DB37T-海月水母暴發(fā)早期防控技術(shù)規(guī)范

Q/LB.□XXXXX-XXXXDB37/T4803—2024前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由山東省海洋局提出并組織實施。本文件由山東省海洋標準化技術(shù)委員會歸口。海月水母暴發(fā)早期防控技術(shù)規(guī)范范圍本文件規(guī)定了海月水母（Aureliacoerulea）暴發(fā)早期防控在防控海域、站位布設(shè)、碟狀體監(jiān)測、螅狀體搜尋與監(jiān)測、螅狀體清除、清除后管理和防控效果評估等方面的要求和方法。本文件適用于黃海和渤海海域海月水母暴發(fā)早期防控。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T12763.6海洋調(diào)查規(guī)范第6部分：海洋生物調(diào)查GB26123空氣潛水安全要求術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。

螅狀體polyp缽水母生活史中形成的身體柔軟，個體微?。ūo最大通常約1mm），進行無性繁殖，常具16條觸手的底棲固著個體。[來源：DB37/T4748—2024，3.2，有修改]

碟狀體ephyra缽水母生活史中由螅狀體通過橫裂生殖產(chǎn)生的浮游階段幼體。[來源：DB37/T4748—2024，3.3，有修改]

水母體medusa水母生活史中形成具有口、傘、口腕及附屬物等較完整的傘形或鐘形等形態(tài)的浮游個體。[來源：DB37/T4748—2024，3.4，有修改]防控海域遭受海月水母暴發(fā)威脅的濱海核電站、火力發(fā)電廠、浴場及養(yǎng)殖區(qū)等周邊海域。站位布設(shè)以受災單位為中心在其周邊海域設(shè)置站位，搜尋海月水母螅狀體（見附錄A），調(diào)查其暴發(fā)來源，通過對螅狀體進行處置實現(xiàn)其暴發(fā)早期防控。站位設(shè)置呈網(wǎng)格型或扇形，調(diào)查區(qū)域半徑通常約為30nmile以內(nèi)；站位之間的距離宜在15nmile以內(nèi)，通常等間距設(shè)置，宜不少于5個站位。重點考慮在受災單位周邊的封閉或半封閉港口、人工湖、養(yǎng)殖區(qū)及跨海大橋等大型沿海工程附近布設(shè)站位。站位布設(shè)宜充分考慮受災單位周邊海流、潮汐及風等水文氣象因素。碟狀體監(jiān)測4月至5月，于布設(shè)站位監(jiān)測海月水母碟狀體（見附錄A）。調(diào)查頻次宜設(shè)置為每月1次以上。碟狀體調(diào)查按照GB/T12763.6的規(guī)定執(zhí)行，利用淺水I型或II型浮游生物網(wǎng)，由底到表垂直拖網(wǎng)采集碟狀體。樣品采集后用中性甲醛溶液固定，加入量為樣品體積的5%，通過體視顯微鏡觀察碟狀體。碟狀體豐度（E）的計算按公式（1）執(zhí)行： E=PV (AUTONUM)式中：E——碟狀體豐度，單位為個每立方米（ind?m-3）；P——全網(wǎng)碟狀體個數(shù)，單位為個（ind）；V——濾水量，單位為立方米（m3）。根據(jù)碟狀體豐度時空分布初步推斷受災單位周邊海域海月水母暴發(fā)的潛在源頭，即其螅狀體棲息地。若某站位發(fā)現(xiàn)其碟狀體，則該站位附近可能存在螅狀體棲息地；若某站位調(diào)查期間未發(fā)現(xiàn)碟狀體，則該站位附近可能不存在螅狀體。螅狀體搜尋與監(jiān)測螅狀體搜尋于初步擬定的海月水母螅狀體棲息地站位附近區(qū)域通過水肺潛水肉眼觀察搜尋其螅狀體。水肺潛水應按GB26123的規(guī)定執(zhí)行，宜于春夏秋季開展。海月水母螅狀體棲息地站位附近搜尋區(qū)域包括：站位周邊水流較小區(qū)域，包括封閉或半封閉港口、人工湖及沿岸養(yǎng)殖區(qū)等人類活動頻繁區(qū)域；大型人工基質(zhì)底表面或其側(cè)面其他硬質(zhì)附著生物的底面，包括大型海上平臺、浮碼頭、橋墩、人工魚礁及養(yǎng)殖網(wǎng)衣等水下人工基質(zhì)，螅狀體通常高密度倒掛附著于上述基質(zhì)表面的下表面（見附錄B）。螅狀體監(jiān)測站位周邊區(qū)域發(fā)現(xiàn)螅狀體后，宜隨機取10個～30個個體通過體視顯微鏡觀察其形態(tài)特征（見附錄A），結(jié)合分子遺傳學方法，按附錄C確認其種類。根據(jù)螅狀體附著基質(zhì)的表面積設(shè)定樣方框。樣方框數(shù)量宜為15個以上，根據(jù)基質(zhì)表面情況宜均勻布設(shè)。樣方框在保證其數(shù)量情況下可根據(jù)基質(zhì)表面積設(shè)定不同大小，如20cm×20cm、10cm×10cm等。樣方框不宜長于30?cm。利用防水相機水下垂直拍攝樣方框內(nèi)螅狀體，拍攝距離宜小于30?cm。根據(jù)每張樣方框照片，計數(shù)螅狀體數(shù)量，填寫螅狀體調(diào)查記錄表（見附錄D）?；|(zhì)表面螅狀體密度（D）按公式（2）計算： D=N1+N2+?+式中：D??——基質(zhì)表面螅狀體密度，單位為個每平方米（ind?m-2）；n???——樣方框數(shù)量，單位為個（ind）；Nn?——第n個樣方內(nèi)螅狀體數(shù)量，單位為個（ind）；S???——樣方框面積，單位為平方米（m2）?；|(zhì)表面螅狀體總數(shù)量（T）按公式（3）計算： T=D×S0 (AUTONUM)式中：T?——基質(zhì)表面螅狀體總數(shù)量，單位為個（ind）；D?——基質(zhì)表面螅狀體密度，單位為個每平方米（ind?m-2）；So?——基質(zhì)表面積，單位為平方米（m2）。螅狀體清除于次年4月前宜選取螅狀體密度大于103?ind?m-2的基質(zhì)開展清除。螅狀體清除遵循生態(tài)環(huán)境保護優(yōu)先的原則，應根據(jù)其附著基質(zhì)的可移除性選擇清除方式，宜選擇物理方法。對于不可移除的基質(zhì)，選擇以下清除方式。水下清除：利用空化射流噴射清除基質(zhì)表面螅狀體，噴射壓力宜選4?MPa～18?MPa，清洗槍與螅狀體間距宜小于20?cm。對于不適于噴射的基質(zhì)或當噴射效果不佳時宜采用刮鏟、刷擦等方式清除螅狀體。陸基清除：當基質(zhì)易于移動時，除采用水下清除外，也可將基質(zhì)轉(zhuǎn)移至陸基，按照水下清除方法清除螅狀體或直接晾曬至螅狀體完全干燥死亡。對于可移除的基質(zhì)，宜直接將基質(zhì)從海水中移除。清除后管理螅狀體清除施工結(jié)束后，按7.2開展螅狀體密度和總數(shù)量跟蹤監(jiān)測；調(diào)查頻次宜每半年1次以上。當監(jiān)測到螅狀體密度或總數(shù)量達到施工前水平時，應繼續(xù)按第8章清除螅狀體。防控效果評估評估內(nèi)容分別比較站位周邊基質(zhì)表面螅狀體清除率和螅狀體清除前后水母體豐度/生物量變化，評估螅狀體的清除效果和早期防控海月水母暴發(fā)效果。螅狀體清除率基質(zhì)表面附著的螅狀體清除后，應當場按7.2監(jiān)測其表面剩余螅狀體密度和總數(shù)量，通過螅狀體清除率表征基質(zhì)表面螅狀體的清除效果。螅狀體清除率（R）按公式（4）或（5）計算： R=To?TaTo R=Do?DaD式中：R??——螅狀體清除率；To??——清除前基質(zhì)表面螅狀體總數(shù)量，單位為個（ind）；Ta??——清除后基質(zhì)表面螅狀體總數(shù)量，單位為個（ind）；Do?——清除前基質(zhì)表面螅狀體密度，單位為個每平方米（ind?m-2）；Da?——清除后基質(zhì)表面螅狀體密度，單位為個每平方米（ind?m-2）。螅狀體清除記錄表見附錄E。螅狀體清除率越高，為基質(zhì)表面螅狀體清除效果越好。施工期間基質(zhì)表面螅狀體清除率不宜低于80%。水母體豐度/生物量于6月至9月，監(jiān)測各布設(shè)站位水母體（見附錄A）豐度/生物量，調(diào)查頻次宜每月1次以上。水母體監(jiān)測宜按照SC/T9403的規(guī)定采用底拖網(wǎng)執(zhí)行，通過掃海面積法按公式（6）估算其豐度/生物量（ρ）： ρ=Ca×q 式中：ρ??——水母體豐度/生物量，單位為個或千克每平方千米(ind?km-2或kg?km-2)；C?——平均每小時底拖網(wǎng)獲得水母數(shù)量或重量，單位為個或千克每網(wǎng)每小時[ind?(net?h)-1或kg?(net?h)-1]；a??——網(wǎng)具每小時掃海面積，單位為平方千米每網(wǎng)每小時[km2?(net?h)-1]；q??——網(wǎng)具的捕獲率（捕撈系數(shù)），宜取0.5～1。利用方差分析比較布設(shè)站位周邊基質(zhì)表面螅狀體清除前后其水母體豐度/生物量的差異顯著性。早期防控海月水母暴發(fā)效果的判定如下：若螅狀體清除后水母體豐度/生物量顯著降低，則早期防控效果較好；若螅狀體清除后水母體豐度/生物量與清除前差異不顯著，或顯著高于螅狀體清除前豐度/生物量，則早期防控效果不好；需防范外源海月水母的入侵，考慮擴大螅狀體清除范圍；或進一步確認布設(shè)站位周邊是否仍有大量螅狀體未發(fā)現(xiàn)和清除。

（資料性）

海月水母螅狀體、碟狀體和水母體形態(tài)代表性圖海月水母螅狀體、碟狀體和水母體代表性圖見A.1。a）螅狀體b）碟狀體c）水母體海月水母螅狀體呈倒圓錐形，身體柔軟，呈乳白色，口盤闊，口柄短。完全發(fā)育的個體通常具16條觸手，柄莖最大約1?mm。新釋放的海月水母碟狀體呈深紅色或者褐色，呈圓盤狀，通常有8對緣瓣（lappet）；緣瓣沒有分叉，長而尖；兩個緣瓣頂端相互靠攏；每對緣瓣之間有1個感覺棍（rhopalia）；刺胞不規(guī)則分散于傘表面；傘徑大小約2?mm～4?mm。海月水母水母體透明膠質(zhì)，圓盤狀，傘中間通常包含4個馬蹄形的生殖腺，腹面有4個口腕，身體含水量約95%以上；成體傘徑約10?cm～30?cm。海月水母螅狀體、碟狀體和水母體形態(tài)

（資料性）

自然海區(qū)海月水母螅狀體附著特征代表性圖自然海區(qū)海月水母螅狀體附著特征代表性圖見圖B.1。a）螅狀體附著于基質(zhì)底部無大型污損生物區(qū)域b）螅狀體附著于基質(zhì)底部海鞘表面c）螅狀體附著于基質(zhì)底部苔蘚蟲表面d）螅狀體附著于基質(zhì)底部紫貽貝表面自然海區(qū)海月水母螅狀體附著特征

（資料性）

海月水母鑒定線粒體COI、16SrRNA分子標記法基因組DNA提取與質(zhì)量檢測利用解剖針隨機挑取基質(zhì)表面少量螅狀體（10個～30個），使用CTAB法或者DNA提取試劑盒提取基因組DNA。取1?μL～3?μL提取的DNA通過1%瓊脂糖凝膠電泳檢測其質(zhì)量，使用凝膠成像系統(tǒng)拍照記錄，利用NanoDrop測定其濃度。引物序列線粒體COI基因片段擴增引物序列為LCO1490:5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’和HCO2198:5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’。線粒體16SrRNA基因片段擴增引物序列為16S-L:5’-GACTGTTTACCAAAAACATA-3’;16S-H:5’-CATAATTCAACATCGAGG-3’。PCR擴增體系及反應條件反應體系為50?μL，包括1.25?U～2.5U的TagDNA聚合酶，10?mol/L的正反向引物各2?μL，2.5?mmol/L的dNTP4?μL，10×PCR擴增緩沖液5?μL，基因組DNA0.1?μg～1?μg，加ddH2O至50?μL。每組PCR均設(shè)陰性對照用來檢測是否存在污染。COI基因片段擴增反應程序為：94?℃預變性3?min，然后運行35個循環(huán)（94?℃變性30?s，46?℃退火30?s，72?℃延伸75?s），最后72?℃延伸7?min。16SrRNA基因片段擴增反應程序為：預處理5個循環(huán)（94?℃變性1?min，45?℃退火50?s，72?℃延伸1

min），然后運行30個循環(huán)（94?℃變性50?s，50?℃退火1?min，72?℃延伸1?min），最后72?℃延伸5?min。所有PCR均在PCR儀上完成。擴增產(chǎn)物經(jīng)純化后利用測序儀進行雙向測序。序列比對鑒定將COI基因序列在GenBank和BOLDSystem中進行核苷酸序列比對，將16SrRNA基因序列在GenBank中進行核苷酸序列比對；序列比對檢出標準為序列相似度98%以上；綜合COI和16SrRNA的比對結(jié)果形成最終鑒定結(jié)果。

（資料性）

海月水母螅狀體調(diào)查記錄表海月水母螅狀體調(diào)查記錄表見表D.1。海月水母螅狀體調(diào)查記錄表海區(qū)：站位：經(jīng)度：緯度：調(diào)查日期：年月日基質(zhì)樣方號樣方面積(m2)樣方水深（m）拍攝時間照片號螅狀體數(shù)量（ind）備注基質(zhì)I12345…基質(zhì)概況（類型、形狀、布放時間等）：螅狀體分布概況：基質(zhì)表面積（m2）：螅狀體密度（ind·m-2）：螅狀體總數(shù)量（ind）：水深（m）水溫（℃）鹽度海況天氣風力（級）風向 調(diào)查人：記錄人：校準人：

（資料性）

海月水母螅狀體清除記錄表海月水母螅狀體清除記錄表見表E.1。海月水母螅狀體清除記錄表海區(qū)：站位：經(jīng)度：緯度：基質(zhì)清除時間（年/月/日）基質(zhì)