DB12T 956-2020 奶牛場糞污中總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的測定 酶底物法　　

DB12Determinationoftotalcoliforms,fecalcoliformsandEscherichiaCmanure-Enzymesubstratemethod天津市市場監(jiān)督管理委員會發(fā)布1本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：趙潤、李辰宇、王景峰、張克強、諶志強、杜連柱2奶牛場糞污中總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的測定酶底物法本標(biāo)準(zhǔn)適用于規(guī)模化奶牛場糞污中總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的同時測凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）GB/T6682—2008分析實驗室用水規(guī)格和試GB/T27522—2011畜禽養(yǎng)殖污水采樣技術(shù)HJ1001—2018水質(zhì)總大腸菌群，糞大腸菌群和大腸埃希氏菌測定酶底物法總大腸菌群和糞大腸菌群totalcoliformsandfeca分解選擇性培養(yǎng)基中的鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG大腸埃希氏菌Escherichia最大可能數(shù)mostprobable4糞污樣品采集34.1采樣物品4.2采樣方法4.3樣品保存在選擇性培養(yǎng)基中培養(yǎng)18h～24h，總大腸菌群和糞大腸菌群能夠產(chǎn)生β-半乳糖苷酶并分解黃色。大腸埃希氏菌可以分解4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG）釋放4-甲基傘形酮，在365nm紫外光源照射下顯藍(lán)色。計數(shù)97孔板中陽性單元格5.2試劑材料5.2.1分析時應(yīng)使用符合GB/T6682—2008中三級水規(guī)定54N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸鈉鹽（HEPEN-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸（HEPES）45.2.397孔定量盤：具有48個標(biāo)準(zhǔn)孔格，1個5.3儀器設(shè)備5.3.3移液管：一次性無菌塑料吸管，也可采用計量合格的可調(diào)式移液器。5.4樣品前處理使用電子天平（5.3.6）準(zhǔn)確稱量樣品按4.2中方法采集的糞污樣品置于盛有198mL生理鹽水的無菌勻質(zhì)袋中，手過0.25mm尼龍篩制成10-2稀釋液。用移液管（5.3.3）吸取上述稀釋液1mL加入到99mL無菌5.5接種完全密封。未培養(yǎng)前觀察孔內(nèi)顏色，若出現(xiàn)類似或深于標(biāo)準(zhǔn)陽性比色盤（5.2.4）的顏色時，應(yīng)5.6培養(yǎng)±0.5℃下培養(yǎng)18h后進行判讀，當(dāng)97孔定量盤中孔格顏色弱于標(biāo)準(zhǔn)陽性比色盤（5.2.4）時，應(yīng)進一步延長培養(yǎng)時間至24h再進行判讀。測定糞大腸菌群時，將接種后的97孔定量盤放入的恒溫培養(yǎng)箱（5.3.1）中44.5℃±0.5℃下培養(yǎng)18h后進行判讀，當(dāng)97孔定量盤中孔格顏色弱于標(biāo)準(zhǔn)陽性比色盤（5.2.4）時，應(yīng)進一步延長培養(yǎng)時間至25.7結(jié)果分析從97孔定量盤法MPN表（見附錄A）中查得每100mL樣品MPN值后，再根據(jù)樣品不同的稀釋度，按照公式（1）換算樣品中總大腸菌群、糞大腸菌群數(shù)或大5C=(MPN×1000)/f………MPN值——查得每100mL樣品MPN值，MPN/100mL；1000——單位轉(zhuǎn)換因子（由MPN/mL轉(zhuǎn)換為MP測定結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，結(jié)果大于等于100時以科學(xué)計數(shù)法表