DB37T 3674-2019 飼料中維生素A、維生素D3、維生素E的同步快速測定 高效液相色譜法　　

DB37DB37/T3674—2019步快速測定高效液相色譜法2019-08-30發(fā)布2019-09-30實施山東省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 1 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 4 5 5 71本方法定量限：維生素A乙酸酯為10000IU/kg；維生素D3為40000IU/kg；維生素E乙酸酯為10024.7維生素E標準工作溶液（1mg/mL稱取DL-а-生育酚乙酸酯）：待冷卻至室溫后，準確加入100mL正己烷（4.2加蓋、劇烈振搖（頻率250次/min）15置分層后再次準確加入100mL正己烷（4.2），重復提取一次，靜置；待正己烷層變澄清透明，且中間37.3液相色譜參考條件色譜柱：C18,長250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5μm,或性能相當者。柱溫：30℃;流速：1.0mL/min;檢測波長：維生素A乙酸酯325nm;維生素D?264nm;維生素E乙酸酯285nm。7.4標準系列溶液7.4.1維生素A標準系列溶液：準確移取適量標準工作液(4.8)于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋定7.4.2維生素Ds標準系列溶液：準確移取適量標準工作液(4.9)于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋7.4.3維生素E標準系列溶液：準確移取適量標準工作溶液(4.7)于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋按照7.3給出的色譜參考條件，依次上機測定標準系列溶液和試樣溶液。生素Ds和維生素E的濃度為橫坐標，以其響應值(峰面積)為縱坐標，繪制標準曲線，標準曲線相關系8試驗數(shù)據(jù)處理8.1維生素A乙酸酯含量8.1.1試樣中維生素A乙酸酯的含量w1質(zhì)量分數(shù)[國際單位(或毫克)每千克(IU或mg/kg)]表示，單點校準按式(1)計算：m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);V——定容體積，單位為毫升(mL);n?——稀釋倍率；4Pr——維生素A乙酸酯標準工作液濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);P?——試樣溶液峰面積值；8.1.2試樣中維生素A乙酸酯的含量w1質(zhì)量分數(shù)[國際單位(或毫克)每千克(IU或mg/kg)]表示，多點校準按式(2)計算：m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);V——定容體積，單位為毫升(mL);n?——稀釋倍率；c?——由標準曲線查得試樣中待測物色譜峰面積對應的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);f?——轉(zhuǎn)換系數(shù)，1國際單位(IU)相當于0.344μg維生素A乙酸酯。8.2維生素D?含量8.2.1試樣中維生素Ds含量w2質(zhì)量分數(shù)[國際單位(或毫克)每千克(IU或mg/kg)]表示，單點校準按式(3)計算：m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);V——定容體積，單位為毫升(mL);P?——維生素D?標準工作液濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);Ps——試樣溶液峰面積值；8.2.2試樣中維生素Ds含量w2質(zhì)量分數(shù)[國際單位(或毫克)每千克(IU或mg/kg)]表示，多點校準按式(4)計算：m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);V——定容體積，單位為毫升(mL);n?——稀釋倍率；5C?——由標準曲線查得試樣中待測物色譜峰面積對應的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);8.3維生素E乙酸酯含量8.3.1試樣中維生素E乙酸酯含量w3質(zhì)量分數(shù)[國際單位(或毫克)每千克(IU或mg/kg)]表示，單點校準按式(5)計算：m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);V——定容體積，單位為毫升(mL);n?——稀釋倍率；Ps——維生素E乙酸酯標準工作液濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);fs——轉(zhuǎn)換系數(shù)，轉(zhuǎn)換系數(shù)，1國際單位(IU)維生素E相當于1.0mgdl-α-生育酚乙酸酯。8.3.2試樣中維生素E乙酸酯含量w3質(zhì)量分數(shù)[國際單位(或毫克)每千克(IU或mg/kg)]表示，多點校準按式(6)計算：m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);V——定容體積，單位為毫升(mL);C?——由標準曲線查得試樣中待測物色譜峰面積對應的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);f?——轉(zhuǎn)換系數(shù)，轉(zhuǎn)換系數(shù)，1國際單位(IU)維生素E相當于1.0mgdl-a-生育酚乙酸酯。9精密度在重復性條件下兩次獨立測試結(jié)果與其算術平均值的絕對差值不大于該算術平均值的10%。6(規(guī)范性附錄)維生素A乙酸酯、維生素D?、維生素E乙酸酯標準溶液濃度校正方法a)取維生素A乙酸酯標準儲備液(1000μg/mL)100ul于100mL的棕色容量瓶中，用異丙醇定容至刻度，混勻，取1cm石英比色杯，以異丙醇為空白參比，按照表A.1的測定波長測定b)取維生素Ds標準儲備液(1000μg/mL)100ul于100mL的棕色容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，混勻，取1cm石英比色杯，以無水乙醇為空白參比，按照表A.1的測定波長測定其c)取維生素E乙酸酯標準儲備液(1000μg/mL)100ul于10mL的棕色容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，混勻，取1cm石英比色杯，以無水乙醇為空白參比，按照表A.1的測定波長X——維生素標準稀釋液濃度，單位為μg/mL;10——換算系數(shù)；表A.1測定波長及百分吸光系數(shù)目標物維生素D?7(資料性附錄)維生素A乙酸酯、維生素D?和維生素E乙酸酯標準溶液的高效液相色譜圖維生素A乙酸酯標準溶液的高效液相色譜圖見圖B.1。7葉圖B.1維生素A乙酸酯標準溶液色譜圖(濃度為1000μg/mL)維生素D?標準溶液的高效液相色譜圖見圖B.2。商1圖B.2維生素D?標準溶液色譜圖(濃度為1000μg/mL)維生素E乙酸酯標準溶液的高效液相色譜圖見圖B.3。姓歉乙即姓歉