梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

PAGEPAGE6醫(yī)院檢驗科免疫室梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁檢驗申請單獨檢驗項目申請：梅毒螺旋體抗體（縮寫TPELISA）測定。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。標(biāo)本采集與處理2.1標(biāo)本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中，或采用含分離膠的真空采血管。也可采集血漿，用肝素、EDTA或枸櫞酸鹽抗凝。2.1.2檢驗申請單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識符。2.1.3急診標(biāo)本采集后，在檢驗申請單上填寫標(biāo)本采集時間。2.1.4標(biāo)本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對檢測結(jié)果可能有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。2.1.5.3無法確認(rèn)標(biāo)本與申請單對應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4其他如標(biāo)識涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.2標(biāo)本保存2.2.1接收標(biāo)本后在置1-2h后將標(biāo)本離心分離出血清或血漿，避免溶血。離心必須達(dá)到3000rpm15min，離心后的血清中不能含有顆粒物和微量纖維蛋白。2.2.2標(biāo)本保存時間：室溫（15-25℃）下可穩(wěn)定48h，普通冰箱中（2-8℃）穩(wěn)定7d，在-20℃最多可保存4周。避免反復(fù)凍融。不可使用熱滅活的標(biāo)本。2.2.3已完成測試的標(biāo)本保持完整的識別號，置4-8℃冰箱內(nèi)保存7d。2.3標(biāo)本采集的注意事項采血前使受檢者保持平靜、松弛，避免劇烈活動。醫(yī)院檢驗科免疫室梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁3．方法原理本試劑盒用梅毒螺旋體抗原包被反應(yīng)板，用梅毒螺旋體抗原標(biāo)記辣根過氧化物酶，應(yīng)用雙抗原夾心法原理，檢測人血清或血漿樣本中的梅毒螺旋體抗體。4．試劑及其他用品4.1試劑：梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒，由上?？迫A生物技術(shù)有限公司出品，試劑盒藥品批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字S20010057(96人份)。未打開的試劑盒保存于2-8℃，不可凍存。微孔反應(yīng)板打開包裝后，應(yīng)立即將未試用的板條裝入有干燥劑的自封袋中密封，置2-8℃避光保存。未使用完的酶結(jié)合物、陽性對照、陰性對照、洗滌液、顯色劑A、顯色劑B和終止液，在沒有其他試劑污染的情況下，保存于原試劑瓶，并擰緊瓶蓋，置2-8℃中避光保存，可使用至標(biāo)簽標(biāo)識有效期。4.2試劑盒組分微孔反應(yīng)板陰性對照陽性對照酶結(jié)合物顯色劑A顯色劑B終止液洗滌液（蒸餾水1：25稀釋）說明書封片4.3其他試劑及用品加液器：型號。離心機(jī)：型號。溫箱（或水浴箱）：型號。洗板機(jī)：型號。酶標(biāo)儀：型號。5．室內(nèi)質(zhì)控與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則醫(yī)院檢驗科免疫室梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁5.1質(zhì)控品：采用衛(wèi)生部臨床檢驗中心臨床免疫室免疫質(zhì)控血清，濃度mIU/ml。5.2質(zhì)控品重建方法：采購來的質(zhì)控品按每周用量分裝-20℃凍存，復(fù)融后充分顛倒混勻。5.3質(zhì)控品測定：在每一次（板）標(biāo)本中測定質(zhì)控血清。5.4質(zhì)控規(guī)則：繪制質(zhì)控圖，求出SD和CV值。6．標(biāo)本檢測步驟（1）洗滌液配制：將濃縮洗滌液用蒸餾水（或去離子水）作1：25稀釋。（2）加樣：加入100μl待測樣本和陰、陽性對照于反應(yīng)孔中（共預(yù)留5孔做為對照孔，建議設(shè)陰性對照3孔、陽性對照1孔、顯色劑空白對照1孔，用戶也可自行調(diào)整。）。用封片覆蓋反應(yīng)板后，將反應(yīng)板置37℃孵育60分鐘。（3）洗板手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置30-60秒，甩干，重復(fù)5次后，在干凈的吸水紙是上拍干。洗板機(jī)洗板：采用洗板機(jī)洗板，選擇洗滌5次程序，用配置的工作濃度洗滌液注滿每孔，每次工作濃度洗滌液在反應(yīng)微孔中的停留時間為30-60秒，并確保每次吸凈無殘留，洗完后在干凈的吸水紙上拍干。（4）在已加入待測樣本和陰、陽性對照的孔中加入100μl酶結(jié)合物。混勻，用封片紙覆蓋反應(yīng)板，置37℃孵育30分鐘。（5）重復(fù)操作步驟（3）。（6）顯色：每孔加顯色劑A液、B液各50微升，充分混勻后封板，置37℃孵育30醫(yī)院檢驗科免疫室梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁 分鐘。（7）終止：在所有孔內(nèi)加入50μl終止液，振蕩反應(yīng)板5秒鐘，使之充分混勻。（8）比色：使用酶標(biāo)儀，波長450nm。（建議使用雙波長的酶標(biāo)儀比色，參考波長630nm或630相近的波長。若需扣除顯色劑空白，則先用顯色劑空白對照孔校零，然后讀取各孔OD值。）比色須在10分鐘內(nèi)完成。7．結(jié)果判斷：Cutoff值計算：COV=陰性對照平均OD值+0.100當(dāng)S≥COV，說明該待測樣本梅毒螺旋體抗體結(jié)果為陽性。當(dāng)S＜COV，說明該待測樣本梅毒螺旋體抗體結(jié)果為陰性。8．檢驗結(jié)果的報告及范圍8.1結(jié)果的報告8.1.1結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報告。8.1.2報告單上標(biāo)明結(jié)果的參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的信息。8.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報告單上指出。8.2臨界值：對臨界值標(biāo)本或陽性標(biāo)本再以雙孔重復(fù)試驗確定它的結(jié)果。如果重復(fù)檢測都是臨界性結(jié)果的標(biāo)本建議對其進(jìn)行跟蹤檢測。9．操作性能9.1從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒需平衡至室溫后方可使用，余者應(yīng)按前述方法保存和使用。在平衡試劑的同時，待測樣本需平衡至室溫后再行測試。9.2使用前試劑應(yīng)搖勻。醫(yī)院檢驗科免疫室梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁9.3顯色過程必須封片。所有封片紙不能重復(fù)使用。9.4結(jié)果判斷須在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。9.5不同批號的試劑不可混用。9.6洗板機(jī)洗板時應(yīng)時常檢查加液頭，確保其暢通無堵塞；洗板時所用的吸水紙請勿反復(fù)使用。洗板機(jī)的管路用純化水沖洗，以防堵塞和腐蝕。9.7本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。10．參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平陰性結(jié)果：提示沒有檢測到梅毒螺旋體特異性抗體。11．臨床意義11.1檢測血清中梅毒特異性抗體11.2晚期梅毒，梅毒螺旋體轉(zhuǎn)陰，反應(yīng)素反應(yīng)也常減退或轉(zhuǎn)陰，只有特異性梅毒血清反應(yīng)。11.3對于特異性抗體反應(yīng)，晚期梅毒和梅毒治愈后仍保持陽性，IgG抗體在體內(nèi)持續(xù)存在。12．結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項目的聯(lián)系12.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗結(jié)果的審核。12.2審核者認(rèn)真審核每