醫(yī)學(xué)教程 項目42食品中獸藥殘留檢測

液相色譜儀的使用食品中獸藥殘留檢測——動物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測獸藥：是指用于預(yù)防、治療、診斷動物疾病或者有目的地調(diào)節(jié)動物生理機能的物質(zhì)，主要包括：血清制品、疫苗、診斷制品、微生態(tài)制品、中藥材、中成藥、化學(xué)藥品、抗生素、生化藥品、放射性藥品及外用殺蟲劑、消毒劑等。獸藥殘留：是指食品動物用藥后，動物產(chǎn)品的任何可食用部分中所有與藥物有關(guān)的物質(zhì)的殘留，包括藥物原形或/和其代謝產(chǎn)物。課程導(dǎo)入常見的幾類獸藥殘留藥物抗生素類青霉素、四環(huán)素抗生素，還包括抗真菌藥以及氟喹諾酮類藥物β-激動劑類磺胺類藥物硝基呋喃類藥物激素類俗稱瘦肉精，有鹽酸克倫特羅、萊克多巴、沙丁胺醇等11種磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺脒、菌得清、新諾明等呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林孕酮、睪酮、雌二醇等課程導(dǎo)入私用含獸藥的飼料及飼料添加劑不恰當(dāng)用藥隨意加大藥物用量用藥錯誤或未做用藥記錄沒有按規(guī)定執(zhí)行應(yīng)有的休藥期使用未經(jīng)批準(zhǔn)的或禁用的獸藥屠宰前使用獸藥（通常屠宰前10天要禁藥）食品加工過程受到污染（如食品保鮮）獸藥殘留原因畜禽末次給藥到允許屠宰或他們的產(chǎn)品（乳/蛋等）許可上市的間隔時間，通常4-7天課程導(dǎo)入獸藥殘留危害長期食用獸藥殘留超標(biāo)的食品

當(dāng)體內(nèi)蓄積的藥物濃度達(dá)到一定量

產(chǎn)生多種急、慢性中毒氨基糖苷類抗生素—導(dǎo)致藥源性聾四環(huán)素類—抑制牙齒生長致癌、致畸等撒兒童性早熟磺胺類藥物—破壞人體造血機能，白血?。ㄖ掳┘に亍逝?、兒童性早熟課程導(dǎo)入獸藥限量要求替代農(nóng)業(yè)部公告第235號《動物性食品中獸藥最高殘留限量》相應(yīng)部分是我國監(jiān)管食品中獸藥殘留的唯一強制性國家標(biāo)準(zhǔn)2020年4月1日正式實施課程導(dǎo)入獸藥檢測方法高效液相色譜法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法氣相色譜法氣相色譜法-質(zhì)譜法同時檢測多種類型的獸藥殘留

定性、精確定量課程導(dǎo)入學(xué)習(xí)高效液相色譜法測定動物性食品中的氟喹諾酮類藥物殘留量檢測任務(wù)農(nóng)業(yè)部1025號公告-14-2008適用范圍適用于豬的肌肉、脂肪、肝臟和腎臟，雞的肝臟和腎臟組織中達(dá)氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星藥物殘留檢測。檢測依據(jù)用磷酸緩沖鹽溶液提取試料中的藥物提取C18柱凈化凈化流動相洗脫以磷酸-乙腈為流動相洗脫用高效液相色譜—熒光檢測法測定，外標(biāo)法定量測定測定原理具體工作任務(wù)分解子任務(wù)二：樣品的凈化子任務(wù)一：樣品的制備與提取子任務(wù)三：液相色譜測定子任務(wù)四：數(shù)據(jù)分析與結(jié)果計算子任務(wù)五：結(jié)果判定操作步驟動物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測任務(wù)一：樣品的提取離心機漩渦振蕩器液相色譜儀固相萃取儀固相萃取柱主要儀器設(shè)備1.樣品的提取1.樣品的提取樣品，切成小塊，放入攪拌機中，打漿準(zhǔn)確稱取2±0.05g樣品于50mL具塞離心管中旋渦振蕩器上中速振蕩5min準(zhǔn)確加入20.0mL磷酸鹽緩沖液離心管配平離心，10000轉(zhuǎn)/min，離心5min將上清液倒入50mL燒杯中，以備過柱用1.樣品的提取動物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測任務(wù)二：樣品的凈化將固相萃取柱在固相萃取儀上安裝好加2.0mL甲醇于固相萃取柱中當(dāng)水快要滴干時加5.0mL上清液，流速控制在1-2mL/min當(dāng)甲醇快要滴干時，再加2.0mL水快要滴干時，加2.0mL水淋洗，滴完后，擠干將5mL試管安裝于固相萃取儀上，用于接收用2.0mL流動相洗脫，收集洗脫液，滴完后，擠干用0.2um濾膜過濾至樣瓶中固相萃取柱填料上面不能完全干，除非要求擠干2.樣品的凈化本方法樣品的凈化采用“固相萃取技術(shù)”；1固相萃取過程中，固相萃取柱要先活化、平衡；2活化、平衡、上樣、淋洗過程柱子篩板上的液體不能流干，防止空氣進入。4樣品上樣和洗脫過程中，要注意控制流速，1mL-2mL/min；3樣品凈化過程中注意事項2.樣品的凈化動物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測任務(wù)三：液相色譜檢測流動相高壓輸液系統(tǒng)分離系統(tǒng)進樣系統(tǒng)檢測系統(tǒng)記錄系統(tǒng)液相色譜的構(gòu)造色譜柱3.液相色譜檢測●色譜條件：（1）色譜柱：C18250mm×4.6mm，粒徑5μm，或者相當(dāng)者；（2）流動相：0.05mol/L磷酸溶液/三乙胺：乙腈（82：18，v/v）；（3）流速：0.8mL/min；（4）進樣量：20μL；（5）柱箱溫度：25℃；（6）熒光檢測器：激發(fā)波長280nm，發(fā)射波長450nm。色譜柱儀器：液相色譜儀液相色譜條件3.液相色譜檢測動物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測子任務(wù)四：數(shù)據(jù)分析色譜分析：由自動進樣器分別吸取20μL對照品標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及試樣凈化液注入液相色譜儀中，記錄色譜峰，以保留時間定性，以試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作液的峰面積（或峰高）比較定量。標(biāo)注品譜圖100μg/L環(huán)丙沙星、恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖4.數(shù)據(jù)分析樣品中是否有氟喹諾酮類藥物殘留?如果有，是哪一種氟喹諾酮類藥物？具體的含量是多少？4.數(shù)據(jù)分析項目名稱樣品名稱接樣日期設(shè)備檢驗日期檢驗依據(jù)農(nóng)業(yè)部1025號公告-14-2008樣品質(zhì)量M（g）提取用磷酸鹽緩沖溶液的總體積V1（mL）過C18固相萃取柱所用備用液體積V2（mL）洗脫用流動相體積V3（mL）樣品溶液中相應(yīng)藥物的峰面積A對照溶液中藥物的濃度Cs（ng/mL）對照溶液中相應(yīng)藥物的峰面積As計算公式X（μg/㎏）=試樣中氟喹諾酮

的殘留量X（μg/㎏）試樣中氟喹諾酮

殘留量平均值（μg/㎏）標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定分析結(jié)果的精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。本次實驗分析結(jié)果的精密度原始記錄表4.數(shù)據(jù)分析X（μg/㎏）=式中：X——樣品中環(huán)丙沙星或恩諾沙星的殘留量，單位為微克每千克（μg/㎏）；A——樣品溶液中相應(yīng)藥物的峰面積；As——對照溶液中相應(yīng)藥物的峰面積；Cs——對照溶液中藥物的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；V1——提取用磷酸鹽緩沖溶液的總體積，單位為毫升（mL）；V2——過C18固相萃取柱所用備用液體積，單位為毫升（mL）；V3——洗脫用流動相體積，單位為毫升（mL）M——樣品的質(zhì)量，單位為克（g）。測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。計算公式4.數(shù)據(jù)分析GB31950-2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》規(guī)定了三類獸藥：判定依據(jù)不需要制定最大殘留限量允許使用如醋酸、安絡(luò)血、氫氧化鋁、硼砂、硫酸鋅等但需要制定最大殘留限量允許使用如阿莫西林、四環(huán)素類、磺胺類、氟喹諾酮類動物的任何可食用組織不得檢出允許治療使用如鎮(zhèn)定劑類，激素類4.數(shù)據(jù)分析藥物名動物種類靶組織殘留限量（μg/kg）恩諾沙星豬