T-CVMA 170-2024 口蹄疫病毒O型磁微?；瘜W(xué)發(fā)光抗體檢測(cè)

T/CVMA170—2024口蹄疫病毒O型磁微?；瘜W(xué)發(fā)光抗體檢測(cè)MagneticparticlechemiluminescentimmunoassaydetectionofantibodiesagainstfootandmouthdiseasevirustypeO2024-7-4發(fā)布2024-7-4實(shí)施中國(guó)獸醫(yī)協(xié)會(huì)發(fā)布I本文件由洛陽(yáng)現(xiàn)代生物技術(shù)研究院有限公司技有限公司、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)、河南科技大學(xué)、中山市動(dòng)物1本文件適用于豬、牛、羊等動(dòng)物血清中口蹄疫病毒O型抗體的檢測(cè)2規(guī)范性引用文件NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范CLIA：化學(xué)發(fā)光免疫分析（ChemiluminescenceimmunoFMDV-O：口蹄疫病毒O型（FootandMouthDiseaseVirusTypeO）RLU：相對(duì)光單位發(fā)光值（RelativeLightUnit）carbodiimidehydrochlori2本文件采用磁微粒化學(xué)發(fā)光——競(jìng)爭(zhēng)法原理，用口蹄疫病毒O型VP1重組蛋白包被磁微粒，酶標(biāo)單克隆抗體與待檢樣品中的抗體競(jìng)爭(zhēng)性的與包被抗原結(jié)合，通過抗原抗體反應(yīng)，形成抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物、抗原-待測(cè)抗體復(fù)合物；抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物催化發(fā)光底物液發(fā)出光子形成發(fā)光值（RLU其發(fā)毒O型抗體水平，比值越大，說明樣本中口蹄疫病毒O型抗體水平越低；比值越小，說明樣本中口蹄疫6.1包被磁微?；鞈乙?，按照附錄A制按照NY/T541中規(guī)定進(jìn)行樣本的采集與處理，期間做好個(gè)人防護(hù)。按常規(guī)方法抽取2mL～3按照NY/T541中規(guī)定進(jìn)行血清樣本的存放與運(yùn)輸。血清樣本若在一周內(nèi)檢測(cè)，置2℃~8℃條件下保存。若超過一周檢測(cè)，置于-20℃以下冷凍保存。運(yùn)將待檢樣品從2℃~8℃或-20℃冰箱取出，靜置至室溫。3參照磁微?；瘜W(xué)發(fā)光儀器系統(tǒng)操作說明，設(shè)置儀器參數(shù)，將分裝有1×洗滌液、酶結(jié)合物、發(fā)光底物A液和發(fā)光底物B液的試劑瓶分別插入儀器相應(yīng)孔。開機(jī)自檢，待儀器自檢、管路清洗1次、底物灌注b）加磁微?；鞈乙骸Ｃ靠追謩e加入磁微?；鞈乙?0μL。9試驗(yàn)成立條件S/N=待測(cè)樣本發(fā)光值/陰性對(duì)照孔平均發(fā)光值。S/N≤0.8為口蹄疫病毒O型抗體陽(yáng)性；S/N＞0.8，為口4取1mL磁微粒原液進(jìn)行磁分離至上清澄清，棄去上清；移液器移取1mL加入1mL4mg/mLEDC活化劑溶液，蓋緊瓶蓋/容器封口，室溫條件下?lián)u床溫育反應(yīng)60min。A.2洗滌將反應(yīng)容器進(jìn)行磁分離至上清澄清，棄去上清；移液器移取4mL包被緩沖液加入反應(yīng)容器內(nèi)，以A.3包被先加入10mL包被緩沖液，將反應(yīng)容器內(nèi)的磁微粒以100r/min攪拌5min，口蹄疫病毒O型VP1重組蛋白。蓋緊瓶蓋/容器封口，2℃~8℃條件下?lián)u床反應(yīng)120min。A.4封閉將反應(yīng)容器進(jìn)行磁分離至上清澄清，棄去上清；移液器移取4mL磁微粒洗滌液加入反應(yīng)容器內(nèi)；應(yīng)容器內(nèi)；以100r/min混合15min，最終進(jìn)行磁分離至上清澄清，棄去上清。A.5儲(chǔ)存量取磁微粒保存液100mL加入反應(yīng)容器內(nèi)，以100r/m5脂紅色素，攪拌均勻，經(jīng)0.22μm濾膜過濾除菌，無菌定量分裝，置2℃~8℃保存。稱取24.23gTris（三羥甲基氨基甲烷）溶于80稱取15.42g乙酸銨溶于800mL純水中，使用乙酸調(diào)p60.22μm濾膜過濾除菌后，按血清量的0.1%加入Proclin300對(duì)照，置2℃~8℃保存?zhèn)溆?。性。頸靜脈采血，分離血清，經(jīng)56℃水浴滅活30min后，按血清量的0.1%加入Proclin3