《甘薯中 13 種類胡蘿卜素單體物質(zhì)含量的測定》

ICS

CCS

團體標準

T/GDNBXXXX—2023

甘薯中13種類胡蘿卜素單體物質(zhì)含量的測

定

Determinationof13carotenoidsinsweetpotato

（征求意見稿）

在提交反饋意見時，請將您知道的相關專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

廣東省農(nóng)業(yè)標準化協(xié)會??發(fā)布

T/GDNBXXXX—2023

甘薯中13種類胡蘿卜素單體物質(zhì)含量的測定

1范圍

本文件規(guī)定了甘薯及其制品中13種類胡蘿卜素單體物質(zhì)含量測定原理、試劑和材料、儀器設備、樣

品制備、提取方法、檢測條件、精密度、檢出限和定量限。

本文件適用于甘薯、甘薯粉、甘薯干制品中13種類胡蘿卜素單體物質(zhì)（紫黃質(zhì)，新黃質(zhì)，環(huán)氧玉米

黃質(zhì)，葉黃素，玉米黃質(zhì)，α-隱黃質(zhì)，ε-胡蘿卜素，β-隱黃質(zhì)，α-胡蘿卜素，β-胡蘿卜素，δ-胡蘿卜素，

γ-胡蘿卜素，番茄紅素）含量檢測。

2規(guī)范性引用文件

本文沒有規(guī)范性引用文件。

3術語和定義

本文件沒有需要界定的術語和定義。

4原理

試樣冷凍干燥打粉之后，用乙醇-丙酮-正己烷混合液提取其中的13種類胡蘿卜素，干燥后用甲基叔

丁基醚溶液復溶，超高效液相色譜法測定，外標法定量。

5試劑和材料(正文標題)

試劑

5.1.1甲醇（CH4O）:色譜純。

5.1.2乙腈（C2H3N）:色譜純。

5.1.3甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3,MTBE]:色譜純。

5.1.42,6-二叔丁基對甲酚（C15H24O，BHT）:色譜純。

5.1.5甲酸（CH2O2）:色譜純。

5.1.6無水乙醇（C2H5OH）:分析純。

5.1.7丙酮（C3H6O）:分析純

5.1.8正己烷（C6H14）:色譜純。

標準品

5.2.1α-胡蘿卜素（C40H56，CAS號：7488-99-5）：純度≥97%。

5.2.2β-胡蘿卜素（C40H56，CAS號：7235-40-7）：純度≥95%。

5.2.3γ-胡蘿卜素（C40H56，CAS號：472-93-5）：純度≥96%。

5.2.4δ-胡蘿卜素（C40H56，CAS號：472-92-4）：純度≥95%。

5.2.5β-隱黃質(zhì)（C40H56O，CAS號：472-70-8）：純度≥98%。

5.2.6α-隱黃質(zhì)（C40H56O，CAS號：24480-38-4）：純度≥98%。

5.2.7葉黃素（C40H56O2，CAS號：172-40-2）：純度≥96%。

5.2.8番茄紅素（C40H56，CAS號：502-65-8）：純度≥95%。

5.2.9新黃質(zhì)（C40H56O4，CAS號：14660-91-4）：純度≥97%。

5.2.10紫黃質(zhì)（C40H56O4，CAS號：126-29-4）：純度≥95%。

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5.2.11玉米黃質(zhì)（C40H56O2，CAS號：144-68-3）：純度≥97%。

5.2.12ε-胡蘿卜素（C40H56O4，CAS號：472-89-9）：純度≥98%。

5.2.13環(huán)氧玉米黃質(zhì)（C40H56O3，CAS號：640-03-9）：純度≥95%。

儀器與設備

5.3.1超高效液相色譜：配有DAD二極管陣列檢測器。

5.3.2旋渦混合器。

5.3.3離心機。

5.3.4電子天平：感量0.00001?g。

5.3.5冷凍干燥機。

5.3.6超聲清洗儀。

5.3.7粉碎機。

5.3.8氮吹儀。

材料

微孔濾膜：0.22?μm，有機系。

6分析步驟

通用要求

所有分析操作均應室內(nèi)避光進行。

樣品制備

甘薯和甘薯干切碎，液氮速凍后冷凍干燥，并用粉碎機打粉，樣品儲存在-20℃暗光環(huán)境。甘薯粉

試樣無需處理。

試劑配制

6.3.1標準儲備溶液（200μg/mL）

分別準確稱取類胡蘿卜素單體標準品2g（精確至0.01mg），加入1mgBHT，轉(zhuǎn)移至10mL棕色

容量瓶中，用甲基叔丁基醚稀釋并定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為200μg/mL標準儲備溶液，置于-20℃

避光保存，保存期3個月。

6.3.2標準中間溶液（100μg/mL）

準確移取上述標準儲備液（1.1）5.0mL于10mL棕色容量瓶中，用甲基叔丁基醚定容至刻度，搖

勻，配制成質(zhì)量濃度為100μg/mL標準中間溶液，4℃避光保存，保存期1周。

6.3.3標準系列溶液

分別移取上述標準中間溶液（1.2）0.00mL，0.01mL，0.05mL，0.10mL，0.50mL，1.00mL于

10mL棕色容量瓶中，用甲基叔丁基醚稀釋并定容配成濃度范圍0.0μg/mL~10.0μg/mL的標準系列

溶液。臨用現(xiàn)配。

6.3.4正己烷-丙酮-乙醇提取液

分別準確移取正己烷10.0mL、丙酮10.0mL、乙醇10.0mL于棕色磨口瓶中，混合均勻獲得體積

比為1：1：1的正己烷-丙酮-乙醇提取液。

試樣提取

稱取0.5g已充分混勻的試樣粉末至15mL離心管中，加入5?mL含0.01%BHT(g?mL-1)的乙醇-丙酮-正

己烷提取液（6.3.4）進行提取，并于室溫下充分震蕩混勻。室溫下漩渦振蕩2?min，于4℃條件下，2500?g

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離心5?min，然后將上清液轉(zhuǎn)移至新的15?mL離心管中；重復以上提取步驟2次，將離心后上清液合并；

用氮吹儀氮吹至干，得到類胡蘿卜素。再用1?mL含有0.01%BHT(g?mL-1)的甲基叔丁基醚溶液復溶，超聲

震蕩10min使其完全溶解，用0.22μm濾膜過濾后，保存在棕色進樣瓶中，用于液相色譜分析。

色譜條件

超高效液相色譜（5.3.1）色譜條件如下：

a)色譜柱：YMCCarotenoidC30色譜柱，柱長250mm，內(nèi)徑2mm，粒徑3μm；

b)流動相A相：甲醇和乙腈(1∶3)，加入0.01%BHT)(gmL-1)和0.1%甲酸，流動相B相為甲基叔

丁基醚加入0.01%BHT(gmL-1)，洗脫梯度按表1進行；

c)流速為0.8mLmin-1；

d)檢測波長為450nm；

e)柱溫為23℃；

f)進樣體積為1μL。

表1梯度洗脫條件

流動相比例

時間/min

A%B%

08515

1.08020

2.07030

3.05545

4.04060

5.02575

5.108515

8.08515

標準曲線繪制

將13種類胡蘿卜素標準系列溶液（6.3.3）注入高效液相色譜儀中，得到峰面積，以類胡蘿卜素標

準品的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制不同類胡蘿卜素的標準曲線。

試樣測定

將待測液（6.4）注入高效液相色譜儀中，得到峰面積，根據(jù)標準曲線得到待測液中13種類胡蘿卜

素單體濃度。以甘薯塊根為例的樣品高效液相色譜圖見附錄B。

7數(shù)據(jù)處理

試樣中13種類胡蘿卜素單體的含量Xi的計算按式（1）進行：

式中:CV

??=????????(1)

1000M

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Xi——為甘薯塊根中類胡蘿卜素的含量，單位為微克每克（μg/g）;

C——為通過標準曲線計算的到的類胡蘿卜素含量，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V——為塊根類胡蘿卜素提取時復溶液的體積；

M——為塊根類胡蘿卜素提取時所使用到的樣品重量。

計算結果以重復性條件下獲得的三次獨立測定結果的算術平均值表示。

8精密度

在重復性條件下獲得的三次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。

9檢出限和定量限

當取樣量為0.5g、復溶體積為1mL，13種類胡蘿卜素單體的檢出限、定量限和加標回收率如表2所示：

表213種類胡蘿卜素單體檢出限、定量限和加標回收率

類胡蘿卜素檢出限(μgmL1)定量限(μgmL1)加標回收率%

紫黃質(zhì)0.0030.009122.38

新黃質(zhì)0.0040.01585.80

環(huán)氧玉米黃質(zhì)0.0040.015108.02

葉黃素0.0030.012108.41

玉米黃質(zhì)0.0050.016118.38

α-隱黃質(zhì)0.0030.01101.00

ε-胡蘿卜素0.0030.011103.45

β-隱黃質(zhì)0.0040.01296.47

α-胡蘿卜素0.0030.0198.44

β-胡蘿卜素0.0040.01284.61

δ-胡蘿卜素0.0030.01192.90

γ-胡蘿卜素0.0050.01698.67

番茄紅素0.0180.0693.13

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A

A

附錄A

（規(guī)范性）

標準溶液濃度的校正

A.1試驗步驟

使用前，應對葉黃素、玉米黃質(zhì)、α-隱黃質(zhì)、β-隱黃質(zhì)、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素、番茄紅素

的標準儲備液的濃度進行校正，具體操作如下：

分別取葉黃素、β-隱黃質(zhì)標準儲備溶液（濃度約為200μg/ml）50μl,注入含10ml乙醇的1cm比色

皿中。以乙醇為空白，按表A.1中檢測波長測定其吸光度值，平行測定三次，取平均值。

取玉米黃質(zhì)標準儲備溶液（濃度約為200μg/ml）50μl，注入含10ml甲醇的1cm比色皿中。以甲醇

為空白，按表A.1中檢測波長測定其吸光度值，平行測定3次，取平均值。

分別取α-隱黃質(zhì)，α-胡蘿卜素，β-胡蘿卜素和番茄紅素標準儲備溶液（濃度約為200μg/ml）50

μl，注入含10ml正己烷的1cm比色皿中。以正己烷為空白，按表A.1中檢測波長測定其吸光度值，平行

測定三次，取平均值。

表A.1各類胡蘿卜素測定波長及比吸光系數(shù)

目標物檢測波長（nm）E稀釋溶劑

葉黃素4450.2550乙醇

玉米黃質(zhì)4490.2620甲醇

α-隱黃質(zhì)4450.2636正己烷

β-隱黃質(zhì)4450.2460乙醇

α-胡蘿卜素4460.2725正己烷

β-胡蘿卜素4500.2620正己烷

番茄紅素4700.3450正己烷

A.2結果計算

按（A.1）計算標準溶液質(zhì)量濃度：