《輻照法滅活烈性病毒劑量確定方法》

ICS67.020

CCSX04

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/CIRAXXXXX—2023

輻照法滅活烈性病毒劑量確定方法

Methodfordeterminingtheinactivationdoseofvirulentvirusbyirradiation

點(diǎn)擊此處添加與國際標(biāo)準(zhǔn)一致性程度的標(biāo)識

（征求意見稿）

2023/11/6

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

中國同位素與輻射行業(yè)協(xié)會發(fā)布

T/CIRAXXXXX—2023

輻照法滅活烈性病毒劑量確定方法

1范圍

本文件規(guī)定了輻照設(shè)備要求、病毒滅活評價方法與結(jié)果判定、類比病毒預(yù)備試驗(yàn)、烈性病毒輻照滅

活試驗(yàn)等規(guī)范要求。

本文件適用于在BSL3、BSL4實(shí)驗(yàn)室，使用小型加速器輻照裝置確定烈性病毒最低有效滅活劑量的實(shí)

驗(yàn)方法。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版）衛(wèi)生部(衛(wèi)法監(jiān)發(fā)〔2002〕282號)

WS/T775-2021新型冠狀病毒消毒效果實(shí)驗(yàn)室評價標(biāo)準(zhǔn)

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

病毒滅活virusinactivation

通過物理或化學(xué)方法使病毒失去感染性。

3.2

吸收劑量absorbeddose

電離輻射授予質(zhì)量為dm的物質(zhì)的平均能量dε除以物質(zhì)質(zhì)量dm的商。吸收劑量單位為“戈瑞”符號為

Gy，1Gy=1J/kg。

3.3

最低有效滅活劑量minimumeffectivedose

為達(dá)到滅活病毒目的所需要的最低吸收劑量，即工藝劑量下限值。

3.4

病毒滴度Virustiter

單位體積液體中具有感染能力病毒的數(shù)目。

3.5

TCID50（Mediantissuecultureinfectivedose）

半數(shù)組織培養(yǎng)感染劑量,即指能在半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)板孔引起細(xì)胞病變(cytopathiceffect,CPE)的病毒量，

是病毒滴度常用的測量方法。

4輻照設(shè)備要求

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4.1技術(shù)要求

使用小型電子加速器對病毒進(jìn)行滅活處理，設(shè)備要求如下：

a)電子束能量大于150keV；

b)單次輻照吸收劑量0～150kGy；

c)泄露劑量：＜1.0uSv/h（距離設(shè)備表面10cm處）；

d)設(shè)備尺寸能進(jìn)入BSL3、BSL4實(shí)驗(yàn)室。

4.2使用要求

a)使用單位應(yīng)取得《輻射安全許可證》或地方環(huán)保部門的行政許可；

b)操作人員需參加設(shè)備操作的專題培訓(xùn)。

5病毒滅活評價方法與結(jié)果判定

5.1試驗(yàn)原理

用細(xì)胞感染法測定輻照處理前后（或?qū)φ战M與實(shí)驗(yàn)組）樣本中病毒的量。以細(xì)胞病變作為判斷指標(biāo)，

使用TCID50方法確定各組病毒的感染滴度，觀察不同輻照吸收劑量對病毒的滅活效果。

5.2病毒感染性定量測定方法

TCID50細(xì)胞體外感染法，用Behrens和Karber法計(jì)算TCID50值。

5.3病毒滅活輻照劑量判定

滅活試驗(yàn)結(jié)果符合以下全部條件，可判定輻照滅活病毒的有效性：

a)陰性對照組細(xì)胞生長正常；

b)陽性對照組病毒滴度對數(shù)值應(yīng)≥4.0；

c)滅活試驗(yàn)組細(xì)胞無病變，與陰性對照組細(xì)胞生長情況一致。

其中滿足上述判定標(biāo)準(zhǔn)獲得的輻照劑量做小值，即為最低有效輻照滅活劑量。

6類比病毒預(yù)備試驗(yàn)

6.1類比病毒篩選

對烈性病毒進(jìn)行輻照滅活試驗(yàn)時，可先選用類比病毒進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，具體如下：

a)所選類比病毒應(yīng)和擬開展試驗(yàn)的烈性病毒屬于同一種屬；

b)所選類比病毒應(yīng)屬于低致病性或宿主為非靈長類的病毒，可在低安全等級實(shí)驗(yàn)室開展相關(guān)試驗(yàn)。

6.2類比試驗(yàn)要求

a)對類比病毒采取的輻照滅活試驗(yàn)方法、條件等應(yīng)與擬開展試驗(yàn)的烈性病毒一致，輻照滅活劑量結(jié)

果以供后續(xù)參考；

b)最終結(jié)果以擬進(jìn)行輻照滅活試驗(yàn)的烈性病毒為準(zhǔn)，類比病毒試驗(yàn)結(jié)果僅供參考。

7烈性病毒輻照滅活試驗(yàn)

7.1病毒載體材料

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不銹鋼鋼片和聚丙烯塑料片。不銹鋼鋼片為12mm直徑圓形片(厚0.5mm)，聚丙烯塑料片為10mm

×10mm方形。

7.2操作步驟

a)病毒載體的制備:取滅菌載體片，滴染病毒晾干備用。

b)滅活試驗(yàn):取病毒載體置于細(xì)胞培養(yǎng)板中，并進(jìn)行密封處理，再放入小型輻照儀器內(nèi)腔中，設(shè)置

輻照劑量后，作用至規(guī)定的時間取出，放入1mL維持培養(yǎng)基中，作用10min,混勻洗脫。

c)對照組試驗(yàn):陽性對照組為病毒對照組，觀察病毒生長是否良好，病毒滴度是否達(dá)到試驗(yàn)要求；

陰性對照組用維持培養(yǎng)基作為陰性對照，觀察有無污染，細(xì)胞生長是否良好。

d)以上各組按照終點(diǎn)稀釋法分別進(jìn)行病毒滴度測定。試驗(yàn)重復(fù)3次。

e)根據(jù)5.2測定方法和5.3判定標(biāo)準(zhǔn)，確定2種載體下最低有效滅活劑量，最后取兩者較大者為試驗(yàn)

滅活劑量。

具體參照《新型冠狀病毒消毒效果實(shí)驗(yàn)室評價標(biāo)準(zhǔn)》中載體制備和載體法滅活試驗(yàn)。

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附錄A

（規(guī)范性附錄）

輻照設(shè)備劑量標(biāo)定方法

一、劑量計(jì)：采用GEX公司生產(chǎn)的B3薄膜劑量片。

二、測試儀器和工具：

1、分光光度計(jì)：能提供520光波波長；波長精度±2；波長重復(fù)性≤1；投射比準(zhǔn)確度

±0.5%（T）（SRM930D）；透射比重復(fù)性0.3%（T）；光譜帶寬6；雜光≤0.5%（T）（360，）。

2、烘箱：烘箱內(nèi)部帶有風(fēng)機(jī)；溫度控制精度為±1℃；溫度范圍10℃~100℃可調(diào)。（用于對劑量片

進(jìn)行測量前的烘烤加熱）

3、測試支架：安裝于分光光度儀內(nèi)，用于固定劑量薄膜位置。

4、鑷子：用于夾取劑量片，防止其它拿取方式污染薄膜劑量片。

5、手套：無粉乳膠手套。（用于保證操作過程中不污染薄膜劑量片）

三、測試步驟:

1、將一張A4紙平鋪在托盤上（公司提供的標(biāo)準(zhǔn)高度24mm托盤），要求紙張要與金屬托盤貼合在一

起。

2、將紙張多余部分去除。

3、在托盤上標(biāo)注數(shù)個測量點(diǎn)。測量點(diǎn)要求以托盤正中心為中間點(diǎn)，紙張長方向的對稱軸（穿過中

心點(diǎn)）為測量點(diǎn)中心點(diǎn)，然后像左、右間隔60mm標(biāo)注一個測量點(diǎn)（一側(cè)1個，共3個點(diǎn)）。如下圖所示：

托盤上劑量片放置點(diǎn)位示意圖

4、劑量片標(biāo)注位置標(biāo)注好后將劑量片放置于點(diǎn)的正中。如下圖所示：

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劑量片在托盤上的放置位置示意圖

注意：托盤紙張上面除放置劑量片（以及固定劑量片的紙膠帶）外不得放置其它物品。它會對劑量

片接收的劑量產(chǎn)生干擾。

5、劑量片放置好后需要對其進(jìn)行固定（設(shè)備在輻照時設(shè)備會通入氮?dú)?，流動的氮?dú)鈺⑤p薄的劑

量片吹移位置）。固定方法是在劑量片的邊緣采用紙膠帶粘接固定。粘接固定需要固定在對角上的兩個

點(diǎn)，同時需要注意劑量片要平貼在A4紙上。粘接方法如下圖所示：

劑量片紙膠帶粘接方法示意圖

6、劑量片固定好后邊可以放入設(shè)備進(jìn)行劑量測量標(biāo)定

7、標(biāo)定劑量均勻性時，啟動設(shè)備，點(diǎn)擊裝樣，待載物小車出來后將托盤放在小車上，設(shè)置好能量

和劑量點(diǎn)擊啟動。

8、輻照完成后將劑量片依次貼在紙上其放入烘箱（烘箱溫度60℃）保溫15分鐘，然后采用分光

光度儀讀取參數(shù)δ。分光光度儀使在用前需要預(yù)熱30分鐘。

9、在使用分光光度儀讀數(shù)前需要對儀器進(jìn)行校驗(yàn)。首先打開電源開關(guān)等待30分鐘預(yù)熱，預(yù)熱完成

后按下述步驟操作：

A、按“MODE”鍵進(jìn)入“T”檔。

B、蓋上蓋子，按“ABS0/100%T”鍵，顯示“100.0”。

C、打開蓋子，放入黑塊，再蓋上蓋子，按“0%T”鍵，顯示“000.0”。

D、拿出黑塊，按“MODE”鍵，回到“ABS”。

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在完成上述操作就可以進(jìn)行劑量片的讀數(shù)了。

10、開始對劑量片進(jìn)行測量時，首先用鑷子夾取劑量片放入分光光度儀里，蓋上蓋子，讀取屏幕上

的參數(shù)做好記錄。然后用參數(shù)的劑量對照表讀取三個讀取參數(shù)、、分別所對應(yīng)的劑量讀

數(shù)值記為、。然后根據(jù)下面公式計(jì)算輻照平均劑量。

D1D2、D3

DDD

D123

3