DB12T 865-2019 水和沉積物中硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法　　

水和沉積物中硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法2019-01-14發(fā)布2019-02-15實(shí)施天津市市場(chǎng)監(jiān)督管理委員會(huì)發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由天津市農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(天津)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李春青、陳永平、高麗娜、時(shí)文博、李寶華。1水和沉積物中硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)適用于水和沉積物中3-氨基-2-唑烷基酮(呋喃唑酮代謝物，以下簡(jiǎn)稱：A0Z)、5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮(呋喃它酮的代謝物，以下簡(jiǎn)稱：AMOZ)、氨基脲(呋喃西林代謝物，以下簡(jiǎn)凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3原理4試劑4.1甲醇：色譜純。4.2醋酸銨：色譜純。4.5三水合磷酸氫二鉀：優(yōu)級(jí)純。4.6乙酸乙酯：色譜純。4.7乙腈：色譜純。4.90.002mol/L醋酸銨溶液：稱取0.15g醋酸銨，用水(實(shí)驗(yàn)用水當(dāng)符合GB/T6682規(guī)定)溶解并4.10甲醇溶液：甲醇：水=5:95(v/v)。4.110.2mol/L鹽酸溶液：量取濃鹽酸(p=1.19g/mL)16.67mL,用水稀釋至1000mL。4.120.05mol/L2-硝基苯甲醛溶液：稱取0.0378g2-硝基苯甲醛，溶于5mL二甲基亞砜中，現(xiàn)4.131.0mol/L磷酸氫二鉀溶液：稱取114g三水合磷酸氫二鉀，溶解于500mL水中。24.16AOZ(呋喃唑酮代謝物)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：1.0mg/mL:準(zhǔn)確稱取10.0mg±0.1mgAOZ,用甲醇溶4.17AMOZ(呋喃它酮代謝物)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：1.0mg/mL:準(zhǔn)確稱取10.0mg±0.1mgAMOZ,用甲4.18SEM(呋喃西林代謝物)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：1.0mg/mL:準(zhǔn)確稱取14.9mg±0.1mgSEM·HCl,4.19AHD(呋喃妥因代謝物)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：1.0mg/mL:準(zhǔn)確稱取13.2mg±0.1mgAHD·HC1,用5.2電子天平：感量0.0001g和0.01mg。5.4恒溫水浴振蕩器：可控溫37℃±1℃。5.5離心機(jī)：4000r/min。5.7冰箱：具備4℃冷藏功能。取充分混勻的水樣100mL用0.45μm量取10mL(精確到0.1mL,V2)水樣于50mL離心管中，加入0.05mL混合內(nèi)標(biāo)工作溶液(4.21)渦旋混合50s,再加入5mL鹽酸溶液(4.11)和0.20mL2-硝基苯甲醛溶液(4.12),渦旋振蕩50s后，置于恒溫水浴振蕩器中37℃避光振蕩16h。3稱取樣品5.00g(精確到0.01g,m),加入0.05mL混合內(nèi)標(biāo)工作溶液(4.21)渦旋混合50s,再加入5mL鹽酸溶液(4.11)和0.20mL2-硝基苯甲醛溶液(4.12),渦旋振蕩50s后，置于恒溫水浴振蕩器中37℃避光振蕩16h。取出離心管冷卻至室溫，加入3mL～5mL磷酸氫二鉀溶液(4.13),調(diào)節(jié)pH至7.0～7.5,加入8mL乙酸乙酯，渦旋振蕩50s,4000r/min離心5min,取上層清液至20mL玻璃離心管中，再加入8mL乙酸乙酯重復(fù)上述操作，合并上清液于40℃下氮?dú)獯蹈伞?zhǔn)確加入1.0mL(V?)甲醇用正己烷凈化，即加入2mL正己烷渦旋離心后棄去上層，取下清液過(guò)0.22μm微孔濾膜，待測(cè))。分別準(zhǔn)確移取10ng/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(4.20)0.050mL、0.10mL和100ng/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作液 按6.1.2和6.1.3步驟操作，按6.3測(cè)定，色譜圖參見(jiàn)附錄A。流動(dòng)相：A.0.002mol/L醋酸銨溶液；B.乙腈；梯度洗脫程序見(jiàn)表1,平衡時(shí)間為5min。時(shí)間(min)流速(ml/min)b)噴霧電壓：4000v;d)輔助氣流量：3L/ming)掃描模式：選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM),選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)母離子、子離子和碰撞能量見(jiàn)表2;4目標(biāo)化合物母離子(m/z)子離子(m/z)碰撞能量(v)AOZ(呋喃唑酮代謝物)AOZ-D?(呋喃唑酮代謝物內(nèi)標(biāo))AHD(呋喃妥因代謝物)AHD-1?C?(呋喃妥因代謝物內(nèi)標(biāo))SEM(呋喃西林代謝物)SEM-1C-1?N?(呋喃西林代謝物內(nèi)標(biāo))AMOZ-D?(呋喃它酮代謝物內(nèi)標(biāo))6.5.3定性依據(jù)在同樣測(cè)試條件下，陽(yáng)性樣品保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在±5%以內(nèi)，且檢測(cè)到的離子的相對(duì)豐度，用與最強(qiáng)離子(基峰)的強(qiáng)度百分比表示，應(yīng)當(dāng)與濃度相當(dāng)?shù)男Ｕ龢?biāo)準(zhǔn)相對(duì)豐度度比應(yīng)符合表3要求：次強(qiáng)碎片離子相對(duì)豐度(%)允許相對(duì)偏差(%)6.5.4定量測(cè)定定量離子采用豐度最大的二級(jí)特征離子碎片(表2)。6.6空白實(shí)驗(yàn)除不加試祥外，按上述6.2、6.3測(cè)定步驟和6.5測(cè)定條件進(jìn)行測(cè)定，色譜圖參見(jiàn)附錄B。7結(jié)果計(jì)算7.1用儀器自帶工作站按內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行自動(dòng)計(jì)算，以化合物上機(jī)響應(yīng)的峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值為縱7.2水樣品中硝基呋喃類代謝物殘留量按式(1)計(jì)算。計(jì)算結(jié)果須扣除空白值。X=C·V?/V?......................................(1)X——樣品中硝基呋喃類代謝物的含量，單位為微克每升(μg/L);5C——樣品制備液中硝基呋喃類代謝物的濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);7.3沉積物樣品中硝基呋喃類代謝物殘留量按式(2)計(jì)算。計(jì)算結(jié)果須扣除空白值。X=C?·V?/m......................................X——樣品中硝基呋喃類代謝物的含量，單位為微克每千克(μg/kg);C——樣品制備液中硝基呋喃類代謝物的濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);m——樣品質(zhì)量，單位為克(g)。8方法靈敏度8.1水中四種硝基呋喃類代謝物的檢出限為0.1μg/L,定量限為0.2μg/L。8.2沉積物中四種硝基呋喃類代謝物的檢出限為1.0μg/kg,定量限為2.0μg/kg。9方法回收率9.1水中添加濃度為0.1μg/L~10μg/L時(shí)回收率為75%~110%。9.2沉積物中添加濃度為1.0μg/kg~10μg/kg時(shí)回收率為75%~110%。10方法精密度本方法的批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%,批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%。11注意事項(xiàng)6(資料性附錄)四種硝基呋喃類代謝物混合標(biāo)準(zhǔn)(2.0ng/mL)特征離子質(zhì)量色譜圖7空白沉積物樣品特征離子質(zhì)量色譜圖0“L“223