(tài)學(xué)鑒定與分級等技術(shù)規(guī)程。適用于水牛體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)的規(guī)范化操作。從以上分析可見,目前暫無與“奶水?;铙w采卵操作技術(shù)規(guī)程”相關(guān)或相似的國家、行業(yè)、地方標(biāo)準(zhǔn)。主要條款的說明廣西地方標(biāo)準(zhǔn)《奶水?;铙w采卵操作技術(shù)規(guī)程》主要內(nèi)容包括術(shù)語和定義、供體牛的選擇和飼養(yǎng)管理、采卵頻率、采卵前準(zhǔn)備、采卵操作、采卵后工作和采集卵母細(xì)胞資料記錄。(一)術(shù)語和定義活體采卵的術(shù)語和定義是根據(jù)活體采卵技術(shù)的特點及作用進(jìn)行確定,活體采卵是卵母細(xì)胞的活體采集技術(shù)(簡稱活體采卵)是借助超聲波或內(nèi)窺鏡觀察,直接從活體母牛卵巢上抽取卵母細(xì)胞的技術(shù),通過體外受精技術(shù)進(jìn)行體外成熟培養(yǎng),可生產(chǎn)大量系譜明確的胚胎。供體牛的術(shù)語和定義是根據(jù)供體牛的特點進(jìn)行定義。(二)供體牛的選擇和飼養(yǎng)項目起草單位在水?;铙w采卵和胚胎生物技術(shù)方面積累了豐富的經(jīng)驗,開展了影響水?;铙w采卵效果的因素研究,并且建立了一套穩(wěn)定高效的奶水?;铙w采卵技術(shù)方法和體系。供體牛的選擇在供體牛的選擇上,起草單位在供體牛的年齡及個體、季節(jié)和品種對活體采卵效果的影響方面開展了相關(guān)研究:(1)年齡及個體對活體采卵效果的影響由長期的活體采卵實驗結(jié)果可知,各年齡段的母牛均可用作活體采卵的供體。青年母牛(13~15月齡)甚至性成熟前的犢牛(6~9月齡)均可作為活體采卵的供體,而且不會影響這些牛卵巢的功能和以后的妊娠率;但水牛的性成熟較晚,育成母牛卵巢也普遍較小,因此業(yè)內(nèi)較少開展育成母水牛的活體采卵。目前,有通過激索處理對水牛幼畜進(jìn)行活體采卵的研究,廣西水牛研究所黃右軍等將42頭河流型奶水牛按年齡分為A組(3~7歲)、B組(8~12歲)和C組(13~17歲)進(jìn)行活體采卵,每周采集2次,結(jié)果表明,A組獲得的可用卵母細(xì)胞為(4.35±3.14)枚,明顯高于B組(2.47±2.58)枚、C組(2.36±2.24)枚,由此可見3~7歲母水牛較適宜用于活體采卵,不同個體差異也非常明顯。(2)季節(jié)對活體采卵效果的影響水牛的發(fā)情具有較強的季節(jié)性,這一特性也影響了水牛的活體采卵效果。龐春英等統(tǒng)計了2006~2008年活體采卵數(shù)據(jù),春季活體采卵每頭牛平均回收卵子數(shù)為(4.80±1.77)枚,可用卵子(2.77±1.19)枚;夏季每頭牛平均回收卵子數(shù)為(3.72±1.58)枚,可用卵子(2.11±1.11)枚;秋、冬季每頭牛平均回收卵子數(shù)為(5.88±2.84)枚,可用卵子(3.56±1.51)枚,表明水?;铙w采卵效果受季節(jié)影響較大,秋、冬季節(jié)活體采卵效果最好,春季次之,夏季最差。原因可能是在發(fā)情旺季時水牛卵巢上有較多的卵泡發(fā)育,可采集的卵泡數(shù)較多,每頭牛平均回收卵子數(shù)隨之增加,但各個季節(jié)的卵母細(xì)胞可用率差異不顯著(P>0.05)。(3)品種對活體采卵效果的影響梁賢威等通過進(jìn)行不同品種水?;铙w采卵和體外受精效果比較得知:摩拉、尼里-拉菲水牛每頭次可采卵泡數(shù)、頭均回收卵母細(xì)胞數(shù)、頭均可用卵母細(xì)胞和回收率均差異不顯著(P>0.05),活體采集的摩拉水牛和尼里-拉菲水牛卵母細(xì)胞體外受精后囊胚率分別為21.25%和18.92%,差異也不顯著(P>0.05)。結(jié)果見表1、2:表1不同品種水牛活體采卵效果品種采卵頭次穿刺卵泡數(shù)回收卵數(shù)可用數(shù)卵母細(xì)胞回收率%)摩拉607.82±0.415.51±0.413.96±0.2470.02尼里-拉菲607.60±0.525.20±0.303.63±0.3167.41表2不同品種水?;铙w采集卵母細(xì)胞體外受精效果品種卵數(shù)分裂分裂率(%)囊胚囊胚率(%)摩拉24013757.085121.25尼里-拉菲22212054.054218.92綜上,根據(jù)起草單位的具體實驗探究并結(jié)合起草單位多年的經(jīng)驗進(jìn)行擬定,宜選擇年齡在2.5~10歲之間、品種優(yōu)良、生產(chǎn)性能好、遺傳穩(wěn)定、譜系清楚,且生殖器官發(fā)育正常,尤其是卵巢飽滿富有彈性,周長半徑約2cm以上,卵巢韌帶夠長,無陰道炎、子宮內(nèi)膜炎、卵巢囊腫等疾病,體質(zhì)健壯、繁殖機能正常,無遺傳和傳染性疾病的供體牛。供體牛的飼養(yǎng)供體水牛飼養(yǎng)在相對固定欄舍內(nèi),密度適中,環(huán)境衛(wèi)生好;活體采卵前5周,加強飼養(yǎng)管理,在飼料中添加多維(包括維生素A、D、E)和微量元素,劑量參見產(chǎn)品說明;飲水清潔衛(wèi)生;采卵前2周,避免疫苗注射和轉(zhuǎn)群應(yīng)激。(三)采卵頻率由活體采卵的操作機理可知,只要采卵針能經(jīng)母牛陰道穹窿頂部穿刺到卵巢(卵泡)即可開展活體采卵,因此無論性周期是哪一天還是乏情的母水牛,即使處于產(chǎn)奶、干奶、懷孕的母水牛均可用于活體采卵,唯有需要考慮的是活體采卵效率或者供體牛的遺傳價值。一般處于乏情期的母水牛卵巢上可采卵泡數(shù)較少,卵巢質(zhì)地偏硬,育成母牛卵巢普遍較小,不宜對兩者進(jìn)行活體采卵。而在性周期方面,雖然在性周期的不同時間可采卵泡數(shù)有所不同;但經(jīng)第1次采卵后,各卵巢上的可采卵泡已基本采出,卵泡期趨于一致,后續(xù)的采出效率基本相同,因此對于長期批量活體采卵無需刻意選擇性周期的哪一天進(jìn)行活體采卵,需要考慮的是活體采卵間隔。因此,起草單位開展了活體采卵間隔及持續(xù)時間對活體采卵效果的影響研究:表3采卵批次對活體采卵卵母細(xì)胞質(zhì)量的影響批次采卵頭次卵母細(xì)胞優(yōu)質(zhì)卵母細(xì)胞百分率/%卵母細(xì)胞回收率/%ABCD19214.29±2.2941.35±2.2239.76±2.67a2.41±0.8255.64±2.98b65.91±2.91a29213.60±2.4350.45±3.8324.65±3.02b1.36±0.5564.05±3.63b48.16±3.08b39214.76±2.6155.52±3.9521.17±3.20b0.94±0.5070.28±3.82a43.54±2.73b49216.93±2.8452.37±3.9923.42±2.93b0.57±0.3969.30±3.45a50.77±3.03b59215.04±2.6352.61±3.8516.51±2.53b0.74±0.4667.65±3.85a47.31±3.27b平均14.40±1.1451.07±1.8325.16±1.331.20±0.2566.05±1.7650.98±1.39P值0.9950.087<0.00010.1470.026<0.0001如表3顯示,連續(xù)5次活體采卵時,第1次卵母細(xì)胞回收率(65.91%)顯著高于第2~5次卵母細(xì)胞,而第2、3、4、第5次之間差異不顯著,這可能是第1次卵母細(xì)胞可穿刺的中等卵母細(xì)胞比第2~5次卵母細(xì)胞多,便于穿刺,回收率高,而第2~5次小卵泡多。優(yōu)質(zhì)卵母細(xì)胞(A+B級)1~5次的回收率分別為55.64%、64.05%、70.28%、69.30%、67.65%,優(yōu)質(zhì)卵母細(xì)胞的平均百分率為66.05%。進(jìn)行連續(xù)活體采卵時,第1、2次優(yōu)質(zhì)卵母細(xì)胞的百分率比第3、4、5次效果差,第1、2次的優(yōu)質(zhì)卵母細(xì)胞的百分率與其他批次優(yōu)質(zhì)卵母細(xì)胞百分率差異顯著。第1次活體采卵回收C級卵母細(xì)胞(裸卵和網(wǎng)狀細(xì)胞)所占比例(39.76%)最大,與第2、3、4、5次差異顯著。隨著重復(fù)活體采卵次數(shù)的增加,D級卵母細(xì)胞(裸卵和網(wǎng)狀細(xì)胞)所占的比例不斷減少。因此,根據(jù)實驗結(jié)果及起草單位的多年經(jīng)驗,處于空懷期,或懷孕1~3月內(nèi)的奶水牛,宜每周采卵2次,中間間隔3d。同一批牛連續(xù)采卵最好不超過3個月。(四)采卵前準(zhǔn)備1.儀器設(shè)備活體采卵的儀器設(shè)備包括B超活體采卵系統(tǒng)和其他固定奶水牛、消毒等過程所需的儀器設(shè)備,主要依據(jù)起草單位多年的經(jīng)驗以及實驗的實際操作進(jìn)行確定。2.藥品試劑藥品試劑主要包括消毒液、潤滑液、超排藥物、促黃體溶解、麻醉藥、蘇醒藥和采卵液等類型的藥物,主要依據(jù)起草單位多年的經(jīng)驗以及實驗的實際操作進(jìn)行確定。其中外源性激素可促進(jìn)卵巢卵泡發(fā)育,使可供采集卵母細(xì)胞數(shù)增加,提高質(zhì)量。因此,起草單位也進(jìn)行了激素處理對活體采卵效果的影響研究。在活體采卵前用2000U孕馬血清促性腺激素(PMSG)和2000U人絨毛膜促性腺激素(HCG)對15頭地中海青年母水牛(5~9月齡)進(jìn)行處理,結(jié)果表明,激素處理并不增加卵巢的卵泡總數(shù),但可以增加中等以上卵泡數(shù),并提高可用卵母細(xì)胞數(shù)。3.供體牛的準(zhǔn)備在進(jìn)行奶水牛活體采卵前,還需要先將供體牛固定到保定架內(nèi)。并根據(jù)供體牛只的個體差異、應(yīng)激敏感程度選擇是否對牛只進(jìn)行麻醉處理,在母水牛受應(yīng)激反應(yīng)小,但進(jìn)行活體采卵時,臀部容易左右擺動,且愛甩動尾巴,直腸強直收縮,影響卵母細(xì)胞取出的情況下采用局部麻醉,宜選擇3%普魯卡因薦尾間隙硬膜外傳導(dǎo)麻醉;在母水牛性情狂躁,受應(yīng)激反應(yīng)過大,極為不配合,或經(jīng)過局麻仍無法進(jìn)行操作的情況下采用全身麻醉,宜選擇肌肉注射5%靜松靈小劑量鎮(zhèn)靜。采卵器械調(diào)試采卵器械的調(diào)試對奶水牛活體采卵的成功也很關(guān)鍵。其中B型超聲波儀的安裝和調(diào)試,應(yīng)注意真空泵負(fù)壓對活體采卵效果的影響,回收卵子可用率的高低主要取決于附著在卵子上卵丘細(xì)胞的多少和形態(tài)。在隨著壓力的增大,雖然回收率增加;但對卵母細(xì)胞及其周圍顆粒細(xì)胞的形態(tài)損傷較大,卵母細(xì)胞受精率和囊胚率明顯降低。因此,活體采卵所需真空度的壓力大小取決于所用的儀器(包括采卵針類型和導(dǎo)管系統(tǒng))以及牛的品種,根據(jù)起草單位多年的經(jīng)驗,將B型超聲波儀裝至器械車上,推至保定架后方,接通電源(220V),真空泵汞柱壓力宜調(diào)至40mmHg~50mmHg。并將把預(yù)先分裝好的采卵液(每頭母牛30mL~50mL)和1個空的50mL卵泡液收集管放入(38±0.5)℃恒溫裝置中。從消毒包中取出采卵針及連接膠管,將采卵針安放于探頭上的槍套卡槽內(nèi),膠管的另一端連接收集管,然后用采卵液通洗待用。5.采卵人員準(zhǔn)備進(jìn)行活體采卵實驗時,采卵技術(shù)人員要磨平指甲,帶上長臂手套,涂上潤滑油。這些措施是為了確保操作的安全性和手術(shù)的順利進(jìn)行。磨平指甲是為了防止指甲表面的不平整損壞卵子或?qū)嶒灝a(chǎn)生負(fù)面影響。平整的指甲表面可以減少指甲對卵子的潛在傷害,同時也增加了實驗操作的靈活性。長臂手套可以防止技術(shù)人員的皮膚接觸卵子,防止交叉感染和外部污染物的污染。潤滑油可以降低實驗中器械與卵子之間的摩擦力,使得操作更加順利。另外,潤滑油還可以提供額外的保護(hù),保持卵子的完整性和穩(wěn)定性。(五)采卵操作采卵操作是依據(jù)起草單位多年的實驗經(jīng)驗總結(jié)出來的,形成一套穩(wěn)定高效的奶水?;铙w采卵技術(shù)方法,并整理出了一套明確的、詳細(xì)的操作內(nèi)容和步驟。(1)掏凈供體牛直腸中的糞便,先用自來水洗干凈后軀和外陰部,再用0.1%新潔爾滅消毒,最后用干凈的毛巾擦干。(2)操作者右手伸入直腸固定右側(cè)卵巢。(3)左手將安裝有采卵針的探頭慢慢插入陰道,直抵陰道穹隆,把探頭放在穹窿的右側(cè)

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