重組人白細胞介素-2課件

重組人白細胞介素-2

RecombinantHumanInterleukin-2重組人白細胞介素-2白細胞介素定義1.由白細胞分泌的一類調節(jié)細胞生長、分化和免疫活性的細胞因子。（狹義）2.一組由多種類型細胞所分泌的、結構和功能各異的可溶性蛋白，參與細胞間信息交換，目前已發(fā)現(xiàn)IL-1~IL-33。（廣義）3.一般具有多來源、多功能和多作用途徑的特點。其立體結構有β三葉草型、4-螺旋束型和β三明治型等。信號轉導方式有胞外因子-受體復合體相互作用和胞內信號傳遞途徑等。其中白細胞介素-2是最常用的重組人白細胞介素-2白細胞介素-2的結構天然hIL-2是一種糖蛋白，pI在6.6~8.2。成熟的IL-2分子由133個氨基酸殘基組成，蛋白鏈中有三個半胱氨酸殘基(Cys)，位于第58、105和125位。58位和105位Cys殘基結合形成二硫鍵，使肽鏈折疊，125位Cys殘基游離。若125位游離的Cys殘基突變?yōu)镾er或Ala時，仍具有生物活性，且不會與第58位Cys殘基形成錯誤二硫鍵，增加了IL-2的穩(wěn)定性，同時也消除了由第125Cys殘基造成的二聚體，但是這樣IL-2容易產(chǎn)生抗體。IL-2肽鏈折疊后才呈現(xiàn)活性，直鏈是無活性的，正確的二硫鍵對于IL-2活性的保持是必需的，但糖基化卻與活性無關。重組人白細胞介素-2主要內容一、作用用途二、藥物信息三、生產(chǎn)制備四、注意事項五、發(fā)展前景重組人白細胞介素-2一、作用用途為多肽類免疫增強劑，是一種淋巴因子。刺激B細胞增殖分化和分泌抗體，也用于先天或后天免疫缺陷癥的治療。誘導干擾素和多種細胞因子的分泌用于腫瘤輔助治療和癌性胸、腹水的治療。也可各種自身免疫病的治療，如類風濕性關節(jié)炎等。對乙型肝炎、麻風病、肺結核、白色念珠菌感染等具有一定的治療作用。重組人白細胞介素-2二、藥物信息藥典中有以下三種藥物含有重組人白細胞素介素-2：注射用重組人白細胞介素-2重組人白細胞介素-2注射液注射用重組人白細胞介素-2（

Ⅰ）重組人白細胞介素-2注射用重組人白細胞介素-21.性狀及功效高效表達人白細胞介素-2的大腸桿菌，經(jīng)過發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的重組人白細胞介素-2凍干制成，含有適宜穩(wěn)定劑，不含添加劑和抗生素。外觀為白色或者微黃色疏松體，加滅菌注射水后迅速溶解為澄明液體。用于治療成人轉移性腎細胞癌（RCC）及黑色素瘤等惡性腫瘤，也適用于癌性胸腹水的控制重組人白細胞介素-22.用法用量（1）.全身用藥靜脈滴注：10萬一80萬國際單位；皮下注射：50萬—100萬國際單位；介入動脈灌注：40萬—l00萬國際單位重組人白細胞介素-22.用法用量（2）.區(qū)域與局部給藥

胸腹腔注射：30萬—l00萬國際單位；腫瘤灶局部給藥：根據(jù)瘤體大小決定用藥劑量。一般劑量為一次20萬國際單位(IU)。注：藥物采用氯化鈉溶解。重組人白細胞介素-2重組人白細胞介素-2注射液1.性狀及功效(1).性狀高效表達人白細胞介素-2的大腸桿菌，經(jīng)過發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的重組人白細胞介素-2制成，含有適宜穩(wěn)定劑，不含添加劑和抗生素。外觀為無色或者微黃色澄明液體。重組人白細胞介素-2(2).功效1.用于腎細胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直腸癌、淋巴癌、肺癌等惡性腫瘤的治療，用于癌性胸腹水的控制，也可以用于淋巴因子激活的殺傷細胞的培養(yǎng)。2.用于手術、放療及化療后的腫瘤患者的治療，可增強機體免疫功能。3.用于先天或后天免疫缺陷癥的治療，提高病人細胞免疫功能和抗感染能力。4.各種自身免疫病的治療，如類風濕性關節(jié)炎等。5.對某些病毒性、桿菌性疾病、胞內寄生菌感染性疾病，如乙型肝炎、麻風病、肺結核等具有一定的治療作用。重組人白細胞介素-22.用法用量（1）.全身用藥：1)皮下注射：重組人白介素-2（125Ala）60－100萬IU/m2，皮下注射3次/周，6周為一療程。2)靜脈注射：40～80萬U/m2加生理鹽水500ml，滴注時間不少于4小時。3)介入動脈灌注50～100萬IU/次，2～4周一次，2～4次為一療程。重組人白細胞介素-22.用法用量(2).區(qū)域與局部用藥：1)胸腔注入：用于癌性胸腔積液，重組人白介素－2（125Ala）100～200萬IU/m2次，盡量抽去腔內積液后注入。2)腫瘤病灶局部給藥：根據(jù)瘤體大小決定用藥劑量，每次用量不少于10萬IU，隔日一次,4～6次為一療程。

重組人白細胞介素-2注射用重組人白細胞介素-2（

Ⅰ）1.性狀及功效高效表達人白細胞介素-2（

Ⅰ）基因的大腸桿菌，經(jīng)過發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的重組人白細胞介素-2（

Ⅰ）凍干制成，含有適宜穩(wěn)定劑，不含添加劑和抗生素。外觀為白色或者微黃色疏松體，加滅菌注射水后迅速溶解為澄明液體。人白細胞介素-2（

Ⅰ）基因是人白細胞介素-2基因序列中原125位編碼半胱氨酸的序列突變?yōu)榫幋a絲氨酸的序列后的突變基因重組人白細胞介素-22.用法用量1.全身用藥：1)皮下(或肌肉)注射：重組人白介素-2(Ⅰ)20-100萬國際單位/次，加2毫升無菌生理鹽水溶解，皮下(或肌肉)注射，1-2次/天。2)靜脈注射：60-200萬國際單位/次，加無菌生理鹽水500毫升，滴注時間不少于4小時。3)介入動脈灌注：100-200萬國際單位/次。重組人白細胞介素-22.用法用量2.區(qū)域與局部給藥：1)胸腹腔注入：用于癌性胸腹腔積液，重組人白介素-2(Ⅰ)100-300萬國際單位/次，盡量抽去腔內積液后注入，2-3次/周。2)心包積液：心包內注射，200萬國際單位/次，盡量抽去心包積液后注入，1次/周。3)腫瘤病灶局部給藥：根據(jù)瘤體大小決定用藥劑量，10-20萬國際單位/次，隔日一次。重組人白細胞介素-2三、生產(chǎn)制備生產(chǎn)制備的方式主要有兩種：1、傳統(tǒng)工藝制備2、基因工程制備其中以第二種方法為主重組人白細胞介素-2傳統(tǒng)工藝流程雞瘟病毒，PHA,培養(yǎng)液[啟動誘生]37℃人白細胞粉誘生白細胞培養(yǎng)液[滅活病毒，分離],HCl,NaOHpH=2~2.5,pH=7.2~7.4,離心上清液35%硫酸銨4℃，24h，離心上清液85%硫酸銨4℃，24h，離心沉淀10mmol/LPBS透析pH=6.5，24h透析內液[親和層析]上Sepharose柱pH=6.5親和載體I[洗滌]0.4mol/LNaCl，PBSpH=6.5親和載體Ⅱ[吸收]1.0mol/LNaCl,PBS透析pH=6.5IL-2組分[凝膠層析]上Utrogel柱pH=6.5凝膠載體0.2mol/Ltris-HCl含0.1%PEG2%正丁醇，0.2mol/L甘氨酸pH=7.6IL-2重組人白細胞介素-2cDNA文庫的構建IL-2mRNA逆轉錄酶逆轉錄成單鏈cDNA末端脫氧核苷酸轉移酶cDNA末端連接dCMP殘基，寡聚（dG）12~18為引物DNA聚合酶I雙鏈cDNA蔗糖密度梯度離心cDNA片段G-C加尾法插入到pBR322質粒的PstI位點重組質粒轉化大腸桿菌得到IL-2cDNA文庫重組人白細胞介素-2基因工程制備流程IL-2cDNA文庫的構建IL-2表達利用mRNA雜交篩選IL-2cDNA克隆與質粒載體pLY-4連接，并轉入大腸桿菌純化的IL-2制備包涵體，并用凝膠過濾層析純化重組人白細胞介素-2四、注意事項不良反應：各種不良反應中最常見的是發(fā)熱、畏寒、疲乏等，多與用藥劑量有關；個別患者可出現(xiàn)惡心、嘔吐、類感冒癥狀；皮下注射者局部可出現(xiàn)紅腫、硬結、疼痛；使用較大劑量時，可能會引起毛細血管滲漏綜合征，表現(xiàn)為低血壓、末梢水腫等。神經(jīng)系統(tǒng)受到影響，可發(fā)生行為變化、認知障礙重組人白細胞介素-2四、注意事項禁忌：1、對本品成份有過敏史的病人。2、嚴重低血壓者、心腎功能不全者、高熱者、肺功能異?；蜻M行過器官移植者。3、重組人白細胞介素-2既往用藥史中出現(xiàn)過與之相關的毒性反應。重組人白細胞介素-2五、發(fā)展前景1.目前研究是對其在用藥前進行化學修飾，主要采用PEG修飾：1).具體有三聚氯氰活MPEG修飾2).MPEG硝基苯基碳酸鹽修飾。3).修飾物和rhlu-2的投入比、反應環(huán)境的PH、修飾反應的時間、1%PEG4000的加入都會影響到修飾產(chǎn)物的活性。重組人白細胞介素-2五、發(fā)展前景修飾后的產(chǎn)物經(jīng)過疏水層析和凝膠過濾即可被提純。其水溶性也得到極大提高，可不用

SDS助溶在常溫下保持長期穩(wěn)定。目前已經(jīng)證明rhIL-2經(jīng)不同的

PEG化處理后，其循環(huán)半衰期均有不同程度的提高，重組人白細胞介素-2發(fā)展前景2.IL-2融合蛋白已經(jīng)成為IL-2研究的熱門方向。采用基因重組融合蛋白的方式獲得IL-