2025屆高考生物二輪題型分類突破：考向16 基因工程（含答案）

考向16基因工程【考教銜接】1.艾弗里等人通過(guò)肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),不僅證明了遺傳物質(zhì)是DNA,還證明了。2.限制酶不能切割細(xì)菌自身DNA的原因:。3.真核細(xì)胞和細(xì)菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活。因此,中一般要添加Mg2+。引物是。用于PCR的引物長(zhǎng)度通常為。4.農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有Ti質(zhì)粒,當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后,能。5.電泳鑒定時(shí)未出現(xiàn)特異性條帶的原因有①模板DNA出現(xiàn)污染,②,③,④復(fù)性時(shí)的溫度過(guò)低,⑤等。6.干擾素是一種具有,在臨床上被廣泛用于治療疾病,對(duì)治療乳腺癌、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤和某些白血病等也有一定的療效。7.基因工程菌一般是的菌類。8.利用轉(zhuǎn)基因細(xì)菌不能直接生產(chǎn)糖蛋白類的產(chǎn)品,因?yàn)榧?xì)菌中?！究键c(diǎn)分析】高頻考點(diǎn)1基因工程的相關(guān)工具及技術(shù)真題引領(lǐng)1(2023·新課標(biāo)卷)某同學(xué)擬用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA連接酶為工具,將目的基因(兩端含相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn))和質(zhì)粒進(jìn)行切割、連接,以構(gòu)建重組表達(dá)載體。限制酶的切割位點(diǎn)如圖所示。下列重組表達(dá)載體構(gòu)建方案合理且效率最高的是()。A.質(zhì)粒和目的基因都用酶3切割,用E.coliDNA連接酶連接B.質(zhì)粒用酶3切割、目的基因用酶1切割,用T4DNA連接酶連接C.質(zhì)粒和目的基因都用酶1和酶2切割,用T4DNA連接酶連接D.質(zhì)粒和目的基因都用酶2和酶4切割,用E.coliDNA連接酶連接解題關(guān)鍵分析判斷在獲取目的基因和切割載體時(shí),最好選用同種類的限制酶目的是防止載體或目的基因的黏性末端自身連接、環(huán)化可用處理目的基因和載體E.coliDNA連接酶(從大腸桿菌中分離)和T4DNA連接酶(從T4噬菌體中分離)這兩類酶都能將雙鏈DNA片段“縫合”起來(lái),恢復(fù)被限制酶切開的,但E.coliDNA連接酶不能連接具有的DNA片段標(biāo)記基因的作用便于真題引領(lǐng)2(2024·黑吉遼高考)關(guān)于采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物的實(shí)驗(yàn),下列敘述正確的是()。A.瓊脂糖凝膠濃度的選擇需考慮待分離DNA片段的大小B.凝膠載樣緩沖液中指示劑的作用是指示DNA分子的具體位置C.在同一電場(chǎng)作用下,DNA片段越長(zhǎng),向負(fù)極遷移速率越快D.瓊脂糖凝膠中的DNA分子可在紫外燈下被檢測(cè)出來(lái)真題改編1(2024·山東高考改編)“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的基本過(guò)程是裂解→分離→沉淀→鑒定,下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()。A.裂解可使細(xì)胞破裂,釋放出DNA等物質(zhì)B.研磨液在4℃冰箱中放置幾分鐘后,應(yīng)將上清液倒入燒杯中C.DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同,該原理可用于純化DNA粗提物D.將溶解的DNA粗提物與二苯胺試劑反應(yīng),可檢測(cè)溶液中是否含有蛋白質(zhì)雜質(zhì)真題改編2(2023·浙江6月選考改編)紫外線引發(fā)的DNA損傷,可通過(guò)核苷酸切除修復(fù)(NER)方式(主要用于修復(fù)一些較大的DNA損傷,識(shí)別的是損傷造成的DNA螺旋結(jié)構(gòu)扭曲)修復(fù),機(jī)制如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是()。A.用NER方式修復(fù)DNA損傷時(shí),需要準(zhǔn)確識(shí)別損傷部位的堿基種類B.損傷部位被清除需要用到限制酶C.DNA有害損傷發(fā)生后,在細(xì)胞增殖時(shí)進(jìn)行修復(fù)D.修復(fù)缺損部位和完成連接分別利用DNA聚合酶和DNA連接酶高頻考點(diǎn)2基因工程的基本操作程序及應(yīng)用真題引領(lǐng)3(2023·湖北高考)用氨芐青霉素抗性基因(AmpR)、四環(huán)素抗性基因(TetR)作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒,構(gòu)建基因表達(dá)載體(重組質(zhì)粒),并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述錯(cuò)誤的是()。A.若用HindⅢ酶切,目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同B.若用PvuⅠ酶切,在含Tet(四環(huán)素)培養(yǎng)基中的菌落,不一定含有目的基因C.若用SphⅠ酶切,可通過(guò)DNA凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否D.若用SphⅠ酶切,攜帶目的基因的受體菌在含Amp(氨芐青霉素)和Tet的培養(yǎng)基中能形成菌落真題引領(lǐng)4(2024·山東高考)制備熒光標(biāo)記的DNA探針時(shí),需要模板、引物、DNA聚合酶等。在只含大腸桿菌DNA聚合酶、擴(kuò)增緩沖液、H2O和4種脫氧核苷酸(dCTP、dTTP、dGTP和堿基被熒光標(biāo)記的dATP)的反應(yīng)管①~④中,分別加入如表所示的適量單鏈DNA。已知形成的雙鏈DNA區(qū)遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,且在本實(shí)驗(yàn)的溫度條件下不能產(chǎn)生小于9個(gè)連續(xù)堿基對(duì)的雙鏈DNA區(qū)。能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針的反應(yīng)管有()。反應(yīng)管加入的單鏈DNA①5'-GCCGATCTTTATA-3'3'-GACCGGCTAGAAA-5'②5'-AGAGCCAATTGGC-3'③5'-ATTTCCCGATCCG-3'3'-AGGGCTAGGCATA-5'④5'-TTCACTGGCCAGT-3'A.①②B.②③C.①④D.③④關(guān)鍵信息分析論證1.制備熒光標(biāo)記的DNA探針時(shí),需要等2.在只含大腸桿菌DNA聚合酶、擴(kuò)增緩沖液、H2O和4種脫氧核苷酸(dCTP、dTTP、dGTP和)的反應(yīng)管①~④中,分別加入題表所示的適量單鏈DNA3.已知形成的原則,在本實(shí)驗(yàn)的溫度條件下得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針需滿足的要求有:1.加入的單鏈DNA能形成個(gè)以上的連續(xù)堿基對(duì)。2.雙鏈DNA區(qū)之外的端有模板,可以延伸。3.延伸的DNA部分要有堿基才能產(chǎn)生熒光選項(xiàng)分析論證A1.形成雙鏈DNA區(qū)。

2.延伸。

3.延伸部分的堿基為B1.形成雙鏈DNA區(qū)。

2.延伸。

3.延伸部分的堿基為C1.形成雙鏈DNA區(qū)。

2.延伸。

3.延伸部分的堿基為D1.形成雙鏈DNA區(qū)。

2.延伸。

3.延伸部分的堿基為真題改編3(2023·重慶高考改編)某小組通過(guò)PCR(假設(shè)引物長(zhǎng)度為8個(gè)堿基,短于實(shí)際長(zhǎng)度)獲得了含有目的基因的DNA片段,并用限制酶進(jìn)行酶切(如下圖),再用所得片段成功構(gòu)建了基因表達(dá)載體。下列敘述錯(cuò)誤的是()。A.PCR技術(shù)中用到的一個(gè)引物的前8個(gè)堿基序列為5'-TGCGCAGT-3'B.步驟①所用的酶是NheⅠ和CfoⅠC.可以使用不同于步驟①的酶對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行酶切D.構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)只能使用E.coliDNA連接酶高頻考點(diǎn)3蛋白質(zhì)工程及生物技術(shù)的倫理問(wèn)題真題改編4利用AI(人工智能)破解蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能之謎,建立蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù),并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)和優(yōu)化,會(huì)給未來(lái)蛋白質(zhì)工程的發(fā)展帶來(lái)翻天覆地的變化。關(guān)于該技術(shù)的實(shí)施,下列說(shuō)法正確的是()。A.用AI預(yù)測(cè)新型蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能依據(jù)的原理是中心法則B.可以通過(guò)改造或合成基因來(lái)獲得AI設(shè)計(jì)的蛋白質(zhì)C.根據(jù)設(shè)計(jì)的某種蛋白質(zhì)的氨基酸序列推測(cè)的基因序列中包含啟動(dòng)子和終止子D.用蛋白質(zhì)的氨基酸序列推測(cè)的基因編碼序列是唯一的真題改編5(2023·浙江1月選考改編)人們利用生物技術(shù)對(duì)生物體進(jìn)行不同層次的設(shè)計(jì)、控制、改造或模擬,產(chǎn)生巨大生產(chǎn)力的同時(shí),也帶來(lái)了多種涉及安全和倫理的問(wèn)題。如今,公眾從網(wǎng)絡(luò)和自媒體獲得的相關(guān)信息眾多。請(qǐng)利用生物學(xué)知識(shí)判斷,以下信息合理的是()。A.試管嬰兒技術(shù)應(yīng)全面禁止B.我們要合理利用和開發(fā)生物武器C.消費(fèi)者對(duì)轉(zhuǎn)基因食品有知情權(quán)和選擇權(quán)D.生殖性克隆人能豐富人類基因的多樣性【最新模擬】(1~7,9~11,每題3分,第8題10分,共40分)1.科研人員將寒帶地區(qū)海魚中的抗凍基因轉(zhuǎn)入千禧果細(xì)胞中,成功培育出抗凍千禧果。下圖為培育過(guò)程中使用的Ti質(zhì)粒示意圖,其中Vir區(qū)的基因活化能促進(jìn)T-DNA的加工和轉(zhuǎn)移。下列敘述正確的是()。A.構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),最好選擇限制酶Ⅱ和限制酶Ⅲ來(lái)切割質(zhì)粒B.利用PCR擴(kuò)增抗凍基因時(shí),需提前檢測(cè)抗凍基因的全部堿基序列C.Vir區(qū)的基因活化促進(jìn)抗凍基因整合到千禧果細(xì)胞的染色體DNA上D.利用含卡那霉素的培養(yǎng)基可篩選出成功導(dǎo)入抗凍基因的千禧果細(xì)胞2.DNA分子的堿基具有吸收波長(zhǎng)為260nm光的特性。DNA兩條鏈的堿基緊密連接時(shí),吸光度偏低;兩條鏈分離時(shí),吸光度升高,因此DNA是否變性可通過(guò)DNA溶液對(duì)波長(zhǎng)為260nm光的吸光度來(lái)檢測(cè)。肺炎鏈球菌DNA的變性曲線如圖所示,吸光度達(dá)到最大值的50%時(shí)的溫度稱為熔解溫度(Tm)。下列說(shuō)法正確的是()。A.加熱會(huì)破壞脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵,使DNA變性B.A、T堿基對(duì)所占比例越高的DNA,變性曲線中Tm值越大C.加熱至約70℃時(shí),DNA兩條鏈從一端向另一端逐漸分離D.利用PCR檢測(cè)目的基因時(shí),需要先將DNA變性3.下圖表示構(gòu)建苘麻抗除草劑基因A重組質(zhì)粒的技術(shù)流程,其中NptⅡ是卡那霉素抗性基因,GUS基因僅在真核細(xì)胞中表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物可催化底物呈藍(lán)色。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()。A.利用PCR擴(kuò)增基因A時(shí),可在引物中加入PstⅠ和XhoⅠ的酶切位點(diǎn)B.在培養(yǎng)基中添加卡那霉素可初步篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌C.用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化植物愈傷組織并選擇呈現(xiàn)藍(lán)色的組織進(jìn)行培養(yǎng)D.若啟動(dòng)子為除草劑誘導(dǎo)啟動(dòng)子,則將減少細(xì)胞物質(zhì)和能量的浪費(fèi)4.CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)根據(jù)靶基因序列設(shè)計(jì)向?qū)gRNA,精確引導(dǎo)核酸酶Cas9切割與sgRNA配對(duì)的DNA,相關(guān)酶在修復(fù)斷裂DNA的過(guò)程中會(huì)改變連接部位的堿基序列?？蒲腥藛T通過(guò)刪除編碼PD-1蛋白基因的2、3、4片段造成蛋白質(zhì)的功能缺失,制作PD-1基因敲除鼠的流程如圖1所示,已知P1和P2是PCR的引物。將體外轉(zhuǎn)錄獲得的Cas9mRNA和sgRNA導(dǎo)入小鼠的受精卵中,獲得了12只基因編輯小鼠。利用PCR鑒定小鼠的基因型,電泳結(jié)果如圖2所示。下列相關(guān)分析正確的是()。A.敲除2、3、4片段引起的變異屬于染色體變異B.敲除前,根據(jù)敲除的位置需要設(shè)計(jì)3個(gè)sgRNAC.圖2中,4和12個(gè)體雜交的子代均為敲除純合子D.圖2中,3、5、7個(gè)體的體內(nèi)均能檢測(cè)到PD-15.(改編)科學(xué)家將某病毒抗原蛋白的部分編碼序列(RBD)拼接成融合基因2RBD和3RBD,探究RBD的二聚體蛋白和三聚體蛋白能否模擬RBD的天然構(gòu)象并獲得高效的免疫原性。重組質(zhì)粒構(gòu)建流程如圖1所示,NcoⅠ和SacⅠ是pNZ8149質(zhì)粒上的限制酶識(shí)別位點(diǎn),U-M為信號(hào)肽—細(xì)胞壁錨定蛋白序列。為鑒定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功,將重組質(zhì)粒用NcoⅠ和SacⅠ雙酶切處理后電泳,結(jié)果如圖2所示,其中泳道1表示雙酶切pNZ8149-2RBD的結(jié)果,兩條條帶的大小分別為2507bp和2020bp。將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒分別導(dǎo)入工程菌中進(jìn)行表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)。下列說(shuō)法不正確的是()。A.利用PCR擴(kuò)增融合基因時(shí),在引物的3'端添加相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列B.據(jù)圖可知,融合基因3RBD的長(zhǎng)度為2686bpC.泳道2呈現(xiàn)一條條帶的原因是雙酶切pNZ8149-3RBD后產(chǎn)生的兩個(gè)片段的大小相近D.從工程菌細(xì)胞表面提取蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè),從而進(jìn)一步比較兩者的免疫原性6.(改編)下圖表示基因工程所用質(zhì)粒和部分操作步驟,質(zhì)粒的外側(cè)鏈為a鏈,內(nèi)側(cè)鏈為b鏈。AmpR為氨芐青霉素抗性基因,TetR為四環(huán)素抗性基因,AmpR轉(zhuǎn)錄的模板鏈屬于a鏈的片段。改造后的ALDH2基因編碼區(qū)首端到末端(其中一條鏈)的序列為5'-ATCCATGCGCTC…(中間核苷酸序列)…CAGTGAGTAGCG-3'。四種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)見下表。下列說(shuō)法正確的是()。限制酶BamHⅠPstⅠXhoⅠXbaⅠ識(shí)別序列和切割位點(diǎn)(5'→3')↓GGATCC↓CTGCAG↓CTCGAG↓TCTAGAA.質(zhì)粒復(fù)制的模板鏈?zhǔn)莂鏈和b鏈,TetR轉(zhuǎn)錄的模板鏈?zhǔn)莂鏈的片段B.過(guò)程③是基因工程的核心步驟,過(guò)程④的培養(yǎng)基具有選擇性C.為擴(kuò)增目的基因,需選擇的引物對(duì)為5'-TCTAGACGCTACTCACTG-3'和5'-GGATCCATCCATGCGCTC-3'D.根據(jù)選定的引物,經(jīng)過(guò)5次循環(huán),即可獲得32個(gè)符合要求的目的基因7.(改編)自然界中很少出現(xiàn)藍(lán)色的花,天然藍(lán)色花產(chǎn)生的主要原因是花瓣細(xì)胞液泡中花青素在堿性條件下顯藍(lán)色。我國(guó)科學(xué)家利用鏈霉菌的靛藍(lán)合成酶基因(idgS)及其激活基因(sfp)構(gòu)建基因表達(dá)載體(如下圖,PmeⅠ、BamHⅠ、SpeⅠ、SacⅠ為不同的限制酶),通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入白玫瑰中,在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中形成穩(wěn)定顯色的靛藍(lán)。下列說(shuō)法正確的是()。A.上述獲得藍(lán)色玫瑰的方法中需要轉(zhuǎn)入能調(diào)控液泡pH的基因B.將sfp基因插入Ti質(zhì)粒時(shí)使用的限制酶是PmeⅠ和BamHⅠC.sfp和idgS基因表達(dá)時(shí)分別以T-DNA的不同鏈為模板進(jìn)行轉(zhuǎn)錄D.農(nóng)桿菌可將Ti質(zhì)粒上的T-DNA整合到白玫瑰的細(xì)胞質(zhì)基因組中,以防止基因擴(kuò)散8.(10分)鎘(Cd)作為一種重金屬元素,會(huì)嚴(yán)重威脅人體健康?？蒲腥藛T將Cd響應(yīng)啟動(dòng)子CadR與綠色熒光蛋白基因(EGFP)組合在一起并導(dǎo)入大腸桿菌中,構(gòu)建能夠檢測(cè)環(huán)境中Cd污染的生物傳感器。已知LacZ基因編碼產(chǎn)生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì),使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色,否則菌落為白色。相關(guān)信息如圖所示,其中P1、P2、P3表示引物。限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn):↓↓MunⅠ:5'-CAATTG-3'EcoRⅠ:5'-GAATTC-3'↓↓XhoⅠ:5'-CTCGAG-3'SalⅠ:5'-GTCGAC-3'(1)在構(gòu)建重組質(zhì)粒的過(guò)程中,需要用到E.coliDNA連接酶,該酶的作用是。據(jù)圖分析,應(yīng)選用限制酶切割質(zhì)粒,以保證質(zhì)粒與目的基因高效重組。(2)已知EGFP基因轉(zhuǎn)錄得到的RNA中缺乏起始密碼子AUG。利用PCR獲取EGFP基因時(shí),為保證EGFP基因能正確插入載體且可以正常表達(dá),除選擇引物P1外,還需要選擇引物,并在其5'端增加堿基序列5'--3'。(3)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳可將不同的DNA片段區(qū)分開來(lái),該技術(shù)所依據(jù)的原理是。對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè),結(jié)果顯示除EGFP基因條帶外,還有多條非特異性條帶(由引物和模板不完全配對(duì)導(dǎo)致)。為減少非特異性條帶的產(chǎn)生,可適當(dāng)(填“提高”或“降低”)PCR中復(fù)性過(guò)程的溫度。(4)為篩選出成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的目標(biāo)菌,需要將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種到含有四環(huán)素和X-gal的培養(yǎng)基上,結(jié)果發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)出了藍(lán)色和白色兩種菌落。若需進(jìn)一步鑒定該生物傳感器是否制備成功,需要進(jìn)行的操作是。9.(原創(chuàng))下列有關(guān)DNA的粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)、DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定實(shí)驗(yàn)的敘述,錯(cuò)誤的是()。A.將菜花研磨液放入塑料離心管中,取離心后的上清液放入燒杯中B.在上清液中放入2mol/L的NaCl溶液可代替預(yù)冷的95%酒精析出DNAC.用于DNA片段擴(kuò)增的PCR儀就是一臺(tái)能夠自動(dòng)調(diào)控溫度的儀器D.在凝膠中DNA分子的遷移速率與DNA分子的大小和構(gòu)象均有關(guān)10.(原創(chuàng))α-1抗胰蛋白酶(α-1-AT)的主要作用是保護(hù)機(jī)體的正常細(xì)胞和器官不受蛋白酶的損傷,抑制感染和炎癥,維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。下圖表示限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)、α-1-AT改良基因和質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)。已知通過(guò)乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)α-1-AT,下列敘述錯(cuò)誤的是()。A.應(yīng)選用限制酶EcoRⅤ和BamHⅠ切割質(zhì)粒B.應(yīng)選用E.coliDNA連接酶連接目的基因和質(zhì)粒C.質(zhì)粒上有四環(huán)素抗性基因,有利于重組DNA分子的篩選D.應(yīng)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入動(dòng)物的受精卵,而不是導(dǎo)入乳腺細(xì)胞11.(原創(chuàng))在大腸桿菌中,PpsA和PckA基因分別編碼糖代謝中心途徑的磷酸烯醇式丙酮酸合成酶(PpsA)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PckA),對(duì)苯丙氨酸合成的重要前體物質(zhì)——磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)的積累起關(guān)鍵作用。研究表明,PpsA和PckA基因的串聯(lián)表達(dá)有利于苯丙氨酸生物合成途徑下游產(chǎn)物的生成。研究者擬構(gòu)建高效篩選系統(tǒng),將改進(jìn)的相關(guān)基因(用P1表示)整合到載體4,構(gòu)建載體5,構(gòu)建過(guò)程如下圖所示,再將載體5導(dǎo)入鏈霉素不敏感(由RpsL基因突變?cè)斐?、卡那霉素敏感的受體菌,進(jìn)一步篩選出高產(chǎn)苯丙氨酸的菌株。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()。A.制備載體2的過(guò)程中,應(yīng)選擇引物1和引物4,產(chǎn)物經(jīng)酶切、連接后環(huán)化成載體2B.制備載體2的過(guò)程中應(yīng)該在引物的3'端引入XhoⅠ的識(shí)別序列,并進(jìn)行PCR擴(kuò)增C.PCR擴(kuò)增載體3中篩選效率較高的標(biāo)記基因RpsL時(shí),引物應(yīng)包含XhoⅠ的識(shí)別序列D.為獲得成功導(dǎo)入載體5的菌株,應(yīng)采用含有卡那霉素的平板進(jìn)行初步篩選

參考答案1.DNA可以在同種生物的不同個(gè)體之間轉(zhuǎn)移2.原核生物的DNA分子中不存在該酶的識(shí)別序列或識(shí)別序列已經(jīng)被修飾3.PCR反應(yīng)緩沖液一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸20~30個(gè)核苷酸4.將Ti質(zhì)粒上的T-DNA(可轉(zhuǎn)移的DNA)轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞,并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上5.TaqDNA聚合酶出現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題引物特異性不強(qiáng)(如與非目的基因的核苷酸序列有同源性)或形成引物二聚體PCR循環(huán)次數(shù)過(guò)多6.干擾病毒復(fù)制作用的糖蛋白病毒感染性7.用基因工程的方法,使外源基因得到高效表達(dá)8.只有核糖體,沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等其他細(xì)胞器真題引領(lǐng)1C解題思路使目的基因和載體具有相同的黏性末端不同的限制酶磷酸二酯鍵平末端重組DNA分子的篩選真題引領(lǐng)2A解析對(duì)于較大的DNA片段,如基因組DNA或質(zhì)粒DNA,通常選擇較低濃度的瓊脂糖凝膠,因?yàn)樗鼈冃枰蟮目讖絹?lái)有效遷移,而對(duì)于較小的DNA片段,如PCR產(chǎn)物或酶切片段,通常選擇較高濃度的瓊脂糖凝膠,以提供更好的分辨率和分離效果,A正確;凝膠載樣緩沖液指示劑通常是一種顏色較深的染料,可以作為電泳進(jìn)度的指示分子,B錯(cuò)誤;在瓊脂糖凝膠電泳中,當(dāng)電場(chǎng)作用時(shí),DNA片段向正極遷移,而非負(fù)極,此外,DNA片段的遷移速率與其大小成反比,即DNA片段越長(zhǎng),其遷移速率越慢,C錯(cuò)誤;瓊脂糖凝膠中的DNA分子通過(guò)染色,才可以在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來(lái),D錯(cuò)誤。真題改編1.D解析在沸水浴的條件下,DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色,因此二苯胺試劑可用于鑒定DNA,D錯(cuò)誤。真題改編2A解析NER方式識(shí)別的是損傷造成的DNA螺旋結(jié)構(gòu)扭曲,用該方式修復(fù)DNA損傷時(shí),不需要準(zhǔn)確識(shí)別損傷部位的堿基種類,A錯(cuò)誤;修復(fù)過(guò)程中需要將損傷部位的序列切斷,因此需要限制酶參與,B正確;DNA有害損傷發(fā)生后,在細(xì)胞增殖時(shí)進(jìn)行修復(fù)以保證DNA復(fù)制的正確進(jìn)行,C正確。真題引領(lǐng)3D解析若用HindⅢ酶切,目的基因可能正向插入,也可能反向插入,轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同,A正確;若用PvuⅠ酶切,重組質(zhì)粒和質(zhì)粒中都有四環(huán)素抗性基因,因此在含Tet的培養(yǎng)基中的菌落不一定含有目的基因,B正確;重組質(zhì)粒與質(zhì)粒的DNA片段大小不同,而DNA凝膠電泳技術(shù)可以用于分離不同大小的DNA片段,故DNA凝膠電泳技術(shù)能夠用于鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否,C正確;SphⅠ的酶切位點(diǎn)位于四環(huán)素抗性基因中,若用SphⅠ酶切,重組質(zhì)粒中僅含氨芐青霉素抗性基因,因此攜帶目的基因的受體菌在含Amp的培養(yǎng)基中能形成菌落,在含Tet的培養(yǎng)基中不能形成菌落,D錯(cuò)誤。真題引領(lǐng)4D解題思路模板、引物、DNA聚合酶堿基被熒光標(biāo)記的dATP雙鏈DNA區(qū)遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)不能產(chǎn)生小于9個(gè)連續(xù)堿基對(duì)的雙鏈DNA區(qū)93'A能無(wú)法無(wú)能能TCT能能TAT和TAA能能GAA和AAG真題改編3D解析引物只能引導(dǎo)子鏈由5'端→3'端延伸,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,其中一個(gè)引物的堿基序列為5'-TGCGCAGT-3',A正確;根據(jù)三種酶的酶切位點(diǎn),題圖中的黏性末端是使用NheⅠ和CfoⅠ切割形成的,B正確;步驟①中使用NheⅠ和CfoⅠ對(duì)目的基因進(jìn)行酶切,獲得了相應(yīng)的黏性末端,可以使用與這兩種酶不同的酶對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行切割,只要形成的黏性末端與步驟①的酶切形成的黏性末端相同即可構(gòu)建重組質(zhì)粒,C正確;題圖中形成的是黏性末端,E.coliDNA連接酶和T4DNA連接酶都可連接黏性末端,因此兩種DNA連接酶都可以使用,D錯(cuò)誤。真題改編4B解析AI對(duì)新型蛋白質(zhì)的預(yù)測(cè)應(yīng)從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā),設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),A錯(cuò)誤;對(duì)蛋白質(zhì)的改造是通過(guò)改造或合成基因來(lái)完成的,B正確;啟動(dòng)子和終止子為非編碼區(qū),故由氨基酸序列推測(cè)的基因序列中不包含啟動(dòng)子和終止子,C錯(cuò)誤;因?yàn)橐环N氨基酸可能對(duì)應(yīng)多種密碼子,所以用蛋白質(zhì)的氨基酸序列推測(cè)的RNA編碼序列有多種可能,對(duì)應(yīng)的基因編碼序列就有多種可能,D錯(cuò)誤。真題改編5C解析我國(guó)政府一再重申四不原則:不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)。我國(guó)政府同樣重視治療性克隆所涉及的倫理問(wèn)題,主張對(duì)治療性克隆進(jìn)行有效監(jiān)控和嚴(yán)格審查,A、D不合理。中美兩國(guó)元首在關(guān)于《禁止生物武器公約》議定書的聯(lián)合聲明中,重申了在任何情況下不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲(chǔ)存生物武器,并反對(duì)生物武器及其技術(shù)和設(shè)備的擴(kuò)散,所以不允許利用和開發(fā)生物武器,B不合理。1.C解析使用限制酶Ⅱ會(huì)破壞Vir區(qū)的基因,Vir區(qū)的基因是T-DNA整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上必不可少的,不能選擇限制酶Ⅱ來(lái)切割質(zhì)粒,A錯(cuò)誤;利用PCR擴(kuò)增抗凍基因時(shí),只需要知道抗凍基因兩端的堿基序列,并據(jù)此設(shè)計(jì)引物,B錯(cuò)誤;農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞后,能將Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞,并將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上,所以Vir區(qū)的基因活化可促進(jìn)抗凍基因整合到千禧果細(xì)胞的染色體DNA上,C正確;在添加了四環(huán)素的培養(yǎng)基中可以篩選出成功導(dǎo)入抗凍基因的千禧果細(xì)胞,D錯(cuò)誤。2.D解析加熱會(huì)使DNA分子互補(bǔ)堿基對(duì)之間的氫鍵斷裂,導(dǎo)致DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)疏散,雙鏈解開成單鏈,從而發(fā)生DNA變性,A錯(cuò)誤;A、T堿基對(duì)間有兩個(gè)氫鍵,C、G堿基對(duì)間有三個(gè)氫鍵,故A、T堿基對(duì)所占比例越高的DNA,變性時(shí)需要的溫度越低,即變性曲線中Tm值越小,B錯(cuò)誤;加熱至約70℃時(shí),DNA兩條鏈同時(shí)分離,C錯(cuò)誤。3.C解析由題圖可知,構(gòu)建的重組質(zhì)粒中無(wú)GUS基因,故轉(zhuǎn)化時(shí)不會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色的組織,C錯(cuò)誤;若啟動(dòng)子為除草劑誘導(dǎo)啟動(dòng)子,表達(dá)后具有除草劑的功能,則將減少細(xì)胞物質(zhì)和能量的浪費(fèi),D正確。4.C解析分析圖1可知,將野生型基因內(nèi)部的部分堿基對(duì)剪切,改變的是基因內(nèi)部的堿基序列,該變異屬于可遺傳變異中的基因突變,A錯(cuò)誤;分析圖1可知,需要將基因的2、3、4共3個(gè)片段切除,需要設(shè)計(jì)片段2和片段4的2個(gè)sgRNA,B錯(cuò)誤;基因敲除后,其核苷酸數(shù)量減少,電泳時(shí)移動(dòng)速度快,距離點(diǎn)樣孔遠(yuǎn),4和12個(gè)體均為敲除純合子,C正確;3個(gè)體的基因未敲除,5個(gè)體為敲除雜合子,7個(gè)體為敲除純合子,因此3和5個(gè)體的體內(nèi)均能檢測(cè)到PD-1,7個(gè)體的體內(nèi)檢測(cè)不到PD-1,D錯(cuò)誤。5.A解析在DNA聚合酶的作用下,引物的3'端開始連接脫氧核苷酸,利用PCR擴(kuò)增融合基因時(shí),應(yīng)在引物的5'端添加相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列,A不正確;由題意可知,pNZ8149-2RBD和pNZ8149-3RBD的堿基對(duì)數(shù)目分別為4527bp和5193bp,所以RBD的長(zhǎng)度為5193-4527=666bp,由圖1可知,泳道1表示雙酶切pNZ8149-2RBD的結(jié)果,兩條條帶的大小分別為2507bp和2020bp,質(zhì)粒pNZ8149的長(zhǎng)度要大于2RBD,則2RBD的長(zhǎng)度為2020bp,所以融合基因3RBD的長(zhǎng)度為666+2020=2686bp,B正確。6.C解析質(zhì)粒的a和b兩條鏈都作為模板鏈進(jìn)行復(fù)制,TetR的轉(zhuǎn)錄方向與AmpR的轉(zhuǎn)錄方向相反,說(shuō)明TetR轉(zhuǎn)錄的模板鏈和AmpR轉(zhuǎn)錄的模板鏈不在一條鏈上,AmpR轉(zhuǎn)錄的模板鏈屬于a鏈的片段,則TetR轉(zhuǎn)錄的模板鏈屬于b鏈的片段,A錯(cuò)誤。過(guò)程②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建,是基因工程的核心步驟;過(guò)程④表示目的基因的檢測(cè)與鑒定,所以該過(guò)程中的培養(yǎng)基具有鑒定作用,B錯(cuò)誤。擴(kuò)增目的基因需要兩種引物,它們分別與目的基因兩條鏈的3'端通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合,根據(jù)改造后的ALDH2基因編碼區(qū)首端到末端的序列以及引物5'端需要添加BamHⅠ、XbaⅠ的識(shí)別序列可推測(cè),需要選擇的引物對(duì)為5'-TCTAGACGCTACTCACTG-3'和5'-GGATCCATCCATGCGCTC-3',C正確。根據(jù)DNA半保留復(fù)制的特點(diǎn)和PCR反應(yīng)原理可知,經(jīng)過(guò)前2次循環(huán)無(wú)法得到符合要求的目的基因,經(jīng)過(guò)第3次循環(huán)可以得到等長(zhǎng)雙鏈,這樣的雙鏈DNA分子兩端的兩條鏈均有限制酶的識(shí)別序列,經(jīng)過(guò)3次循環(huán)可以獲得2個(gè)符合要求的目的基因,經(jīng)過(guò)4次循環(huán)可以獲得8個(gè)符合要求的目的基因,以此類推,要經(jīng)過(guò)6次循環(huán)才可獲得32個(gè)符合要求的目的基因,D錯(cuò)誤。7.C解析由題意可知,靛藍(lán)能夠穩(wěn)定顯色,不受pH的影響,故題述方法中無(wú)須轉(zhuǎn)入能調(diào)控液泡pH的