DB37T 3531-2019 羊奶中羊、大豆源性成分的定性檢測(cè)方法 實(shí)時(shí)熒光PCR法　　

DB37Identificationofcaprine，sheepandReal-timefluorescentPCRmet山東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 1 1 2 2 2 3 3 3 3 3 4 4 4 4 5 71羊奶中羊、大豆源性成分的定性檢測(cè)方法實(shí)時(shí)熒光PCR法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了羊奶產(chǎn)品中羊、大豆源性成分的實(shí)時(shí)熒光定性PCGB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格GB/T27403實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品分子生物學(xué)檢測(cè)25.2材料103.4KPa蒸汽壓（121℃)滅菌20min，降至室溫，4℃保存?zhèn)溆谩?03.4KPa蒸汽壓（121℃)滅菌20min，室溫保存待用。0.5mol/L乙二胺四乙酸二鈉（pH103.4KPa蒸汽壓（121℃)滅菌20min，降至室溫，4℃保存?zhèn)溆谩?.4振蕩型恒溫金屬?。?℃~100℃。36.6低溫冰箱：-20℃~4℃。6.9容量瓶：10mL，50mL，1將樣品于4℃、2500g離心30min；棄去離心管的上層乳脂和中間層乳液，保留其底部沉淀，向底部加lmLpH7.4滅菌的PBS緩沖液，將底部沉淀吹打懸浮并轉(zhuǎn)移至1.5mL的離心管中，離心力3500g，源性的特異探針，并加入內(nèi)標(biāo)質(zhì)控體系。反應(yīng)體系見附錄A中表A43000g離心1min，取出PCR9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理9.2檢測(cè)結(jié)果分析和表述需要加大模板量進(jìn)行PCR反應(yīng)。若再次擴(kuò)增后的5A.1實(shí)時(shí)熒光定性PCR引物和探針序列CTCTACTCCACCCCCATCCAGAAAGAAGGCAAGCCCATCTGAAGACGAGAAGACCGTATGGAGGATTGCGCTGTTATCCCTAGGACCGTTACCGAGTCCAGGTG5’FAM-CGCCGCTTCCTTCAACTTCACGCGGCG-5’ROX-CCACCAAGGGATAACAACACTCTGGTG5’CY5-CGACGGTCCTTTCTAATGTTGCGTCA.2實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體系221-3ng/μL2A.3對(duì)各種樣品檢測(cè)結(jié)果的判定6+-+未檢出大豆源性成分或含-+未檢出羊源性成分或含量++檢出大豆和羊源性成分未檢出大豆和羊源性成分-->35，判定為未檢出羊和大豆源性成分。---①如果同時(shí)進(jìn)行的陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)結(jié)果正常，②如果同時(shí)進(jìn)行的陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)結(jié)果不正常，7B.1大豆（Glycinemax）PCR產(chǎn)物序列（GenBank:NM_001354824.1）大豆（Glycinemax）PCR產(chǎn)物序列（GenBank:NM_001354824.1）CTCTACTCCACCCCCATCCACATTTGGGACAAAGAAACCGGTAGCGTTGCCAGCTTCGCCGCTTCCTTCAACTTCACCCCCCTGACACAAAAAGGCTTGCAGATGGGCTTGCCTTB.2山羊（Caprahircus）PCR產(chǎn)物序列（GenBank:KY52351山羊（Caprahircus）PCR產(chǎn)物序列（GAAGACGAGAAGACCCTATGGAGCTTTAACTAACTAGTCCAAAAGAAATAAATTTAACCACTAAGGGATAACAACATCCTTTAACTAGCAGTTTTGGTTGGGGTGACCTCGGAGAACAAGAGATCCTCCGAGCGATTTTAAAGACTAGACTTACAAGTCAAATCAAATTGCTTATTGATCCAAAAAACTTGATCAACGGAACAAGTTACCCTAGGGATAACAGCGCAATCB.3綿羊（Ovisaries）PCR產(chǎn)物序列（GenBank:KP702285.綿羊（Ovisaries）PCR產(chǎn)物序列（GenBank:KP702AAGACGAGAAGACCCTATGGAGCTTTAACTAAGTAACTCAAGGAAAATAAATTCAACCACCAAGGGATAACAACACTCCTTAGTTAACAGTTTCGGTTGGGGTGACCTCGGAGAACAGAAAATCCTCCGAGCGATTTTAAAGACTAGACTAACAAGTCAAACCAGCTTATTGATCCAAAAACTTGATCAACGGAACAAGTTACCCTAGGGATAACAGCGACCGTTACCGAGTCCAGGTGAGACCACCAAATGCCCCTATCTTATCAACACTTCCGGACGACGGTCCTTTCTAATGTTGCGT